紅葡萄酒中合成色素的測(cè)定研究

時(shí)光霞，劉郁，劉連新，岑朝健

（徐州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇徐州221140）

紅葡萄酒，酒色分為深紅，鮮紅，寶石紅等，用葡萄果實(shí)或葡萄汁，經(jīng)過發(fā)酵釀制而成的酒精飲料。在水果中，由于葡萄的葡萄糖含量較高，貯存一段時(shí)間就會(huì)發(fā)出酒味，因此常常以葡萄釀酒。葡萄酒是目前世界上產(chǎn)量最大、普及最廣的單糖釀造酒。紅葡萄酒由于色澤喜慶，更是人們喜歡的葡萄酒之一。

隨著葡萄酒工業(yè)化生產(chǎn)和社會(huì)對(duì)產(chǎn)品的需求，為了使得葡萄酒的顏色更好，有些葡萄酒添加了一定量的合成色素。合成色素即人工合成的色素，其優(yōu)點(diǎn)不少，如色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，色調(diào)多樣，但它有一個(gè)大缺點(diǎn)，即具毒性（包括毒性、致瀉性和致癌性）。這些毒性源于合成色素中的砷、鉛、銅、苯酚、苯胺、乙醚、氯化物和硫酸鹽，它們對(duì)人體均可造成不同程度的危害。目前我國允許使用的合成色素有莧菜紅、胭脂紅、檸檬黃、日落黃和靛藍(lán)。它們分別用于果味水、果味粉、果子露、汽水、配制酒、紅綠絲、罐頭，以及糕點(diǎn)表面上彩等。這些合成色素的確把食品表面裝扮的格外惹人喜愛，但是，它們禁止用于下列食品：肉類及其加工品（包括內(nèi)臟加工品）、魚類及其加工品、水果及其制品（包括果汁、果脯、果醬、果子凍和釀造果酒）、調(diào)味品、嬰幼兒食品、餅干等。在葡萄酒中主要含有的合成色素主要包括：檸檬黃、莧菜紅、日落黃、胭脂紅。本研究主要測(cè)定了這四種色素，依據(jù)的方法是國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.35-2003食品中合成著色劑的測(cè)定。

1 儀器與試劑

日本島津LC-10AT型高效液相色譜儀：SPD-10AD紫外可見檢測(cè)器，SIL-10AD自動(dòng)進(jìn)樣器，SCL-10A 系統(tǒng)監(jiān)控器，甲醇（Fisher，色譜純）；乙酸銨（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純）；檸檬黃（GB（E）100001a）、莧菜紅（GB（E）100002a）、胭脂紅（GB（E）100004a）、日落黃（GB（E）100003a）：中國計(jì)量科學(xué)研究院。賽多利斯電子天平220S：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；KQ-100B超聲波清洗儀：昆山市超聲儀器有限公司；購于超市的葡紅萄酒樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC色譜測(cè)試條件[1-3]

色譜柱：THERMO C18（4.6×250 mm，5 μm）、流量：1 mL/min、進(jìn)樣量：10 μL、柱溫：40 ℃、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)254 nm；流動(dòng)相的梯度見表1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取檸檬黃、莧菜紅、日落黃、胭脂紅對(duì)照品0.002 5 g，置于50 mL容量瓶中，先用部分純凈水溶解，超聲10 min，定容，超聲。得50 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 進(jìn)樣精度

按照對(duì)照品溶液制備方法（2.2），配制溶液，按照2.1項(xiàng)下的方法測(cè)定，見表2。

表1 流動(dòng)相組成表Table 1 Mobile phase composition

表2 精密度實(shí)驗(yàn)（n=3）Table 2 Precision experiment（n=3）

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[4]

分別精密移取對(duì)照品溶液 0.50、1.00、2.00、4.00 mL，分別置于5mL的棕色容量瓶中用純凈水稀釋，超聲定容。按照2.1項(xiàng)下的方法測(cè)定，測(cè)試結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)曲線方程見表3所示。HPLC色譜圖見圖1所示。

表3 濃度與面積關(guān)系Table 3 Relationship of concentration and peak area

圖1 合成色素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of standard substance of synthesis colorants

2.5 樣品溶液的配制

取葡萄酒樣品20 mL，用純凈水稀釋在100 mL的容量瓶中，超聲10 min，定容。樣品用0.25 μm的微孔濾膜過濾，得待測(cè)樣品溶液，裝入樣品瓶中，備用。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)[5-6]

取濃度為10 μg/mL的對(duì)照品溶液，放置于室溫陰暗處1、8、24 h，按照2.1項(xiàng)下的方法測(cè)定。結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定，測(cè)試結(jié)果見表4所示。

2.7 樣品含量測(cè)定

取樣品，按照2.1項(xiàng)下的方法測(cè)定。按照回歸的方程進(jìn)行計(jì)算檸檬黃、莧菜紅、日落黃、胭脂紅色素的含量。測(cè)試的結(jié)果見表5所示，色譜圖見圖2所示。

表4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Table 4 Stability experiments

表5 紅葡萄酒中色素的含量Table 5 The content of colorants in red wine

圖2 紅葡萄酒樣品色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram of red wine sample

2.8 結(jié)論

采用GB/T5009.35-2003食品中合成著色劑的測(cè)定方法，測(cè)定紅葡萄酒中的色素。采用的是紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm，流量：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL，流動(dòng)相：0.02 mol/L乙酸銨與甲醇。梯度條件為：甲醇20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%繼續(xù)6 min。市售的很多紅葡萄酒中，都添加了一些合成色素，例如檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃等。通過對(duì)樣品的檢測(cè)來看，基本上添加了一定量的合成色素色素，但是基本沒有產(chǎn)品在商標(biāo)中標(biāo)注了添加合成色素，建議應(yīng)加強(qiáng)對(duì)紅葡萄酒的商標(biāo)標(biāo)注的管理，同時(shí)應(yīng)標(biāo)合成色素的含量，同時(shí)國家標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)給出一個(gè)添加合成色素合理的含量范圍以及能通過色素的鑒定來確定紅葡萄酒產(chǎn)品的品質(zhì)。

3 討論

1）樣品的制備過程是紅葡萄酒直接溶解在純凈水中，之后用微孔濾膜過濾，這樣可以有效的防治濾膜的吸附色素。比采用其他方法更為簡(jiǎn)單，同時(shí)避免了色素的流失，提高了測(cè)試的精度。

2）紅葡萄酒中一般含有的色素主要包括檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃，本研究是把這四種色素混合在一起，同時(shí)測(cè)定4種色素，這樣更為準(zhǔn)確，和樣品的組成也十分相似。

3）合成色素還是比較穩(wěn)定的，在穩(wěn)定性的考察時(shí)，只考慮了1、8、24 h，雖然考察的間隔較大，但是不會(huì)影響穩(wěn)定性。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T5009.35-2003食品中合成著色劑的測(cè)定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1985:1-9

[2]劉郁,劉連新,燕傳勇,等.高效液相色譜法測(cè)定茶飲料中阿斯巴甜的含量[J].現(xiàn)代食品科技,2012,28(12):1810-1812

[3]鐘少樞.HPLC法同時(shí)測(cè)定紅油豆瓣醬中的7種非食用色素[J].現(xiàn)代食品科技,2011,27(8):1047-1048

[4]劉郁,張念潔,劉連新,等.采用HPLC方法測(cè)定氟伐他汀鈉分散片的含量[J].吉林化工學(xué)院學(xué)報(bào),2011,28(1):23-25

[5]王妍,于忠飛,王麗麗.高效液相色譜法測(cè)定山楂糕中色素的方法探討[J].山東化工,2012,41(5):45-47

[6]陸琦.食品人工合成色素檢測(cè)方法改進(jìn)[J].糧食與油脂,2010,23(10):41-43