不同TgAb濃度對血清Tg放免法濃度測值影響的研究

何健 潘明志  黃蕤  唐恭順

[摘要] 目的 探討不同濃度的抗甲狀腺球蛋白抗體（TgAb）對甲狀腺球蛋白（Tg）測量值的干擾。 方法 通過混合Tg和TgAb標準品，混合患者的血清高Tg低TgAb和高TgAb低Tg產生實驗樣本，用放射免疫法測量Tg。比較混合前后Tg濃度值。 結果 Ⅰ組試驗樣本的變異系數為（4.21±3.51）% （0～14.82） （r=0.998）；Ⅱ組試驗樣本的變異系數為（2.83±2.23）% （0.87～11.21） （r=0.999）；Ⅰ組樣本中，增加TgAb濃度，Tg的測量值呈比例下降，呈明顯的直線負相關趨勢（P均＜0.01）；Ⅱ組樣本中，隨著TgAb濃度增高，Tg的測量值呈比例下降，呈明顯的直線負相關趨勢（P均＜0.05）。 結論 血清TgAb濃度過高，Tg的測定值顯著會低于實際Tg濃度值，且TgAb的濃度越高，對Tg分析產生的干擾越大。所以臨床工作中，分析血清Tg測定值，需要結合血清TgAb測定值。

[關鍵詞] 甲狀腺球蛋白；甲狀腺球蛋白抗體；分化型甲狀腺癌；放射免疫法

[中圖分類號] R736.1???[文獻標識碼] A???[文章編號] 2095-0616（2014）08-07-04

Study of influence of different TgAb concentrations on radioimmunoassay measurement of serum Tg concentrations

HE?Jian1,2??PAN?Mingzhi2??HUANG?Rui2??TANG?Gongshun2

1.Department of Nuclear Medicine,Chengdu Second People's Hospital,Chengdu 610017,China;2.Department of Nuclear Medicine,West China Hospital of Sichuan University,Chengdu 610041,China

[Abstract] Objective To evaluate the interference of different concentrations of anti-thyroglobulin antibodies (TgAb) on the measurement values of thyroglobulin (Tg). Methods Through blending Tg and TgAb standards,the patients'serum high Tg and low TgAb and high TgAb and low Tg were blended to produce experimental samples. The radioimmunoassay was used to measure Tg.The Tg concentration values before and after blending were compared. Results The variation coefficient of the experiment samples in group I was (4.21±3.51)% (0-14.82) (r=0.998);The variation coefficient of the experiment samples in group Ⅱ was (2.83±2.23)% (0.87-11.21)(r=0.999).In the samples of group I,when increasing the TgAb concentration,the Ig measurement value dropped proportionally, presenting a significant linear negative correlation trend (P＜0.01 for all);In the samples of group Ⅱ,as the TgAb concentration increased,the Ig measurement value dropped proportionally,presenting a significant linear negative correlation trend (P＜0.05 for all). Conclusion When the serum TgAb concentration is excessively high,the measurement value of Tg is significantly lower than the actual Tg concentration value, and the higher the TgAb concentration is, the larger the interference produced by Tg is.Therefore,in clinical work,analysis of serum Tg measurement value should combine serum TgAb measurement value.

[Key words] Thyroglobulin;Thyroglobulin antibodies;Differentiated thyroid cancer; Radioimmunoassay

血清甲狀腺球蛋白（thyroglobulin，Tg）是甲狀腺濾泡上皮細胞合成的一種二聚體糖蛋白，貯存在細胞或者濾泡腔內，以膠體形式在細胞和腺腔內循環，僅微量Tg進入血液循環內。分化型甲狀腺癌（differentiated thyroid cancer，DTC）患者經手術切除和131I清甲治療后，血清Tg應小于1ng/mL或者檢測不到，如血清Tg水平升高，提示有可能存在DTC臨床復發或轉移。因此，準確檢測血清Tg濃度是判斷分化型甲狀腺癌（DTC）患者有無復發和轉移的一種特異性高的檢查方法[1-3]。血清Tg刺激產生甲狀腺球蛋白抗體（thyroglobulin antibody，TgAb），由于TgAb的存在，干擾了血清Tg的測量[4]。當TgAb存在時，測量TSH刺激狀態的Tg濃度，將導致評判甲狀腺癌復發或轉移的失敗。有人認為TgAb對Tg影響的大小與TgAb濃度有關[5]。為了評估TgAb對血清Tg的影響，作者在各種TgAb濃度下用放免法測量Tg的濃度。

1?資料與方法

1.1?標本收集

收集四川大學華西醫院2012年9～11月期間，已行甲狀腺全切術、中央區淋巴結清掃術、131I清甲

表2??Ⅱ組實驗樣本等體積混合后濃度，表示為Tg（Ⅱa）（ng/mL）-TgAb（Ⅱb）（IU/mL）

Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）

4.7～3.5 4.7～5.2 4.7～18.8 4.7～643.0 4.7～930.0

endprint

18.5～3.5 18.5～5.2 18.5～18.8 18.5～643.0 18.5～930.0

111.0～3.5 111.0～5.2 111.0～18.8 111.0～643.0 111.0～930.0

246.0～3.5 246.0～5.2 246.0～18.8 246.0～643.0 246.0～930.0

表3??Ⅰ組樣本Tg的測量值（）

已知的Tg濃度

（ng/mL） 不同TgAb濃度條件下的Tg測值（ng/mL） 相關系數 P

10.0（U/mL） 30.0（U/mL） 100.0（U/mL） 300.0（U/mL） 1000.0（U/mL）

2 5.1±0.1 4.0±0.2 3.4±0.1 2.6±0.1 1.8±0.1 -0.844 0.000

12.5 11.0±0.5 8.8±0.4 8.2±0.7 7.0±0.3 5.9±0.3 -0.820 0.000

25.0 26.4±1.8 23.6±1.0 20.7±1.1 20.1±1.2 15.3±0.5 -0.898 0.000

100 104.1±3.2 103.7±2.0 88.2±1.0 76.7±2.5 65.5±3.0 -0.880 0.000

表4??Ⅱ組樣本Tg的測量值（）

已知的Tg濃度

（ng/mL） 不同TgAb濃度條件下的Tg測值（ng/mL） 相關系數 P

3.5（U/mL） 5.2（U/mL） 18.8（U/mL） 643.0（U/mL） 930.0（U/mL）

4.7 4.5±0.2 4.5±0.2 3.4±0.6 2.1±0.1 2.0±0.2 -0.923 0.000

18.5 17.6±0.3 18.7±0.4 11.3±0.4 9.1±0.9 6.7±0.6 -0.850 0.000

111.0 102.3±5.1 100.5±5.1 56.0±3.4 45.3±0.4 39.3±2.2 -0.793 0.000

246.0 235.8±6.2 234.8±4.2 121.1±1.9 99.4±12.2 85.9±5.2 -0.780 0.001

治療的DTC患者血清標本20例。納入標準為：（1）均停服優甲樂3周，禁碘飲食3周。（2）由四川大學華西醫院檢驗科Roche公司MODULAR E170電化學發光系統測定TSH、Tg及TgAb。（3）TSH值（77.2±18.5）IU/L，高Tg濃度~TgAb濃度，高TgAb濃度~低Tg濃度。排除標準：（1）未手術，或未甲狀腺全切，中央區淋巴結未清掃。（2）未行131I清甲治療。（3）未停服優甲樂或停藥后TSH值低于30IU/L。

1.2?試驗樣本準備

Ⅰ組：Tg標準品濃度分別為10，25，50，100和200.0ng/mL，TgAb標準品濃度分別為30，100，300，1000和3000IU/mL。等體積兩兩混合Tg和TgAb標準品，分別獲得混合后不同濃度Tg和TgAb的樣本（表1）。Ⅱ組：ⅡaDTC患者低水平TgAb（＜10U/mL），不同的Tg濃度（9.3，37.6，221.9和492.0ng/mL）的血清樣本；ⅡbDTC患者低水平Tg（＜0.1ng/mL）不同的TgAb濃度（7.0，10.4，37.5，1286.0和1860.0IU/mL）的血清樣本。Ⅱa與Ⅱb等體積兩兩混合血清樣本，分別獲得不同濃度Tg和TgAb的血清標本。見表2。

1.3?Tg和TgAb測量

Tg測量使用RIA法，試劑盒購自濰坊三維生

表1??Ⅰ組標準品等體積混合后濃度，表示為Tg（ng/mL）-TgAb（IU/mL）

Tg-TgAb Tg-TgAb Tg-TgAb Tg-TgAb Tg-TgAb

5.0～15.0 5.0～50.0 5.0～150.0 5.0～500.0 5.0～1500.0

12.5～15.0 12.5～50.0 12.5～150.0 12.5～500.0 12.5～1500.0

25.0～15.0 25.0～50.0 25.0～150.0 25.0～500.0 25.0～1500.0

100～15.0 100～50.0 100～150.0 100～500.0 100～1500.0

物工程集團有限公司，其檢測低限為1μg/L，批內變異系數3.2%～6.8%，批間變異系數4.7～8.5%。TgAb測量采用IRMA法，由自濰坊三維生物工程集團有限公司提供，其檢測低限為3IU/mL，批內變異系數＜10%，批間變異系數＜15%。Ⅰ組和Ⅱ組，每一濃度，一式三份，進行Tg的重復性測量。

1.4?統計學方法

將每一混合后樣本作Tg含量測定，測定結果用四格表Kappa檢驗，SPSS version 11軟件分析，進行Spearman相關分析，|r|＞0.95存在顯著性相關；|r|≥0.8高度相關；0.5≤|r|<0.8中度相關；0.3≤|r|<0.5低度相關，以P＜0.05為差異有統計學意義。評估樣本中不同濃度TgAb對Tg測量的影響。

2?結果

2.1?Tg測量的重復性

Ⅰ組試驗樣本的變異系數為（4.21±3.51）%（0～14.82）（r=0.998）。Ⅱ組試驗樣本的變異系數為（2.83±2.23）%（0.87～11.21）（r=0.999）。

2.2?TgAb對Tg的影響

Ⅰ組樣本中，增加TgAb濃度，Tg的測量值呈比例下降，呈明顯的直線負相關趨勢（P均＜0.01）。低濃度（10U/mL）的TgAb樣本中，Tg濃度測量值高于已知的Tg濃度的樣品（表3）；Ⅱ組樣本中，隨著TgAb濃度增高，Tg的測量值呈比例下降，呈明顯的直線負相關趨勢（P均＜0.05）。見表4。

3?討論

約10%~25%的DTC患者清甲治療后有轉移或復發[6-7]，而Tg被視為預測DTC轉移或復發的敏感和特異性的腫瘤標志物。TgAb與存留的抗原刺激相關，40%的DTC患者TgAb呈陽性，較正常人群增高[8，15]。范群等[9]認為TgAb持續陽性可能表明病灶復發或轉移，然而，其他的研究已經報道TgAb水平和病灶殘留沒有相關性[10]。因此，血清高濃度的TgAb對Tg值的干擾，將影響DTC患者下一步的治療決策。內源性TgAb干擾Tg測量，因此我們可以在一定TgAb濃度下預測Tg濃度。當存在TgAb時，即使TgAb的濃度很低，由放免測定Tg的值通常也低于其真實值[11]。Tg測量值取決于TgAb濃度，其程度與TgAb的濃度呈正相關[12]。在本文研究中，通過A組和B組的實驗樣品測試Tg，來評估TgAb對Tg測量的影響。

本研究發現，在高濃度的TgAb中，Tg已知值是的測量值的2倍多。如表4中，Tg已知值為4.7ng/mL的血清，在含有1860IU/mL TgAb的樣品中測得值僅為2ng/mL。可以認為，當RIA測量值Tg為2.0ng/mL，而TgAb大于1860IU/mL的患者，其Tg值可能大于4.7ng/mL。因此，當應用Tg值為2.0ng/mL來評估患者時，患者可能被錯誤歸類為低風險患者[13]，而停止進一步治療。一個Tg已知值為18.5ng/mL的血清樣本，當含有gAb濃度為1286IU/mL時，測量值為9.1ng/mL。即TgAb大于1286IU/mL時，Tg值為18.5ng/mL的患者，Tg測定值可能低于10ng/mL。因此，當Tg值為10ng/mL，而影像學檢查無陽性發現時，患者可能被誤認為未發生遠處轉移[14]。相比早期診斷疾病復發或轉移的患者，疾病的處理將被延遲，導致患者預后差。

endprint

在本研究中，我們使用從患者得到的人類TgAb血清，對Tg測量的影響進行評估，在已知的Tg濃度值范圍內，驗證人類TgAb的影響。本研究的結果表明，在參考范圍內，人類TgAb濃度可致Tg測值降低，高濃度的TgAb可以導致Tg值更低；因此，考慮到伴隨TgAb濃度的高低，Tg測量方法的發展，將決定臨床醫生參考其臨床意義。與使用患者的血清的試驗相反，低濃度的TgAb導致過高地估計的Tg，在本研究中沒有進一步論證。

Tg測值的影響不只依賴分析方法類別，還有被患者TgAb的識別的Tg抗原決定簇類型。因此，本次研究可能不適合應用到所有的檢測方法和所有患者。然而，研究預測的Tg值，比未考慮TgAb干擾測量的Tg值更最接近真實的Tg值。對于DTC患者，可能在預測病灶復發或癌癥復發上更有價值[16]。本研究的可靠性有賴于醫生在臨床中進行臨床實踐。

本研究是有一定局限性。首先，患者標本是依據電化學發光篩選的，而本研究運用的是放射免疫法，方法學上存在差異。其次，盡管盡力規范實驗室Tg測定操作，實驗室之間的差異仍然存在，這可能與基因多態性相關，比如蛋白質一級結構變化的介導，可能會導致改變蛋白質加工、修改或交聯糖基化途徑[8]。血清TgAb檢測的結果因抗原決定部位而存在差異，尤其是在患者沒有甲狀腺炎的情況下[5]。第三，用血清Tg、TgAb測量值，來估計的真實的Tg值，而真實的TgAb值應該是一個決定性因素。納入標準的標本，我們沒有評估血清Tg對TgAb的影響力。第四，在本研究中，我們只用四個濃度的血清Tg和五個濃度的TgAb，估算已知Tg濃度不是最準確的，還需要大樣本進一步的研究真正的Tg濃度。

綜上所述，用Tg和TgAb測量濃度預測真正的Tg濃度，用于評估DTC患者病灶復發或轉移，將對DTC患者進一步臨床治療提供更多信息，可能比單純放免法測量Tg更有價值。

[參考文獻]

[1] 戴慶靖.甲狀腺球蛋白測定的臨床意義及影響因素[J].同位素，2007，20（2）：120-123.

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[16] 任艷鑫，隋軍，李曉江，等. 血清Tg、TGAb與分化型甲狀腺癌關系的臨床分析[J]. 現代腫瘤醫學，2008，16（9）： 1488-1489.

（收稿日期：2014-01-27）

endprint

在本研究中，我們使用從患者得到的人類TgAb血清，對Tg測量的影響進行評估，在已知的Tg濃度值范圍內，驗證人類TgAb的影響。本研究的結果表明，在參考范圍內，人類TgAb濃度可致Tg測值降低，高濃度的TgAb可以導致Tg值更低；因此，考慮到伴隨TgAb濃度的高低，Tg測量方法的發展，將決定臨床醫生參考其臨床意義。與使用患者的血清的試驗相反，低濃度的TgAb導致過高地估計的Tg，在本研究中沒有進一步論證。

Tg測值的影響不只依賴分析方法類別，還有被患者TgAb的識別的Tg抗原決定簇類型。因此，本次研究可能不適合應用到所有的檢測方法和所有患者。然而，研究預測的Tg值，比未考慮TgAb干擾測量的Tg值更最接近真實的Tg值。對于DTC患者，可能在預測病灶復發或癌癥復發上更有價值[16]。本研究的可靠性有賴于醫生在臨床中進行臨床實踐。

本研究是有一定局限性。首先，患者標本是依據電化學發光篩選的，而本研究運用的是放射免疫法，方法學上存在差異。其次，盡管盡力規范實驗室Tg測定操作，實驗室之間的差異仍然存在，這可能與基因多態性相關，比如蛋白質一級結構變化的介導，可能會導致改變蛋白質加工、修改或交聯糖基化途徑[8]。血清TgAb檢測的結果因抗原決定部位而存在差異，尤其是在患者沒有甲狀腺炎的情況下[5]。第三，用血清Tg、TgAb測量值，來估計的真實的Tg值，而真實的TgAb值應該是一個決定性因素。納入標準的標本，我們沒有評估血清Tg對TgAb的影響力。第四，在本研究中，我們只用四個濃度的血清Tg和五個濃度的TgAb，估算已知Tg濃度不是最準確的，還需要大樣本進一步的研究真正的Tg濃度。

綜上所述，用Tg和TgAb測量濃度預測真正的Tg濃度，用于評估DTC患者病灶復發或轉移，將對DTC患者進一步臨床治療提供更多信息，可能比單純放免法測量Tg更有價值。

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（收稿日期：2014-01-27）

endprint

在本研究中，我們使用從患者得到的人類TgAb血清，對Tg測量的影響進行評估，在已知的Tg濃度值范圍內，驗證人類TgAb的影響。本研究的結果表明，在參考范圍內，人類TgAb濃度可致Tg測值降低，高濃度的TgAb可以導致Tg值更低；因此，考慮到伴隨TgAb濃度的高低，Tg測量方法的發展，將決定臨床醫生參考其臨床意義。與使用患者的血清的試驗相反，低濃度的TgAb導致過高地估計的Tg，在本研究中沒有進一步論證。

Tg測值的影響不只依賴分析方法類別，還有被患者TgAb的識別的Tg抗原決定簇類型。因此，本次研究可能不適合應用到所有的檢測方法和所有患者。然而，研究預測的Tg值，比未考慮TgAb干擾測量的Tg值更最接近真實的Tg值。對于DTC患者，可能在預測病灶復發或癌癥復發上更有價值[16]。本研究的可靠性有賴于醫生在臨床中進行臨床實踐。

本研究是有一定局限性。首先，患者標本是依據電化學發光篩選的，而本研究運用的是放射免疫法，方法學上存在差異。其次，盡管盡力規范實驗室Tg測定操作，實驗室之間的差異仍然存在，這可能與基因多態性相關，比如蛋白質一級結構變化的介導，可能會導致改變蛋白質加工、修改或交聯糖基化途徑[8]。血清TgAb檢測的結果因抗原決定部位而存在差異，尤其是在患者沒有甲狀腺炎的情況下[5]。第三，用血清Tg、TgAb測量值，來估計的真實的Tg值，而真實的TgAb值應該是一個決定性因素。納入標準的標本，我們沒有評估血清Tg對TgAb的影響力。第四，在本研究中，我們只用四個濃度的血清Tg和五個濃度的TgAb，估算已知Tg濃度不是最準確的，還需要大樣本進一步的研究真正的Tg濃度。

綜上所述，用Tg和TgAb測量濃度預測真正的Tg濃度，用于評估DTC患者病灶復發或轉移，將對DTC患者進一步臨床治療提供更多信息，可能比單純放免法測量Tg更有價值。

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（收稿日期：2014-01-27）

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