熒光定量PCR檢測痰結核分枝桿菌DNA的應用價值

張桂花 廣東省惠州市第六人民醫院檢驗科 516211

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種以呼吸系統為主的傳染病，主要由含菌的飛沫通過呼吸道傳播［1］，是目前嚴重威脅人類健康的重大傳染性疾病之一。臨床常通過檢測患者痰液中的結核分枝桿菌，對結核病進行及時診斷和治療［2］。選擇我院自2011年7月－2013年8月在我院住院治療的78例結核病患者，采取熒光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良羅氏培養三種方法對患者的同一份痰標本進行檢測，對比分析熒光定量PCR在結核分枝桿菌檢測中的臨床應用價值，現將具體情況匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年7月－2013年8月在我院住院治療的肺結核患者78例，其中男53例，女25例，年齡17～79歲，平均年齡（49.3±3.6）歲。所有患者均有低熱、盜汗及呼吸道感染等癥狀出現。

1.2 痰標本收集 一般在清晨，患者用生理鹽水多次漱口后，將第一口咳痰棄去，取深部咳痰3口分裝于3個無菌標本盒內送檢。提醒患者為保證檢驗結果，勿將唾液吐入標本盒。

1.3 檢測方法 抗酸菌涂片染色：不需特殊儀器，試劑標準自行配置，按照《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）（795－796）標準操作執行。改良羅氏培養：檢測方法按照試劑配套說明書進行操作，操作均在生物安全柜內進行。BacT／AL E R T3D培養管置儀器培養。熒光定量PCR：儀器LightCycler 3.5全自動熒光定量基因擴增儀由羅氏公司提供，具體操作按照試劑配套說明書進行。擴增完計算機自動分析，建立標準曲線。

1.4 統計學處理 本文所有數據均采用SPSS16.0軟件進行分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三種檢測方法痰結核分枝桿菌檢出率比較 通過同一例痰標本三種檢測方法的對比，可以看出應用熒光定量PCR技術檢測痰結核分枝桿菌DNA，檢出率明顯高于抗酸菌涂片染色方法和改良羅氏培養檢測方法，這說明熒光定量PCR檢測體系可有效檢測出痰液標本中結核桿菌的存在，可在臨床檢測中推廣應用。見表1。

表1 三種檢測方法痰結核分枝桿菌檢出率比較

2.2 三種檢測方法痰結核分枝桿菌陽性檢出率比較 通過對比分析，抗酸菌涂片染色法檢測痰中結核分枝桿菌的陽性檢出率為29.5%（23／78）；改良羅氏培養法檢測痰中結核分枝桿菌的陽性檢出率為43.6%（34／78）；熒光定量PCR技術檢測痰中結核分枝桿菌的陽性檢出率為73.1%（57／78）。可見熒光定量PCR技術檢測痰中結核分枝桿菌的陽性檢出率明顯高于其他兩種方法，可以在臨床放心使用。

3 討論

目前臨床常用檢測結核桿菌的方法較多，如涂片染色鏡檢、結核桿菌培養和熒光定量PCR等方法，抗酸菌涂片染色因其檢測方法簡單，技術要求不高，但是不能夠為治療提供較準確信息，適合基層單位大規模的普查中使用［3］。結核桿菌培養法檢測結核桿菌陽性率明顯高于涂片染色鏡檢法，但是因其培養要求較高，需要時間較長，在實際應用中有－定的局限［4］。而應用熒光定量PCR技術檢測痰結核分枝桿菌DNA操作簡單、診斷快捷、靈敏度較高，結果真實可靠，可作為結核病的常規診斷方法。

筆者通過對比實驗分析了三種方法對結核桿菌的檢出能力，可以看出熒光定量PCR技術在痰結核分枝桿菌DNA檢測中，痰結核分枝桿菌檢出率明顯高于抗酸菌涂片染色方法和改良羅氏培養檢測方法，另外在痰結核分枝桿菌的陽性檢出率比較結果看，熒光定量PCR技術檢測痰中結核分枝桿菌的陽性檢出率為73.1%，明顯高于抗酸菌涂片染色法和改良羅氏培養兩種方法。這說明熒光定量PCR方法對結核桿菌的快速檢測有重要應用價值，對結核桿菌不僅能進行定性檢測，也能夠定量檢測［5］，在抗結核治療中，采用PCR方法定期檢測，對于結核患者治療過程中的結核桿菌感染數量的判斷具有一定的意義，因此熒光定量PCR方法檢測結核桿菌值得臨床推廣。

［1］辛茶香，劉珍瓊，熊國亮 .分支桿菌DNA的應用價值〔J〕.國際檢驗醫學雜志，2007，3：196－197.

［2］張東浩，李影.熒光定量PCR檢測痰結核分枝桿菌DNA的應用價值〔J〕.中國醫藥指南，2012，1：65－66.

［3］樓翔.痰液標本不同檢測方法對結核桿菌檢測比較〔J〕.檢驗與臨床，2011，49（13）：48－49.

［4］鄔艷.熒光定量PCR檢測痰結核桿菌特異性DNA序列及其臨床應用〔J〕.中外醫學研究，2012，16：90－91.

［5］耿一博.熒光定量PCR技術在痰結核菌檢測中的應用〔J／OL〕.醫 學 論 壇 網，2013，Http：／／www.cmt.com.cn／detail／233345.html.