肝細(xì)胞性肝癌血清中MIF、IL-17、IL-10的檢測(cè)及其臨床意義

錢夷婷 吳婷婷

肝細(xì)胞性肝癌血清中MIF、IL-17、IL-10的檢測(cè)及其臨床意義

錢夷婷 吳婷婷

目的 檢測(cè)肝細(xì)胞性肝癌血清中巨噬細(xì)胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、白細(xì)胞介素-17（interleukine-17,IL-17）、白細(xì)胞介素-10（interleukine-10,IL-10）的含量，并探討其臨床意義。方法 選擇50例肝細(xì)胞性肝癌患者設(shè)為觀察組，將30例同期健康體檢者設(shè)為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)2組血清中MIF、IL-17、IL-10的水平。結(jié)果 觀察組MIF、IL-17水平均顯著高于對(duì)照組[（105．41±20．28）vs（23．25±8．81），（88．84±22．74）vs（24．06±11．36），t=31．263、25．668，P＜0．05]；觀察組IL-10水平顯著低于對(duì)照組[（97．58±19．26）vs（242．27±64．79），t=-60．589，P＜0．05]。結(jié)論 血清中MIF、IL-17、IL-10的含量異常與肝細(xì)胞性肝癌關(guān)系密切，對(duì)臨床診斷有指導(dǎo)意義。

肝細(xì)胞性肝癌；MIF；IL-17；IL-10

原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌俗稱原發(fā)性肝癌，是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，對(duì)其腫瘤標(biāo)志物及其相關(guān)基因的檢測(cè)，將有助于原發(fā)性肝癌的早期發(fā)現(xiàn)和診斷，提示腫瘤的嚴(yán)重程度[1-2]，為選擇治療方案提供依據(jù)。本組針對(duì)50例肝細(xì)胞性肝癌患者及30例健康體檢者，進(jìn)行巨噬細(xì)胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)、白細(xì)胞介素-17（interleukine-17，IL-17）、白細(xì)胞介素-10（interleukine-10，IL-10）等炎性標(biāo)志物的檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組將2010年5月～2012年5月蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院的50例肝細(xì)胞性肝癌患者設(shè)為觀察組，將30例同期健康體檢者設(shè)為對(duì)照組。觀察組合并慢性乙型肝炎15例、慢性丙型肝炎13例、乙型肝炎肝硬化10例、丙型肝炎肝硬化7例、酒精性肝炎肝硬化3例、自身免疫性肝炎肝硬化2例；包括男30例、女20例，年齡36～60歲，平均年齡（46.55±12.09）歲；對(duì)照組合并慢性乙型肝炎9例，慢性丙型肝炎7例，乙型肝炎肝硬化6例，丙型肝炎肝硬化5例，酒精性肝炎肝硬化2例，自身免疫性肝炎肝硬化1例；包括男18例，女12例，年齡35～60歲，平均年齡（47.01±15.18）歲。2組無(wú)其它器官嚴(yán)重疾病，一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 將采集的全血靜置冰箱4℃過(guò)夜，然后1000～3000rpm離心10min，取上清，ELISA法定量測(cè)定人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）、IL-17、IL-10水平。實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗MIF抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗MIF抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MIF、IL-17、IL-10水平呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度，即以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS12.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2組血清中MIF、IL-17、IL-10的水平如表1，2組MIF、IL-17、IL-10差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=31.263、25.668、-60.589，P均＜0.05）。

表1 2組血清中MIF、IL-17、IL-10的水平

3 討論

炎癥與腫瘤的關(guān)系不是一個(gè)新問(wèn)題，早在1863年德國(guó)病理學(xué)家就提出了一個(gè)假說(shuō)：腫瘤可能源自慢性炎癥。另一個(gè)假說(shuō)部分基于他的觀點(diǎn)：許多刺激物合并組織損傷導(dǎo)致炎癥的發(fā)生并促進(jìn)細(xì)胞的增殖。盡管我們現(xiàn)在很清楚單一的細(xì)胞增殖并不能導(dǎo)致癌癥的產(chǎn)生，但是處在一個(gè)富含炎癥細(xì)胞、生長(zhǎng)因子、活化的間質(zhì)細(xì)胞、引起DNA損傷物質(zhì)的微環(huán)境中，持續(xù)的細(xì)胞增殖肯定會(huì)增加腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性。在組織損傷過(guò)程中，為了促進(jìn)組織的再生，細(xì)胞增殖能力加強(qiáng)，有DNA損傷或者基因突變的細(xì)胞在富含炎癥細(xì)胞和生長(zhǎng)/存活因子的微環(huán)境中將會(huì)增殖從而導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生，因此有人能稱腫瘤是“永不愈合的創(chuàng)傷”。來(lái)源于細(xì)胞的炎癥介質(zhì)或以顆粒的形式儲(chǔ)存于細(xì)胞內(nèi)，或在致炎因子的刺激下合成分泌。細(xì)胞釋放的炎癥介質(zhì)有：（1）血管活性胺包括組胺和5-羥色胺；（2）花生四烯酸代謝產(chǎn)物包括前列腺素和白細(xì)胞三烯；（3）來(lái)源于白細(xì)胞的活性氧、一氧化氮和溶酶體成分；（4）細(xì)胞因子和趨化因子，主要由淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，也可來(lái)自內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞。

目前，一種產(chǎn)生IL-17的新T細(xì)胞亞類“Th17”T細(xì)胞被證實(shí)在炎癥應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。IL-17通過(guò)與IL-17受體的相互作用活化NF-kB誘導(dǎo)免疫細(xì)胞在外周組織聚集[3]。IL-17也誘導(dǎo)產(chǎn)生許多炎癥后因子，表明IL-17具有局限炎癥和放大炎癥的作用。許多研究已經(jīng)探索IL-17在慢性炎癥與腫瘤中的作用[4-5]。據(jù)報(bào)道，高表達(dá)IL-17的宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞接種于免疫正常的小鼠后，具有較強(qiáng)的腫瘤形成能力。同樣，高表達(dá)IL-17的纖維肉瘤細(xì)胞，其在C57BL/6小鼠中的致瘤性更強(qiáng)、腫瘤生長(zhǎng)更迅速。IL-17的促癌作用主要?dú)w因于它的促血管形成活性。在非小細(xì)胞肺癌中，腫瘤組織中浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞大多表達(dá)IL-17，與腫瘤組織中血管床的增加有關(guān)。然而，IL-17加速宮頸癌生長(zhǎng)也與IL-6的表達(dá)增加以及腫瘤部位巨噬細(xì)胞的聚積有關(guān)。因此，IL-17也可能通過(guò)IL-6來(lái)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。

與IL-17相反，IL-10具有免疫抑制和抗感染的作用。IL-10通過(guò)一種未知的機(jī)制抑制NF-kB，從而抑制炎癥因子TNF-a、IL-6、IL-12的產(chǎn)生，因此不難理解IL-10能夠抑制腫瘤的發(fā)展和演進(jìn)。IL-10介導(dǎo)的抗腫瘤活性在一些研究中得到了證明[6]，例如在腫瘤移植研究中發(fā)現(xiàn)黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌中表達(dá)的IL-10均表現(xiàn)出抗腫瘤效應(yīng)。IL-10可通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡和抑制血管形成產(chǎn)生促進(jìn)腫瘤消退的效果。乳腺癌和卵巢中表達(dá)的IL-10抑制腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散；IL-10抑制腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制之一是調(diào)節(jié)MHC-I類分子的表達(dá)[7]，從而激活和提高，K細(xì)胞介導(dǎo)的溶解腫瘤細(xì)胞作用，而對(duì)腫瘤間質(zhì)細(xì)胞的抑制作用被認(rèn)為是IL-10抑制腫瘤血管形成的機(jī)制。IL-10下調(diào)基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生VEGF、TNF-a、IL-6，這也許可以解釋它對(duì)腫瘤的這一抑制作用。

MIF一直被認(rèn)為是一個(gè)神秘的細(xì)胞因子，是集細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、激素和酶特性于一身的多效能蛋白分子-。MIF高度保守，在多種急慢性炎癥性疾病中發(fā)揮多種免疫功能。越來(lái)越多的證據(jù)支持這樣的概念-MIF是宿主炎癥反應(yīng)不可缺少的組成成分。根據(jù)上述的總結(jié)概括，當(dāng)免疫細(xì)胞被暴露于微生物產(chǎn)物或炎癥前細(xì)胞因子或在特異性抗原活化時(shí)，就會(huì)很快產(chǎn)生MIF。且

MIF具有有力的自分泌或旁分泌效應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和存活。研究顯示，MIF與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[8-9]。

為了明確血清中MIF、IL-17、IL-10的檢測(cè)對(duì)肝細(xì)胞性肝癌診斷的臨床意義，本組將本院住院的50例肝細(xì)胞性肝癌患者設(shè)為觀察組，將30例同期健康體檢者設(shè)為對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)2組血清中MIF、IL-17、IL-10的水平，發(fā)現(xiàn)，觀察組MIF及IL-17的含量為（105.41±20.28）ng/mL、（88.84±22.74）ng/mL，均顯著高于對(duì)照組的（23.25±8.81）ng/mL、（24.06±11.36）ng/mL（P＜0.05），觀察組IL-10水平為（97.58±19.26）ng/mL，顯著低于對(duì)照組的（242.27±64.79）ng/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。可見(jiàn)，腫瘤標(biāo)志物是反映腫瘤存在的化學(xué)類物質(zhì)，上述3種腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定在肝細(xì)胞性肝癌的診斷有一定的臨床參考價(jià)值。總之，目前炎癥、免疫和癌癥3者之間的相互關(guān)系已經(jīng)被廣泛接受，然而介導(dǎo)它們之間相互關(guān)聯(lián)的許多分子和細(xì)胞機(jī)制仍未闡明，而上述指標(biāo)的評(píng)估將為癌癥的預(yù)防和治療提供新的線索和方法，但這方面的研究仍然有限，如還不能完全確定此類指標(biāo)在腫瘤發(fā)生以及在腫瘤免疫監(jiān)視方面所起的作用，如利用轉(zhuǎn)基因小鼠或基因敲除小鼠模型等方式進(jìn)行研究將可以闡明這個(gè)問(wèn)題。

[1] Tamura Y，Igarashi M，Kawai H，et al．Clinical advantage of highly sensitive on-chip immunoassay for fucosylated fraction of alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma[J]．Dig Dis Sci，2010，55：3576-3583．

[2] Matsuda M，Asakawa M，Amemiya H，et a1．Lens culinaris agglutininreactive fraction of AFP is a useful prognostic biomarker for survival after repeat hepatic resection for HCC[J]．J Gastroenterol Hepatol，2011，26：731-738．

[3] Ely LK，F(xiàn)ischer S，Garcia KC．Structural basis of receptor sharing by interleukin 17 cytokines[J]．Nat Immunol，2009，10：1245-1251．

[4] 張康．NSCLC患者癌組織中MMP-9、IL-17的表達(dá)及其預(yù)后的關(guān)系[J]．山東醫(yī)藥，2012,52(29)：64-66．

[5] 于曉輝，李曉云，段惠春，等．恩替卡韋治療慢性乙型肝炎患者血清MIF、IL-17和IL-10的變化及臨床意義[J]．肝臟，2014,19(3)：167-169．

[6] 張志強(qiáng)，賀杰峰，張瑜，等．大鼠實(shí)驗(yàn)性肝癌組織中Treg細(xì)胞與TGF-β1、IL-10水平的相關(guān)性分析[J]．中華普通外科雜志，2014,29(5)：382-384．

[7] Sabat R，Grtltz G，Warszawskak，et al．Biology of interleukin-10[J]．Cytokine Growth Factor Rev，2010，21(5)：331-344．

[8] Yu Xh，Duan HC，Wang W．Serum levels of macrophage migration inhibitory factor,interleukin-17 and interleukin-10 in patients with HBV-related liver disease[J]．Chin J Gastroenterol Hepatol,2012,6：560-563．

[9] 陶斌勝，熊茂明，曹立宇．肝癌組織中MIF、TNF-α的表達(dá)及臨床意義[J]．臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27(11)：1177-1180．

Objective To study the clinical value of detection of the serum levels of MIF、IL-17 and IL-10 in the early diagnosis of hepatocellular carcinoma. Methods 50 patients with hepatocellular carcinoma and 30 health examination participants were included. The serum levels of MIF、IL-17 and IL-10 were measured by ELISA. Results Compared with healthy controls, MIF、IL-17 and IL-10 had significant difference in hepatocellular carcinoma patients[(105.41±20.28)vs(23.25±8.81), (88.84±22.74)vs(24.06±11.36), (97.58±19.26)vs(242.27±64.79), t=31.263、25.668、-60.589，P＜0.05)]. Conclusion Serum levels of MIF、IL-17 and IL-10 is closely related with hepatocellular carcinoma and the detection of MIF、IL-17 and IL-10 had the guidance significance for clinical diagnosis.

Hepatocellular carcinoma; MIF; IL-17; IL-10

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.30.037

江蘇 215006 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化科 （錢夷婷 吳婷婷）