17a α-D- 高炔雌二醇-3-乙酯聯合環磷酰胺對L615白血病小鼠的實驗研究

王忻妍+王月英+吳紅英+路璐++張俊伶+孟愛民+李德冠

[摘要] 目的 觀察17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯（DHEA）聯合環磷酰胺（CTX）對接種L615白血病細胞小鼠的治療作用。 方法 將接種L615白血病細胞的小鼠分為對照組、CTX組、DHEA（低、中、高）劑量組、DHEA（低、中、高劑量）聯合化療（CTX）組，連續給藥9、12 d后分別檢測腫瘤抑制率、外周血細胞數、骨髓有核細胞數、胸腺與脾指數等指標。 結果 DHEA低、中、高劑量組，CTX組以及DHEA（低、中、高劑量）聯合CTX組瘤重均低于對照組，抑瘤率分別為45.40％、67.94％、50.48％、70.48％、69.21％、75.87％及72.06％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA中劑量組瘤重均低于DHEA低劑量組及DHEA高劑量組，差異有統計學意義（P < 0.05）。DHEA低、中、高劑量組的白細胞數[（15.87±3.32）×109、（17.92±1.79）×109、（18.55±3.21）×109/L）]及DHEA聯合CTX各組的白細胞數[（16.72±2.67）×109、（18.98±2.34）×109、（19.65±2.79）×109/L）]均高于對照組[（13.32±2.56）×109/L]，差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯合CTX各組的白細胞數均高于CTX組[（10.56±1.83）×109/L]，差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組的骨髓有核細胞數[（8.28±2.12）×106、（9.93±1.36）×106、（8.22±1.91）×106/股骨]及DHEA聯合CTX各組的骨髓有核細胞數[（7.55±1.13）×106、（8.67±2.21）×106、（7.96±1.46）×106/股骨]均高于對照組[（6.34±1.21）×106/股骨]，差異有統計學意義（P < 0.05）。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞與CTX組[（7.92±0.89）×106/股骨]比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯合CTX各組的胸腺和脾臟指數均高于對照組，與對照組比較差異均有高度統計學意義（均P < 0.01)。 結論 DHEA及聯合化療對L615白血病細胞有抑制作用，對化療后荷瘤小鼠造血系統具有一定的保護作用。

[關鍵詞] 17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；抗腫瘤；環磷酰胺；造血功能

[中圖分類號] R811.5[文獻標識碼] A[文章編號] 1673-7210（2014）05（a）-0004-05

Effects of DHEA combined with Cyclophosphamide on leukemia L615 mice

WANG Xinyan1,2 WANG Yueying2 WU Hongying2 LU Lu2 ZHANG Junling2 MENG Aimin2 LI Deguan2▲

1.Cancer Hospital of Hangzhou City, Zhejiang Province, Hangzhou 310002, China; 2.Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical CollegeTianjin Key Laboratory of Radiation Medicine and Molecular Nuclear Medicine, Tianjin 300192, China

[Abstract] Objective To observe the therapeutic effects of 17a α-D-homo ethynyclestradiol-3-accetate (DHEA) combining with Cyclophosphamide(CTX) on the mice inoculated with leukemia L615 cells. Methods The mice inoculated with L615 were divided into control group, CTX group (treated with CTX), three DHEA groups (treated with low, middle and high doses DHEA), three combined groups (treated with low, middle, high doses DHEA and CTX). The mice were continuously delivered drugs for 9 days. The tumor inhibition rate, blood and bone marrow nucleated cell counts, spleen and thymus indexes were determined at 12 days. Results The tumors weight in the mice of three DHEA groups and three combined groups were all significantly lower than those in mice of control group, the tumor inhibitory rates were 45.40%, 67.94%, 50.48%, 70.48%, 69.21%, 75.87% and 72.06% respectively, the differences were statistically significant (P < 0.01). The tumors weight of middle DHEA dose group were lower than those of low DHEA dose group and high DHEA dose group (P < 0.05). The WBC counts of three DHEA groups [(15.87±3.32)×109, (17.92±1.79)×109, (18.55±

1.杭州市腫瘤醫院，浙江杭州 310002；

2.中國醫學科學院北京協和醫學院放射醫學研究所天津放射醫學與分子核醫學重點實驗室，天津 300192

3.21)×109/L] and three combined groups [(16.72±2.67)×109, (18.98±2.34)×109, (19.65±2.79)×109/L] were significantly higher than those of control group [(13.32±2.56)×109/L], the differences were statistically significant (P < 0.01). The WBC counts of three DHEA groups and three combined groups were higher than those of CTX group [(10.56±1.83)×109/L], the differences were statistically significant (P < 0.01). The BMNCs of three DHEA groups [(8.28±2.12)×106, (9.93±1.36)×106, (8.22±1.91)×106/femur] and three combined groups [(7.55±1.13)×106, (8.67±2.21)×106, (7.96±1.46)×106/femur] were significantly higher than those of control gruop [(6.34±1.21)×106/femur], the differences were statistically significant (P < 0.05). The BMNCs of middle DHEA group was higher than that of CTX group [(7.92±0.89)×106/femur], the difference was statistically significant (P < 0.01). The thymus and spleen index of three DHEA groups and three combined groups were higher than those of control group, the differences were statistically significant (P < 0.01). Conclusion DHEA alone or DHEA combining with CTX shows inhibitory effects on the L615 tumor of mice and protective effects on the hematopoiesis of mice received chemotherapy.

[Key words] 17a α-D-home ethynyclestradiol-3-accetate; Tumor inhibitory effects; Cyclophosphamide; Hematopoietic function

惡性腫瘤的治療主要包括手術及放化療，而放、化療主要副作用是抑制免疫及造血功能，17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯（DHEA）是一種新型輻射防護劑，本研究前期試驗結果顯示,對小鼠的肝癌、食管癌、黑色素瘤、肺癌[1-4]等均有明顯的抑制作用。本實驗按照國家一類新藥報批要求[5]，通過建立L615白血病小鼠模型，探討單獨使用DHEA及DHEA聯合環磷酰胺（CTX）藥物對L615白血病是否具有抑瘤增效作用，為其用于治療腫瘤的研究提供實驗依據。

1材料與方法

1.1 動物和細胞系

中國醫學科學院放射所培育的IRM-2近交系小鼠，體重為20～22 g，雌雄各半，合格證號：SCXK（津）2005-0001，SPF級動物實驗室飼養，飼料為清潔級全價鼠料，由北京科奧協力飼料有限公司提供。L 615白血病瘤株由中國醫學科學院血研所提供。

1.2 試劑和儀器

CTX為上海華聯制藥有限公司產品,DHEA是中國醫學科學院放射所合成的雌激素類輻射防護劑，白色粉末，無味。sysmex poch-100i全自動血液分析儀（日本），電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.3 L615荷瘤小鼠模型的建立

L615細胞生長至亞融合狀態時收集細胞，用生理鹽水調整細胞數約為5×107/mL，取0.2 mL接種于每只小鼠右側腋窩下，計為實驗第1天。

1.4 分組及給藥

實驗第3天，將荷瘤鼠隨機分為對照組、CTX（25 mg/kg）組、DHEA低劑量（5 mg/kg）、中劑量（7.5 mg/kg）、高劑量（10 mg/kg）組，DHEA低、中、高劑量聯合CTX組，每組各10只。DHEA組及DHEA聯合CTX組腹腔注射DHEA,給藥劑量0.2 mL/只，1次/d，連續9 d，對照組給予同體積茶油，DHEA聯合CTX組及CTX組腹腔注射CTX，給藥劑量0.2 mL/只，隔日1次，共4次。

1.5 外周血細胞計數

實驗第l2天，小鼠眼球摘除采血，全自動血液分析儀計數血細胞數。處死小鼠取瘤體稱重，計算抑瘤率，抑瘤率=[1－（治療組平均瘤質量/對照組平均瘤質量）]×100％。取一側股骨，用白細胞稀釋液沖洗骨髓腔，收集骨髓細胞制成懸液，全自動血液分析儀計數骨髓有核細胞數。取胸腺、脾臟稱重，計算胸腺和脾重指數。

1.6 生命延長率實驗

取L615細胞懸液（細胞數約為5×107/mL）接種于小鼠腹腔，0.1 mL/只，實驗第3天，將荷瘤鼠隨機分為對照組、CTX（25 mg/kg）組、DHEA低劑量（5 mg/kg）、中劑量（7.5 mg/kg）、高劑量（10 mg/kg）組，DHEA低、中、高劑量聯合CTX組，每組各10只。DHEA組及DHEA聯合CTX組腹腔注射DHEA，給藥劑量0.2 mL/只，1次/d，連續9 d，對照組給予同體積茶油，DHEA聯合CTX組及CTX組腹腔注射CTX，給藥劑量0.2 mL/只，隔日1次，共4次。觀察生存期。生命延長率=[（治療組平均生存天數/對照組平均生存天數）-1]×100％。

1.7統計學方法

采用統計軟件Prism5.0對數據進行分析，正態分布計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；重復測量的計量資料多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠L615的抑瘤作用

為了分析DHEA及DHEA聯合CTX對L615的作用，本次實驗首先觀察了其對小鼠腫瘤大小的影響。結果顯示，DHEA低、中、高劑量組、CTX組、DHEA聯合CTX各組瘤重均低于對照組，差異均有高度統計學意義（t = 3.944、8.898、5.266、9.288、8.776、10.571、7.464，P < 0.01）。DHEA中、高劑量聯合CTX組的瘤重低于CTX組，但與CTX組比較差異無統計學意義（P > 0.05）。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組，差異有統計學意義（P < 0.05）。DHEA低劑量聯合CTX組瘤重低于DHEA低劑量組，兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05）；DHEA高劑量聯合CTX組瘤重低于DHEA高劑量組，兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05）。DHEA中劑量聯合CTX組瘤重低于DHEA低劑量聯合CTX組及DHEA高劑量聯合CTX組，但差異無統計學意義（P > 0.05），結果顯示DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯合CTX組，對L615腫瘤細胞均呈明顯的抑制作用。而計算抑瘤率表明DHEA中劑量聯合CTX組對L615腫瘤細胞最具抑制作用。見表1。

表1 DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤鼠L615腫瘤的抑制率

注：與對照組比較，*P ＜ 0.01；與CTX組比較，▲P ＜ 0.05；與DHEA低劑量組比較，△P ＜ 0.05；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺；“-”代表無數據

2.2 DHEA、DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠L 615白細胞及骨髓有核細胞的影響

造血免疫系統在腫瘤發生發展過程中占據重要地位，本次實驗觀察了DHEA、CTX及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠外周血及單側股骨有核細胞數的影響。DHEA低、中、高劑量組白細胞數及DHEA聯合CTX各組的白細胞數均高于對照組，其中DHEA中劑量組及高劑量組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 4.656、5.207，P < 0.01）。DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數要高于低劑量組，但差異無統計學意義（P > 0.05）。DHEA低、中、高劑量聯合CTX組的白細胞數與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 2.906、5.161，5.286，P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組的白細胞數均高于CTX組，差異有高度統計學意義（t = 4.429、9.092、9.631，P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量聯合CTX組的白細胞數均高于CTX組，差異有高度統計學意義（t = 6.017、8.964、9.043，P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組的骨髓有核細胞數均高于對照組，差異有統計學意義（t = 2.513、6.236、2.629，P < 0.05、P < 0.01、P < 0.05）。CTX組的骨髓有核細胞數與對照組比較差異有統計學意義（t = 3.327，P < 0.01）。DHEA聯合CTX低、中、高劑量組的骨髓有核細胞數均高于對照組，與對照組比較差異有統計學意義（t = 2.311，P < 0.05；2.924，P < 0.05；2.701，P < 0.05、P < 0.01）。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞與CTX組比較差異有高度統計學意義（t = 3.911， P < 0.01）。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于DHEA低劑量聯合CTX組及DHEA高劑量聯合CTX組，差異有高度統計學意義（t = 4.256、3.122，P < 0.01），這些結果提示DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統有一定保護作用。

表2 DHEA及聯合CTX對荷瘤鼠 L615白細胞

及骨髓有核細胞造血的影響（x±s）

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與CTX組比較，#P < 0.01；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺

2.3 DHEA、DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠L615臟器指數的影響

胸腺和脾臟是重要的免疫器官，本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯合CTX及CTX對這兩個臟器的影響。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯合CTX各組的胸腺指數均高于對照組，其中DHEA低、中劑量組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 12.280、5.993，P < 0.01）。CTX組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 4.715，P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組聯合CTX組與對照組比較差異有統計學意義（t = 3.253、7.513、2.578，P < 0.01、P < 0.05），DHEA中劑量組和DHEA中劑量聯合CTX組與CTX組比較差異有統計學意義（t = 3.284、3.019，P < 0.01）；DHEA低、中、高劑量組與對照組比較差異有統計學意義（t = 5.205、5.428、3.389，P < 0.01），DHEA低、中、高劑量聯合CTX組的脾重指數均高于對照組，差異有統計學意義（t = 8.255、17.517、10.708，P < 0.01）。見表3。

2.4 DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的平均存活時間及生命延長率的影響

腫瘤患者生存率是治療是否有效的重要指標，本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯合CTX及CTX對荷瘤小鼠存活時間的影響。DHEA各組及DHEA聯合CTX各組荷瘤小鼠平均存活天數均高于對照組，其中DHEA低、中、高劑量聯合CTX組與對照組比較差異均有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA聯合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活天數高于CTX組，其中DHEA中劑量聯合CTX組與CTX組比較差異有統計學意義（P < 0.05）。表明DHEA及DHEA聯合CTX給藥有助于提高荷瘤小鼠的平均存活時間，抑制L615腫瘤的發生發展。見表4。

表4 DHEA及DHE聯合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活時間

及生命延長率

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與CTX組比較，#P < 0.05；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺；“-”代表無數據

3 討論

化療已成為晚期惡性腫瘤患者最重要的治療方法之一，但是化療在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷機體的正常細胞，使原本免疫功能低下的腫瘤患者的免疫力進一步降低，腫瘤的發生、發展與機體的免疫功能密切相關[6-7]，所以降低化療藥物的毒副作用，提高腫瘤患者的免疫功能，充分發揮化療藥物的治療作用，日益成為國內外專家學者研究的方向[8-10]。DHEA是中國醫學科學院北京協和醫學院放射所研制的炔雌醇的衍生物，經過研究證實，其對由于輻射引起的造血組織損傷具有預防和治療的作用。本次實驗結果證明，DHEA明顯抑制荷瘤小鼠L615白血病的生長，腫瘤生長速度明顯減漫，瘤重明顯減輕，DHEA低、中、高劑量組抑瘤率分別為45.40％、67.94％、50.48％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組，與低、高兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05），說明中劑量抑制腫瘤效果好于低劑量和高劑量。環磷酰胺作為常用的化療藥物，本實驗中作為化療治療藥物[11-12]。當DHEA（低、中、高劑量）與CTX聯合應用時，抑瘤率分別為69.21％、75.87％、72.06％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。表明具有良好的協同抗瘤效果，DHEA中劑量聯合CTX組的抑瘤率（75.87％）高于CTX組（70.48％）和DHEA中劑量組（67.94％），進一步說明中等劑量DHEA具有良好療效。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官，胸腺、睥臟質量在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱，而化療藥物的應用可加重機體的免疫抑制， 因此提高化療后的免疫功能非常重要[13]。脾臟和胸腺在化療藥物作用下，其組織結構較快地發生嚴重損傷，表現為明顯萎縮，從而抑制了機體的免疫和抗病能力。實驗結果證明，DHEA單獨給藥及聯合化療均能增加胸腺和脾臟的重量。同時均能增加癌荷瘤小鼠的白細胞和骨髓有核細胞的數量。DHEA低、中、高劑量組白細胞數及DHEA聯合CTX各組的白細胞數均高于對照組，其中DHEA中劑量組、高劑量組及DHEA聯合CTX各組與對照組比較差異有統計學意義（P < 0.01），DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數要高于低劑量組，但差異無統計學意義。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于CTX組及DHEA低劑量聯合CTX組、DHEA高劑量聯合CTX組，差異有統計學意義（P < 0.01），這些結果提示單獨給予DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統有一定保護作用。

DHEA聯合CTX化療治療荷瘤小鼠后，能延長荷瘤小鼠的存活時間，生存期比單純的CTX化療生存率有所提高。表明DHEA及聯合化療對L615移植小鼠腫瘤具有顯著的協同抗瘤效果，改善化療后荷瘤小鼠的造血功能及降低免疫抑制作用，其具體作用機制有待進一步深入研究。

[參考文獻]

[1]杜利清，孟愛民，王月英，等.DHEA聯合γ射線對食管癌EC109細胞移植裸鼠的抑瘤與抗輻射作用[J].輻射研究與輻射工藝學報，2013，31（1）：6-9.

[2]王月英，王小春，吳紅英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合γ射線照射對不同品系小鼠的抑瘤作用 [J]. 國際放射醫學核醫學雜志，2012，36（2）：97-100.

[3]王忻妍，王月英，吳紅英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合放、化療抗腫瘤作用的研究[J].中國醫藥導報，2013，10（32）：4-6，9.

[4]宋娜玲，孟愛民，王月英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合γ射線對黑色素瘤B16生長的抑制作用[J].中華放射醫學與防護雜志，2012，32（3）：233-235.

[5]衛生部藥政局.新藥（西藥）臨床前研究指導原則匯編（藥學,藥理學,毒理學）[C].北京：衛生部藥政局，1993：137.

[6]Sehreiber H. Tumor immunologyIn Fundamental Immunology [M]. 3rd ed. New York：Raven Press Ltd，1993：l143.

[7]Frey B，Rubner Y，Kulzer L，et al. Antitumor immune responses induced by ionizing irradiation and further immune stimulation [J]. Cancer Immunol Immunother，2014，63（1）：29-36.

[8]李衛紅，王浩，周曉靚，等.腫瘤放射治療增敏劑研究新進展[J].國際放射醫學核醫學雜志，2013，37（4）：233-238.

[9]劉曉秋，王芹，周則衛，等.9401對H22肝癌小鼠放射增敏效應的研究[J].國際放射醫學核醫學雜志，2013，37（1）：13-15，37.

[10]白明華，張揚，王寶峰，等.姜黃素提高人胰腺癌PANC-1細胞放射敏感性的機制研究[J].中華放射醫學與防護雜志，2013，33（4）：360-363.

[11]于洪升，費從合，沈方臻，等.低劑量輻射聯合環磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響[J].中華放射醫學與防護雜志，2004，24（2）：31-33.

[12]王叔橋，張麗宏，李炎，等.參黃膠囊對環磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].現代藥物與臨床，2013，28（4）：504-507.

[13]Li D，Wang Y，Wu H，et al. The effects of p38 MAPK inhibition combined with G-CSF administration on the hematoimmune system in mice with irradiation injury [J]. PLoS One，2013，8（4）：62921.

（收稿日期：2014-01-14本文編輯：蘇暢）

[基金項目] 國家自然科學基金資助項目（編號81102873）；天津市自然科學基金資助項目（編號12JCQNJC09100）。

[作者簡介] 王忻妍（1979.11-），女，碩士研究生；研究方向：腫瘤治療。

▲通訊作者

表2 DHEA及聯合CTX對荷瘤鼠 L615白細胞

及骨髓有核細胞造血的影響（x±s）

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與CTX組比較，#P < 0.01；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺

2.3 DHEA、DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠L615臟器指數的影響

胸腺和脾臟是重要的免疫器官，本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯合CTX及CTX對這兩個臟器的影響。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯合CTX各組的胸腺指數均高于對照組，其中DHEA低、中劑量組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 12.280、5.993，P < 0.01）。CTX組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 4.715，P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組聯合CTX組與對照組比較差異有統計學意義（t = 3.253、7.513、2.578，P < 0.01、P < 0.05），DHEA中劑量組和DHEA中劑量聯合CTX組與CTX組比較差異有統計學意義（t = 3.284、3.019，P < 0.01）；DHEA低、中、高劑量組與對照組比較差異有統計學意義（t = 5.205、5.428、3.389，P < 0.01），DHEA低、中、高劑量聯合CTX組的脾重指數均高于對照組，差異有統計學意義（t = 8.255、17.517、10.708，P < 0.01）。見表3。

2.4 DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的平均存活時間及生命延長率的影響

腫瘤患者生存率是治療是否有效的重要指標，本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯合CTX及CTX對荷瘤小鼠存活時間的影響。DHEA各組及DHEA聯合CTX各組荷瘤小鼠平均存活天數均高于對照組，其中DHEA低、中、高劑量聯合CTX組與對照組比較差異均有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA聯合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活天數高于CTX組，其中DHEA中劑量聯合CTX組與CTX組比較差異有統計學意義（P < 0.05）。表明DHEA及DHEA聯合CTX給藥有助于提高荷瘤小鼠的平均存活時間，抑制L615腫瘤的發生發展。見表4。

表4 DHEA及DHE聯合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活時間

及生命延長率

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與CTX組比較，#P < 0.05；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺；“-”代表無數據

3 討論

化療已成為晚期惡性腫瘤患者最重要的治療方法之一，但是化療在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷機體的正常細胞，使原本免疫功能低下的腫瘤患者的免疫力進一步降低，腫瘤的發生、發展與機體的免疫功能密切相關[6-7]，所以降低化療藥物的毒副作用，提高腫瘤患者的免疫功能，充分發揮化療藥物的治療作用，日益成為國內外專家學者研究的方向[8-10]。DHEA是中國醫學科學院北京協和醫學院放射所研制的炔雌醇的衍生物，經過研究證實，其對由于輻射引起的造血組織損傷具有預防和治療的作用。本次實驗結果證明，DHEA明顯抑制荷瘤小鼠L615白血病的生長，腫瘤生長速度明顯減漫，瘤重明顯減輕，DHEA低、中、高劑量組抑瘤率分別為45.40％、67.94％、50.48％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組，與低、高兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05），說明中劑量抑制腫瘤效果好于低劑量和高劑量。環磷酰胺作為常用的化療藥物，本實驗中作為化療治療藥物[11-12]。當DHEA（低、中、高劑量）與CTX聯合應用時，抑瘤率分別為69.21％、75.87％、72.06％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。表明具有良好的協同抗瘤效果，DHEA中劑量聯合CTX組的抑瘤率（75.87％）高于CTX組（70.48％）和DHEA中劑量組（67.94％），進一步說明中等劑量DHEA具有良好療效。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官，胸腺、睥臟質量在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱，而化療藥物的應用可加重機體的免疫抑制， 因此提高化療后的免疫功能非常重要[13]。脾臟和胸腺在化療藥物作用下，其組織結構較快地發生嚴重損傷，表現為明顯萎縮，從而抑制了機體的免疫和抗病能力。實驗結果證明，DHEA單獨給藥及聯合化療均能增加胸腺和脾臟的重量。同時均能增加癌荷瘤小鼠的白細胞和骨髓有核細胞的數量。DHEA低、中、高劑量組白細胞數及DHEA聯合CTX各組的白細胞數均高于對照組，其中DHEA中劑量組、高劑量組及DHEA聯合CTX各組與對照組比較差異有統計學意義（P < 0.01），DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數要高于低劑量組，但差異無統計學意義。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于CTX組及DHEA低劑量聯合CTX組、DHEA高劑量聯合CTX組，差異有統計學意義（P < 0.01），這些結果提示單獨給予DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統有一定保護作用。

DHEA聯合CTX化療治療荷瘤小鼠后，能延長荷瘤小鼠的存活時間，生存期比單純的CTX化療生存率有所提高。表明DHEA及聯合化療對L615移植小鼠腫瘤具有顯著的協同抗瘤效果，改善化療后荷瘤小鼠的造血功能及降低免疫抑制作用，其具體作用機制有待進一步深入研究。

[參考文獻]

[1]杜利清，孟愛民，王月英，等.DHEA聯合γ射線對食管癌EC109細胞移植裸鼠的抑瘤與抗輻射作用[J].輻射研究與輻射工藝學報，2013，31（1）：6-9.

[2]王月英，王小春，吳紅英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合γ射線照射對不同品系小鼠的抑瘤作用 [J]. 國際放射醫學核醫學雜志，2012，36（2）：97-100.

[3]王忻妍，王月英，吳紅英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合放、化療抗腫瘤作用的研究[J].中國醫藥導報，2013，10（32）：4-6，9.

[4]宋娜玲，孟愛民，王月英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合γ射線對黑色素瘤B16生長的抑制作用[J].中華放射醫學與防護雜志，2012，32（3）：233-235.

[5]衛生部藥政局.新藥（西藥）臨床前研究指導原則匯編（藥學,藥理學,毒理學）[C].北京：衛生部藥政局，1993：137.

[6]Sehreiber H. Tumor immunologyIn Fundamental Immunology [M]. 3rd ed. New York：Raven Press Ltd，1993：l143.

[7]Frey B，Rubner Y，Kulzer L，et al. Antitumor immune responses induced by ionizing irradiation and further immune stimulation [J]. Cancer Immunol Immunother，2014，63（1）：29-36.

[8]李衛紅，王浩，周曉靚，等.腫瘤放射治療增敏劑研究新進展[J].國際放射醫學核醫學雜志，2013，37（4）：233-238.

[9]劉曉秋，王芹，周則衛，等.9401對H22肝癌小鼠放射增敏效應的研究[J].國際放射醫學核醫學雜志，2013，37（1）：13-15，37.

[10]白明華，張揚，王寶峰，等.姜黃素提高人胰腺癌PANC-1細胞放射敏感性的機制研究[J].中華放射醫學與防護雜志，2013，33（4）：360-363.

[11]于洪升，費從合，沈方臻，等.低劑量輻射聯合環磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響[J].中華放射醫學與防護雜志，2004，24（2）：31-33.

[12]王叔橋，張麗宏，李炎，等.參黃膠囊對環磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].現代藥物與臨床，2013，28（4）：504-507.

[13]Li D，Wang Y，Wu H，et al. The effects of p38 MAPK inhibition combined with G-CSF administration on the hematoimmune system in mice with irradiation injury [J]. PLoS One，2013，8（4）：62921.

（收稿日期：2014-01-14本文編輯：蘇暢）

[基金項目] 國家自然科學基金資助項目（編號81102873）；天津市自然科學基金資助項目（編號12JCQNJC09100）。

[作者簡介] 王忻妍（1979.11-），女，碩士研究生；研究方向：腫瘤治療。

▲通訊作者

表2 DHEA及聯合CTX對荷瘤鼠 L615白細胞

及骨髓有核細胞造血的影響（x±s）

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與CTX組比較，#P < 0.01；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺

2.3 DHEA、DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠L615臟器指數的影響

胸腺和脾臟是重要的免疫器官，本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯合CTX及CTX對這兩個臟器的影響。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯合CTX各組的胸腺指數均高于對照組，其中DHEA低、中劑量組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 12.280、5.993，P < 0.01）。CTX組與對照組比較差異有高度統計學意義（t = 4.715，P < 0.01）。DHEA低、中、高劑量組聯合CTX組與對照組比較差異有統計學意義（t = 3.253、7.513、2.578，P < 0.01、P < 0.05），DHEA中劑量組和DHEA中劑量聯合CTX組與CTX組比較差異有統計學意義（t = 3.284、3.019，P < 0.01）；DHEA低、中、高劑量組與對照組比較差異有統計學意義（t = 5.205、5.428、3.389，P < 0.01），DHEA低、中、高劑量聯合CTX組的脾重指數均高于對照組，差異有統計學意義（t = 8.255、17.517、10.708，P < 0.01）。見表3。

2.4 DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的平均存活時間及生命延長率的影響

腫瘤患者生存率是治療是否有效的重要指標，本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯合CTX及CTX對荷瘤小鼠存活時間的影響。DHEA各組及DHEA聯合CTX各組荷瘤小鼠平均存活天數均高于對照組，其中DHEA低、中、高劑量聯合CTX組與對照組比較差異均有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA聯合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活天數高于CTX組，其中DHEA中劑量聯合CTX組與CTX組比較差異有統計學意義（P < 0.05）。表明DHEA及DHEA聯合CTX給藥有助于提高荷瘤小鼠的平均存活時間，抑制L615腫瘤的發生發展。見表4。

表4 DHEA及DHE聯合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活時間

及生命延長率

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與CTX組比較，#P < 0.05；DHEA：17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯；CTX：環磷酰胺；“-”代表無數據

3 討論

化療已成為晚期惡性腫瘤患者最重要的治療方法之一，但是化療在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷機體的正常細胞，使原本免疫功能低下的腫瘤患者的免疫力進一步降低，腫瘤的發生、發展與機體的免疫功能密切相關[6-7]，所以降低化療藥物的毒副作用，提高腫瘤患者的免疫功能，充分發揮化療藥物的治療作用，日益成為國內外專家學者研究的方向[8-10]。DHEA是中國醫學科學院北京協和醫學院放射所研制的炔雌醇的衍生物，經過研究證實，其對由于輻射引起的造血組織損傷具有預防和治療的作用。本次實驗結果證明，DHEA明顯抑制荷瘤小鼠L615白血病的生長，腫瘤生長速度明顯減漫，瘤重明顯減輕，DHEA低、中、高劑量組抑瘤率分別為45.40％、67.94％、50.48％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組，與低、高兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05），說明中劑量抑制腫瘤效果好于低劑量和高劑量。環磷酰胺作為常用的化療藥物，本實驗中作為化療治療藥物[11-12]。當DHEA（低、中、高劑量）與CTX聯合應用時，抑瘤率分別為69.21％、75.87％、72.06％，與對照組比較差異有高度統計學意義（P < 0.01）。表明具有良好的協同抗瘤效果，DHEA中劑量聯合CTX組的抑瘤率（75.87％）高于CTX組（70.48％）和DHEA中劑量組（67.94％），進一步說明中等劑量DHEA具有良好療效。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官，胸腺、睥臟質量在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱，而化療藥物的應用可加重機體的免疫抑制， 因此提高化療后的免疫功能非常重要[13]。脾臟和胸腺在化療藥物作用下，其組織結構較快地發生嚴重損傷，表現為明顯萎縮，從而抑制了機體的免疫和抗病能力。實驗結果證明，DHEA單獨給藥及聯合化療均能增加胸腺和脾臟的重量。同時均能增加癌荷瘤小鼠的白細胞和骨髓有核細胞的數量。DHEA低、中、高劑量組白細胞數及DHEA聯合CTX各組的白細胞數均高于對照組，其中DHEA中劑量組、高劑量組及DHEA聯合CTX各組與對照組比較差異有統計學意義（P < 0.01），DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數要高于低劑量組，但差異無統計學意義。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于CTX組及DHEA低劑量聯合CTX組、DHEA高劑量聯合CTX組，差異有統計學意義（P < 0.01），這些結果提示單獨給予DHEA及DHEA聯合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統有一定保護作用。

DHEA聯合CTX化療治療荷瘤小鼠后，能延長荷瘤小鼠的存活時間，生存期比單純的CTX化療生存率有所提高。表明DHEA及聯合化療對L615移植小鼠腫瘤具有顯著的協同抗瘤效果，改善化療后荷瘤小鼠的造血功能及降低免疫抑制作用，其具體作用機制有待進一步深入研究。

[參考文獻]

[1]杜利清，孟愛民，王月英，等.DHEA聯合γ射線對食管癌EC109細胞移植裸鼠的抑瘤與抗輻射作用[J].輻射研究與輻射工藝學報，2013，31（1）：6-9.

[2]王月英，王小春，吳紅英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合γ射線照射對不同品系小鼠的抑瘤作用 [J]. 國際放射醫學核醫學雜志，2012，36（2）：97-100.

[3]王忻妍，王月英，吳紅英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合放、化療抗腫瘤作用的研究[J].中國醫藥導報，2013，10（32）：4-6，9.

[4]宋娜玲，孟愛民，王月英，等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯合γ射線對黑色素瘤B16生長的抑制作用[J].中華放射醫學與防護雜志，2012，32（3）：233-235.

[5]衛生部藥政局.新藥（西藥）臨床前研究指導原則匯編（藥學,藥理學,毒理學）[C].北京：衛生部藥政局，1993：137.

[6]Sehreiber H. Tumor immunologyIn Fundamental Immunology [M]. 3rd ed. New York：Raven Press Ltd，1993：l143.

[7]Frey B，Rubner Y，Kulzer L，et al. Antitumor immune responses induced by ionizing irradiation and further immune stimulation [J]. Cancer Immunol Immunother，2014，63（1）：29-36.

[8]李衛紅，王浩，周曉靚，等.腫瘤放射治療增敏劑研究新進展[J].國際放射醫學核醫學雜志，2013，37（4）：233-238.

[9]劉曉秋，王芹，周則衛，等.9401對H22肝癌小鼠放射增敏效應的研究[J].國際放射醫學核醫學雜志，2013，37（1）：13-15，37.

[10]白明華，張揚，王寶峰，等.姜黃素提高人胰腺癌PANC-1細胞放射敏感性的機制研究[J].中華放射醫學與防護雜志，2013，33（4）：360-363.

[11]于洪升，費從合，沈方臻，等.低劑量輻射聯合環磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響[J].中華放射醫學與防護雜志，2004，24（2）：31-33.

[12]王叔橋，張麗宏，李炎，等.參黃膠囊對環磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].現代藥物與臨床，2013，28（4）：504-507.

[13]Li D，Wang Y，Wu H，et al. The effects of p38 MAPK inhibition combined with G-CSF administration on the hematoimmune system in mice with irradiation injury [J]. PLoS One，2013，8（4）：62921.

（收稿日期：2014-01-14本文編輯：蘇暢）

[基金項目] 國家自然科學基金資助項目（編號81102873）；天津市自然科學基金資助項目（編號12JCQNJC09100）。

[作者簡介] 王忻妍（1979.11-），女，碩士研究生；研究方向：腫瘤治療。

▲通訊作者