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仔豬黃白痢滅活疫苗制備及應用

2014-08-12 21:36:34胡輝鄧治邦蘇五珍
江蘇農業科學 2014年6期

胡輝+鄧治邦+蘇五珍+等

摘要:從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株,研制成仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗,應用于多個發病豬場。結果表明,滅活苗組仔豬發病頭數少、病程短、癥狀輕微。仔豬大腸桿菌滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發病率,利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預防仔豬黃白痢效果明顯優于基因工程苗。

關鍵詞:仔豬;大腸桿菌;黃白痢;自體滅活菌苗;疫苗

中圖分類號: S858.282.5文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)06-0169-02

收稿日期:2013-09-22

基金項目:湖南省科學計劃(編號:2011NK3162);湖南省教育廳科學研究項目(編號:12C1204)。

作者簡介:胡輝(1970—),女,湖南寧遠人,副教授,從事動物疫病教學及技術推廣工作。E-mail:huhui5909@126.com。

通信作者:胡艷,高級獸醫師,從事動物疫病教學及技術推廣工作。E-mail:huyan0128@126.com。仔豬黃白痢是由腸毒素型大腸桿菌引起的,以哺乳仔豬排黃色、白色稀便為主要特征,是規模化、集約化大型豬場的常見病[1]。由于引起仔豬黃白痢的大腸桿菌血清型繁多(目前已確定的大腸桿菌O抗原有171 種,K抗原有103種,H抗原有60種),不同地區、不同豬場的致病性大腸桿菌血清型有較大差異,存在一定的區域性,經抗菌藥物治療后患病仔豬血清型還在不斷變化[2]。因此,現有疫苗應用效果差異較大,有的豬場免疫效果好,對仔豬保護率高,有的豬場免疫效果差,甚至發生免疫失敗[3]。為了有效預防仔豬黃白痢的發生,筆者從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株,研制成黃白痢自體滅活菌苗,應用于各發病豬場,觀察仔豬黃白痢發病情況,旨在為減少仔豬黃白痢發病率提供依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試豬選擇湖南省懷化市2縣2個有典型黃白痢病史的集約化豬場(編號A、B)的妊娠母豬進行試驗。

1.1.2疫苗仔豬黃白痢滅活苗由筆者所在實驗室研制(病料采自上述2豬場)。 K88、K99 基因工程苗系中國科學院上海生物工程中心研制,批號:090201027。

1.2方法

滅活苗組于母豬產前30、15 d分別按4 mL/頭劑量各注射1次黃白痢滅活苗;工程苗組于母豬產前第24天至第21天按說明書要求每頭注射基因工程菌苗1頭份;對照組母豬不接種任何大腸桿菌疫苗。全部母豬不投喂抗菌藥物預防。仔豬出生后每天觀察并記錄仔豬排糞、發病以及藥物治療等情況,7日齡內不發生黃痢、30日齡內不發生白痢表示預防有效[4]。所有母豬及所產仔豬均按常規方法進行其他疫苗的免疫預防接種。

1.2.1仔豬黃白痢滅活苗的制備將經過鑒定的各豬場仔豬黃白痢致病性大腸桿菌菌株分別接種于基礎培養基中,37 ℃ 培養18~24 h后制成菌懸液,經過計數確保菌液濃度為4×109~5×109 CFU/mL,加入0.4%甲醛溶液37 ℃滅活48 h,其間每隔4~5 h搖振1次,再加入菌液體積20%滅菌后的氫氧化鋁膠、0.01%硫柳汞,充分振搖,即為自體滅活苗,檢驗后分裝、加蓋、密封、貼簽,4 ℃保存備用[5]。

1.2.2菌苗安全性檢查每批次滅活苗必須經過無菌檢驗,要求菌苗無任何雜菌污染,劃線平板培養基無活菌生長。取4~5只小鼠腹腔注射菌苗0.5 mL/只,設對照組,觀察 7~8 d,要求小鼠無異常情況。取體重40 kg以上的健康豬4頭,各肌注菌苗10 mL/頭,觀察7 d,要求無明顯不良反應,若菌苗符合以上要求則為安全菌苗[6]。選擇妊娠90 d 的母豬2 頭,各注射菌苗10 mL/頭,觀察有無不良反應。將收集自懷化市10個豬場經過分離鑒定的致病性大腸桿菌菌株分別配制成滅活苗,免費應用于各發病豬場,觀察應用效果。

2結果與分析

2.1自體滅活菌苗與基因工程苗免疫效果

選擇有代表性的2豬場的懷孕母豬,分為3組,分別用基因工程苗、自體滅活苗接種,對照組不作任何處理,觀察仔豬黃白痢發病情況。由表1、表2可知,自體滅活苗組仔豬保護率分別為91%、90%,比K88、K99 基因工程苗組高12%和28%,對照組仔豬發病率分別高達47%、51%。自體滅活苗組仔豬發病頭數少、病程短、癥狀輕微易治愈。由此可知,黃白痢自體滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發病率,是預防仔豬黃白痢的最佳疫苗。

將上述仔豬黃白痢自體滅活苗免費分別應用于懷化市芷江侗族自治縣、洪江市、沅陵縣、溆浦縣等地十幾個集約化豬場,共計6 L,免疫母豬達1 000余頭。對部分豬場抽樣并測定,免疫接種后,仔豬保護率均達90%以上。

3結論與討論

3.1黃白痢自體滅活菌苗效果

本研究表明,筆者所制菌苗免疫效果比較理想,具有推廣應用價值。利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預防仔豬黃白痢的效果明顯優于基因工程苗,這可能與自體苗與豬場大腸桿菌菌型高度一致有關。本試驗選用的K88、K99基因工程苗對B豬場預防仔豬黃白痢效果差,這可能與長途運輸、售發保存條件及疫苗與豬場病原菌血清型不符有關[7]。

3.2研制多價菌苗

任何單一抗原均很難誘導全面有效的免疫保護作用,成功的仔豬大腸桿菌疫苗應該是多價聯苗[8]。多價菌苗雖能很好地預防仔豬黃白痢的發生,但大腸桿菌致病性血清型眾多。將所有的多價菌苗商品化難度較大,故而在黃白痢多發豬場應用自體菌苗是1種有效的控制方法,同時也可以降低生產成本。

3.3加強飼養管理與獸醫衛生

黃白痢免疫效果與飼養管理方式、豬場衛生狀況關系密切,引起仔豬大腸桿菌病的因素很多,對本病的防治,除了應用相應的大腸桿菌滅活苗進行免疫預防接種外,還應采取加強管理、控制環境條件、提高飼料品質、選擇特效藥物進行治療等綜合防制措施[9]。

參考文獻:

[1]蔡寶祥. 家畜傳染病學[M]. 3版.北京:中國農業出版社,2004.

[2]石愛華. 仔豬黃白痢的調查與防治[J]. 甘肅畜牧獸醫,2003,33(1):28-29.

[3]黎滿香,寧玲忠,董偉. 湖南豬致病性大腸桿菌的分離及藥物敏感性監測[J]. 畜牧獸醫雜志,2005,24(1):6-8.

[4]胡輝. 仔豬大腸桿菌多價基因工程苗推廣應用試驗[J]. 湖北畜牧獸醫,2007(6):26-27.

[5]馬海利,李永強,王瑞吉,等. 仔豬黃白痢大腸桿菌滅活苗的研制與應用[J]. 養豬,1995(3):38-39.

[6]王多福,魏玉明,馮國延.仔豬大腸桿菌滅活苗的研制及效果觀察[J]. 中國動物檢疫,2005,17(5):29-30.

[7]熊忠良,周紹鳳,宋如錫,等. 仔豬黃白痢自體滅活菌苗的研制與應用效果觀察[J]. 甘肅畜牧獸醫,2000,30(6):4-6.

[8]孫宇,沈玉春. 仔豬大腸桿菌K88-ST1-LTB三價基因工程滅活疫苗的應用實驗[J]. 中國獸藥雜志,2002,36(9):35-36.

[9]彥桂軍,丁家波,周明榮. 仔豬大腸桿菌四價提純苗對仔豬黃痢的預防效果[J]. 中國獸醫學報,2000,20(4):371,413.李娜,張保平,王文彬,等. 常德地區雞場致病性大腸桿菌血清型鑒定[J]. 江蘇農業科學,2014,42(6):171-172.

摘要:從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株,研制成仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗,應用于多個發病豬場。結果表明,滅活苗組仔豬發病頭數少、病程短、癥狀輕微。仔豬大腸桿菌滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發病率,利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預防仔豬黃白痢效果明顯優于基因工程苗。

關鍵詞:仔豬;大腸桿菌;黃白痢;自體滅活菌苗;疫苗

中圖分類號: S858.282.5文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)06-0169-02

收稿日期:2013-09-22

基金項目:湖南省科學計劃(編號:2011NK3162);湖南省教育廳科學研究項目(編號:12C1204)。

作者簡介:胡輝(1970—),女,湖南寧遠人,副教授,從事動物疫病教學及技術推廣工作。E-mail:huhui5909@126.com。

通信作者:胡艷,高級獸醫師,從事動物疫病教學及技術推廣工作。E-mail:huyan0128@126.com。仔豬黃白痢是由腸毒素型大腸桿菌引起的,以哺乳仔豬排黃色、白色稀便為主要特征,是規模化、集約化大型豬場的常見病[1]。由于引起仔豬黃白痢的大腸桿菌血清型繁多(目前已確定的大腸桿菌O抗原有171 種,K抗原有103種,H抗原有60種),不同地區、不同豬場的致病性大腸桿菌血清型有較大差異,存在一定的區域性,經抗菌藥物治療后患病仔豬血清型還在不斷變化[2]。因此,現有疫苗應用效果差異較大,有的豬場免疫效果好,對仔豬保護率高,有的豬場免疫效果差,甚至發生免疫失敗[3]。為了有效預防仔豬黃白痢的發生,筆者從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株,研制成黃白痢自體滅活菌苗,應用于各發病豬場,觀察仔豬黃白痢發病情況,旨在為減少仔豬黃白痢發病率提供依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試豬選擇湖南省懷化市2縣2個有典型黃白痢病史的集約化豬場(編號A、B)的妊娠母豬進行試驗。

1.1.2疫苗仔豬黃白痢滅活苗由筆者所在實驗室研制(病料采自上述2豬場)。 K88、K99 基因工程苗系中國科學院上海生物工程中心研制,批號:090201027。

1.2方法

滅活苗組于母豬產前30、15 d分別按4 mL/頭劑量各注射1次黃白痢滅活苗;工程苗組于母豬產前第24天至第21天按說明書要求每頭注射基因工程菌苗1頭份;對照組母豬不接種任何大腸桿菌疫苗。全部母豬不投喂抗菌藥物預防。仔豬出生后每天觀察并記錄仔豬排糞、發病以及藥物治療等情況,7日齡內不發生黃痢、30日齡內不發生白痢表示預防有效[4]。所有母豬及所產仔豬均按常規方法進行其他疫苗的免疫預防接種。

1.2.1仔豬黃白痢滅活苗的制備將經過鑒定的各豬場仔豬黃白痢致病性大腸桿菌菌株分別接種于基礎培養基中,37 ℃ 培養18~24 h后制成菌懸液,經過計數確保菌液濃度為4×109~5×109 CFU/mL,加入0.4%甲醛溶液37 ℃滅活48 h,其間每隔4~5 h搖振1次,再加入菌液體積20%滅菌后的氫氧化鋁膠、0.01%硫柳汞,充分振搖,即為自體滅活苗,檢驗后分裝、加蓋、密封、貼簽,4 ℃保存備用[5]。

1.2.2菌苗安全性檢查每批次滅活苗必須經過無菌檢驗,要求菌苗無任何雜菌污染,劃線平板培養基無活菌生長。取4~5只小鼠腹腔注射菌苗0.5 mL/只,設對照組,觀察 7~8 d,要求小鼠無異常情況。取體重40 kg以上的健康豬4頭,各肌注菌苗10 mL/頭,觀察7 d,要求無明顯不良反應,若菌苗符合以上要求則為安全菌苗[6]。選擇妊娠90 d 的母豬2 頭,各注射菌苗10 mL/頭,觀察有無不良反應。將收集自懷化市10個豬場經過分離鑒定的致病性大腸桿菌菌株分別配制成滅活苗,免費應用于各發病豬場,觀察應用效果。

2結果與分析

2.1自體滅活菌苗與基因工程苗免疫效果

選擇有代表性的2豬場的懷孕母豬,分為3組,分別用基因工程苗、自體滅活苗接種,對照組不作任何處理,觀察仔豬黃白痢發病情況。由表1、表2可知,自體滅活苗組仔豬保護率分別為91%、90%,比K88、K99 基因工程苗組高12%和28%,對照組仔豬發病率分別高達47%、51%。自體滅活苗組仔豬發病頭數少、病程短、癥狀輕微易治愈。由此可知,黃白痢自體滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發病率,是預防仔豬黃白痢的最佳疫苗。

將上述仔豬黃白痢自體滅活苗免費分別應用于懷化市芷江侗族自治縣、洪江市、沅陵縣、溆浦縣等地十幾個集約化豬場,共計6 L,免疫母豬達1 000余頭。對部分豬場抽樣并測定,免疫接種后,仔豬保護率均達90%以上。

3結論與討論

3.1黃白痢自體滅活菌苗效果

本研究表明,筆者所制菌苗免疫效果比較理想,具有推廣應用價值。利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預防仔豬黃白痢的效果明顯優于基因工程苗,這可能與自體苗與豬場大腸桿菌菌型高度一致有關。本試驗選用的K88、K99基因工程苗對B豬場預防仔豬黃白痢效果差,這可能與長途運輸、售發保存條件及疫苗與豬場病原菌血清型不符有關[7]。

3.2研制多價菌苗

任何單一抗原均很難誘導全面有效的免疫保護作用,成功的仔豬大腸桿菌疫苗應該是多價聯苗[8]。多價菌苗雖能很好地預防仔豬黃白痢的發生,但大腸桿菌致病性血清型眾多。將所有的多價菌苗商品化難度較大,故而在黃白痢多發豬場應用自體菌苗是1種有效的控制方法,同時也可以降低生產成本。

3.3加強飼養管理與獸醫衛生

黃白痢免疫效果與飼養管理方式、豬場衛生狀況關系密切,引起仔豬大腸桿菌病的因素很多,對本病的防治,除了應用相應的大腸桿菌滅活苗進行免疫預防接種外,還應采取加強管理、控制環境條件、提高飼料品質、選擇特效藥物進行治療等綜合防制措施[9]。

參考文獻:

[1]蔡寶祥. 家畜傳染病學[M]. 3版.北京:中國農業出版社,2004.

[2]石愛華. 仔豬黃白痢的調查與防治[J]. 甘肅畜牧獸醫,2003,33(1):28-29.

[3]黎滿香,寧玲忠,董偉. 湖南豬致病性大腸桿菌的分離及藥物敏感性監測[J]. 畜牧獸醫雜志,2005,24(1):6-8.

[4]胡輝. 仔豬大腸桿菌多價基因工程苗推廣應用試驗[J]. 湖北畜牧獸醫,2007(6):26-27.

[5]馬海利,李永強,王瑞吉,等. 仔豬黃白痢大腸桿菌滅活苗的研制與應用[J]. 養豬,1995(3):38-39.

[6]王多福,魏玉明,馮國延.仔豬大腸桿菌滅活苗的研制及效果觀察[J]. 中國動物檢疫,2005,17(5):29-30.

[7]熊忠良,周紹鳳,宋如錫,等. 仔豬黃白痢自體滅活菌苗的研制與應用效果觀察[J]. 甘肅畜牧獸醫,2000,30(6):4-6.

[8]孫宇,沈玉春. 仔豬大腸桿菌K88-ST1-LTB三價基因工程滅活疫苗的應用實驗[J]. 中國獸藥雜志,2002,36(9):35-36.

[9]彥桂軍,丁家波,周明榮. 仔豬大腸桿菌四價提純苗對仔豬黃痢的預防效果[J]. 中國獸醫學報,2000,20(4):371,413.李娜,張保平,王文彬,等. 常德地區雞場致病性大腸桿菌血清型鑒定[J]. 江蘇農業科學,2014,42(6):171-172.

摘要:從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株,研制成仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗,應用于多個發病豬場。結果表明,滅活苗組仔豬發病頭數少、病程短、癥狀輕微。仔豬大腸桿菌滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發病率,利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預防仔豬黃白痢效果明顯優于基因工程苗。

關鍵詞:仔豬;大腸桿菌;黃白痢;自體滅活菌苗;疫苗

中圖分類號: S858.282.5文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)06-0169-02

收稿日期:2013-09-22

基金項目:湖南省科學計劃(編號:2011NK3162);湖南省教育廳科學研究項目(編號:12C1204)。

作者簡介:胡輝(1970—),女,湖南寧遠人,副教授,從事動物疫病教學及技術推廣工作。E-mail:huhui5909@126.com。

通信作者:胡艷,高級獸醫師,從事動物疫病教學及技術推廣工作。E-mail:huyan0128@126.com。仔豬黃白痢是由腸毒素型大腸桿菌引起的,以哺乳仔豬排黃色、白色稀便為主要特征,是規模化、集約化大型豬場的常見病[1]。由于引起仔豬黃白痢的大腸桿菌血清型繁多(目前已確定的大腸桿菌O抗原有171 種,K抗原有103種,H抗原有60種),不同地區、不同豬場的致病性大腸桿菌血清型有較大差異,存在一定的區域性,經抗菌藥物治療后患病仔豬血清型還在不斷變化[2]。因此,現有疫苗應用效果差異較大,有的豬場免疫效果好,對仔豬保護率高,有的豬場免疫效果差,甚至發生免疫失敗[3]。為了有效預防仔豬黃白痢的發生,筆者從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株,研制成黃白痢自體滅活菌苗,應用于各發病豬場,觀察仔豬黃白痢發病情況,旨在為減少仔豬黃白痢發病率提供依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試豬選擇湖南省懷化市2縣2個有典型黃白痢病史的集約化豬場(編號A、B)的妊娠母豬進行試驗。

1.1.2疫苗仔豬黃白痢滅活苗由筆者所在實驗室研制(病料采自上述2豬場)。 K88、K99 基因工程苗系中國科學院上海生物工程中心研制,批號:090201027。

1.2方法

滅活苗組于母豬產前30、15 d分別按4 mL/頭劑量各注射1次黃白痢滅活苗;工程苗組于母豬產前第24天至第21天按說明書要求每頭注射基因工程菌苗1頭份;對照組母豬不接種任何大腸桿菌疫苗。全部母豬不投喂抗菌藥物預防。仔豬出生后每天觀察并記錄仔豬排糞、發病以及藥物治療等情況,7日齡內不發生黃痢、30日齡內不發生白痢表示預防有效[4]。所有母豬及所產仔豬均按常規方法進行其他疫苗的免疫預防接種。

1.2.1仔豬黃白痢滅活苗的制備將經過鑒定的各豬場仔豬黃白痢致病性大腸桿菌菌株分別接種于基礎培養基中,37 ℃ 培養18~24 h后制成菌懸液,經過計數確保菌液濃度為4×109~5×109 CFU/mL,加入0.4%甲醛溶液37 ℃滅活48 h,其間每隔4~5 h搖振1次,再加入菌液體積20%滅菌后的氫氧化鋁膠、0.01%硫柳汞,充分振搖,即為自體滅活苗,檢驗后分裝、加蓋、密封、貼簽,4 ℃保存備用[5]。

1.2.2菌苗安全性檢查每批次滅活苗必須經過無菌檢驗,要求菌苗無任何雜菌污染,劃線平板培養基無活菌生長。取4~5只小鼠腹腔注射菌苗0.5 mL/只,設對照組,觀察 7~8 d,要求小鼠無異常情況。取體重40 kg以上的健康豬4頭,各肌注菌苗10 mL/頭,觀察7 d,要求無明顯不良反應,若菌苗符合以上要求則為安全菌苗[6]。選擇妊娠90 d 的母豬2 頭,各注射菌苗10 mL/頭,觀察有無不良反應。將收集自懷化市10個豬場經過分離鑒定的致病性大腸桿菌菌株分別配制成滅活苗,免費應用于各發病豬場,觀察應用效果。

2結果與分析

2.1自體滅活菌苗與基因工程苗免疫效果

選擇有代表性的2豬場的懷孕母豬,分為3組,分別用基因工程苗、自體滅活苗接種,對照組不作任何處理,觀察仔豬黃白痢發病情況。由表1、表2可知,自體滅活苗組仔豬保護率分別為91%、90%,比K88、K99 基因工程苗組高12%和28%,對照組仔豬發病率分別高達47%、51%。自體滅活苗組仔豬發病頭數少、病程短、癥狀輕微易治愈。由此可知,黃白痢自體滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發病率,是預防仔豬黃白痢的最佳疫苗。

將上述仔豬黃白痢自體滅活苗免費分別應用于懷化市芷江侗族自治縣、洪江市、沅陵縣、溆浦縣等地十幾個集約化豬場,共計6 L,免疫母豬達1 000余頭。對部分豬場抽樣并測定,免疫接種后,仔豬保護率均達90%以上。

3結論與討論

3.1黃白痢自體滅活菌苗效果

本研究表明,筆者所制菌苗免疫效果比較理想,具有推廣應用價值。利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預防仔豬黃白痢的效果明顯優于基因工程苗,這可能與自體苗與豬場大腸桿菌菌型高度一致有關。本試驗選用的K88、K99基因工程苗對B豬場預防仔豬黃白痢效果差,這可能與長途運輸、售發保存條件及疫苗與豬場病原菌血清型不符有關[7]。

3.2研制多價菌苗

任何單一抗原均很難誘導全面有效的免疫保護作用,成功的仔豬大腸桿菌疫苗應該是多價聯苗[8]。多價菌苗雖能很好地預防仔豬黃白痢的發生,但大腸桿菌致病性血清型眾多。將所有的多價菌苗商品化難度較大,故而在黃白痢多發豬場應用自體菌苗是1種有效的控制方法,同時也可以降低生產成本。

3.3加強飼養管理與獸醫衛生

黃白痢免疫效果與飼養管理方式、豬場衛生狀況關系密切,引起仔豬大腸桿菌病的因素很多,對本病的防治,除了應用相應的大腸桿菌滅活苗進行免疫預防接種外,還應采取加強管理、控制環境條件、提高飼料品質、選擇特效藥物進行治療等綜合防制措施[9]。

參考文獻:

[1]蔡寶祥. 家畜傳染病學[M]. 3版.北京:中國農業出版社,2004.

[2]石愛華. 仔豬黃白痢的調查與防治[J]. 甘肅畜牧獸醫,2003,33(1):28-29.

[3]黎滿香,寧玲忠,董偉. 湖南豬致病性大腸桿菌的分離及藥物敏感性監測[J]. 畜牧獸醫雜志,2005,24(1):6-8.

[4]胡輝. 仔豬大腸桿菌多價基因工程苗推廣應用試驗[J]. 湖北畜牧獸醫,2007(6):26-27.

[5]馬海利,李永強,王瑞吉,等. 仔豬黃白痢大腸桿菌滅活苗的研制與應用[J]. 養豬,1995(3):38-39.

[6]王多福,魏玉明,馮國延.仔豬大腸桿菌滅活苗的研制及效果觀察[J]. 中國動物檢疫,2005,17(5):29-30.

[7]熊忠良,周紹鳳,宋如錫,等. 仔豬黃白痢自體滅活菌苗的研制與應用效果觀察[J]. 甘肅畜牧獸醫,2000,30(6):4-6.

[8]孫宇,沈玉春. 仔豬大腸桿菌K88-ST1-LTB三價基因工程滅活疫苗的應用實驗[J]. 中國獸藥雜志,2002,36(9):35-36.

[9]彥桂軍,丁家波,周明榮. 仔豬大腸桿菌四價提純苗對仔豬黃痢的預防效果[J]. 中國獸醫學報,2000,20(4):371,413.李娜,張保平,王文彬,等. 常德地區雞場致病性大腸桿菌血清型鑒定[J]. 江蘇農業科學,2014,42(6):171-172.

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