HPLC法測定森登-9湯中梔子苷的含量

2014-07-30 13:01:32王曉娟

中國民族醫藥雜志 2014年1期

王梅王曉娟

(1.內蒙古婦幼保健院，內蒙古呼和浩特 010020;2.錫盟食品藥品檢驗檢測中心，內蒙古錫林浩特 026000)

蒙成藥森登-9湯由文冠木、梔子、訶子、決明子、苦參、黃柏、川楝子、楓香子、苘麻子等9味藥組成，處方中梔子為主藥成分，梔子苷可作為森登-9湯中含量指標。本文采用HPLC方法對梔子苷進行測定。

1 儀器、材料與試劑

島津SPD-20AT高效液相色譜儀。梔子苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;森登-9湯由鑲黃旗旗蒙醫院提供，森登-9湯模擬樣品自制。乙睛、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測定

2.1 色譜條件:色譜柱天河 C18(250mm ×4.5mm，5μm);乙腈-水-甲醇(12:88:1)為流動相，檢測波長為238nm，流速為1mL·min-1，柱溫為40。C。

2.2 提取時間考察與樣品制備:參照《中國藥典》2005年版一部“三子散”項下梔子苷含量測定的方法，選用甲醇作為提取溶劑精密稱取0.3g，至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)50min，放冷，稱定重量，甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，制得供試品溶液，進行測定。實驗中考察了超聲提取10min、20min、30min、40min、50min、60min 和 70min 不同超聲提取時間對提取效率的影響，結果見表1。

從表1中數據可見，超聲處理50min、60min和70min梔子苷的含量基本一致，故超聲提取時間定為50min。

2.3 專屬性:精密稱取梔子苷對照品15.04mg，置50mL量瓶中，加甲醇(色譜純)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成對照品溶液。在2.1色譜條件下，精密吸取對照品溶液10μL注入液相色譜儀，依法測定。見圖1。

表1 提取效率的考察表

圖1 梔子苷對照品的HPLC圖

取上述模擬陰性對照約0.3g，精密稱定，制成陰性對照液，精密量取續濾液10μl注入液相色譜儀，同法測定。

圖2 陰性對照液的HPLC圖

取森登-9湯，研細，稱取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇(分析純)25mL，密塞，稱定重量，超聲處理50min，放冷，再稱定重量，用甲醇(分析純)補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10μL注入液相色譜儀，同法測定。

圖3 森登-9湯HPLC圖

測定結果:陰性對照色譜圖在與梔子苷對照品以及供試品色譜相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明處方中其它組分對梔子苷的測定無干擾。

2.4 線性關系考察:取梔子苷對照品15mg，精密稱取為15.04mg，置150mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取 0.5、1、2、3、4、5、6mL，分別置 10mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取20μL進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度進行回歸分析，結果梔子苷在0.1003～1.2032μg范圍內呈良好的線性關系。

回歸方程為:Y=1379109.7770X+1331.1041，R2=0.9993

表2 梔子苷的標準曲線數值表

2.5 穩定性試驗取同一份供試品溶液(批號:20090604)，分別在 0h、2h、4h、8h、12h、24h 進行測定，結果見表 3。

表3 不同時間測定樣品中梔子苷的峰面積積分值

從表3中數據可見，梔子苷在24h內的峰面積積分值基本穩定不變。

2.6 精密度:取同一批號供試品(批號:20130508)6份，研細，精密稱取0.3g，按2.2項下的方法制得供試品溶液;另精密稱取梔子苷對照品15.04mg依法制成每1mL含梔子苷30.08ug的溶液作為對照品溶液。分別精密吸取上述溶液各20ul注入色譜儀測定每份供試品含量。按外標法計算含量。平均含量(2.6537mg·g-1)，RSD(%)1.1。

2.7 回收試驗:梔子苷對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品15.04mg，置50m量瓶中，加甲醇制成每1mL含梔子苷0.3008mg的溶液，再分別精密吸取5mL、10mL、15mL分別至 200mL 量瓶中制成 7.52μg·mL-1、15.04μg·mL-1和22.56μg·mL-1梔子苷對照品溶液。取供試品(批號:20130508 含量2.6537mg·g-1)9 份，各約 0.15mg，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，在1-3、4～6、7～9號分別精密加入濃度為0.00752mg·mL 、0.01504mg·mL 、0.02256mg·mL-1的梔子苷對照品甲醇溶液25mL，按2.2項下的方法制得供試品溶液，分別精密吸取上述溶液各20μL注入液相色譜儀進行測定。平均回收率分別為101.1、101.3、98.8，RSD(%)為 0.5、0.3、0.6。