防治煙草靶斑病的復配藥劑配篩選及田問藥效試驗

劉斯泓 紀明山

摘要：對從遼寧省鐵嶺市煙葉產區分離出來的煙草靶斑病菌進行室內病菌離體試驗，采用生長速率法從10種待選原藥中選出2種較優試劑進行復配試驗，并對復配藥劑進行水分散粒劑劑型配方篩選，進而確定最優配比。結果表明，在10種待選原藥中，惡霉靈、腐霉利的EC50值分別為0.1266、0.1338 mg/L，防治效果明顯優于其他原藥；腐霉利和惡霉靈按照4 ∶6比例復配后增效效果最明顯，增效比為4.364 1；對復配配方進行篩選優化，得出最優配方：潤濕劑為十二烷基硫酸鈉（3%）、十二烷基苯磺酸鈉（3%），分散劑為聚乙二醇（3%）、木質素磺酸鈉（3%），崩解劑為硫酸銨（5%），載體為硅藻土（補足至100%）；田間藥效防治試驗表明，50%腐霉利·惡霉靈800倍液防治效果最好，相對防效達到60.03%，可相對控制該病情的進一步發展。

關鍵詞：煙草靶斑病；藥劑篩選；復配；水分散粒劑；藥效

中圖分類號： S482.2+99；S435.72文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）06-0140-03

收稿日期：2013-10-15

作者簡介：劉斯泓（1989—），女，遼寧鐵嶺人，碩士研究生，從事農藥毒理學研究。E-mail：liusihong1989@126.com。

通信作者：紀明山，教授，博士生導師，主要從事生物農藥及農藥毒理學研究。E-mail：jimingshan@163.com。煙草靶斑病是我國近年來新出現的一種煙草葉部病害，該病已持續幾年在遼寧省鐵嶺市煙區發生，并有逐年加重趨勢。該病害以侵染葉片為主，也可危害煙株莖部，在苗期到大田成熟期均可發生，且有擴散迅速、連片發生的特點，危害較為嚴重，能夠使煙葉質量和產量均大幅度降低。煙草靶斑病菌不僅能夠侵染煙草，還可對番茄、茄子、甜菜等作物造成危害，已成為當前阻礙煙草等作物生產的重大問題之一。復配殺菌劑在作物病害防治中占有舉足輕重的地位，復配殺菌劑的合理應用，不僅可以達到比單一殺菌劑更有效的防治效果，還可以減少病害造成的產量損失。本研究通過對防治煙草靶斑病的殺菌劑進行藥劑篩選及復配，并對其進行水分散粒劑的配方篩選，得出防治煙草靶斑病菌的復配藥劑，以期對煙草種植及煙葉生產提供指導。

1材料與方法

1.1供試材料

煙草靶斑病病菌由沈陽農業大學煙草研究所提供。

1.2藥劑

原藥：惡霉靈、腐霉利、多菌靈、三唑酮、百菌清、烯唑醇、甲基硫菌靈、咪鮮胺、苯醚甲環唑、代森錳鋅。潤濕劑：十二烷基硫酸鈉（山東省濟南飛銘化工有限公司）、十二烷基苯磺酸鈉（天津市巴斯夫化工有限公司）、2-萘磺酸甲醛聚合物鈉鹽（河南省安陽市雙環助劑有限責任公司）。分散劑：聚乙烯醇（上海光鏵科技有限公司）、聚乙二醇（天津市西爾斯化工有限公司）、木質素磺酸鈉（天津市光復精細化工研究所）。崩解劑：硫酸銨（深圳市華昌化工有限公司）、硫酸鈉（江蘇省無錫市晶科化工有限公司）、氯化鈣（河北省唐山潔友精細生化有限公司）。載體：硅藻土（廣東省廣州思鉑化工有限公司）、高嶺土（上海創宇化工有限公司）、白炭黑（江蘇省南通綠葉化工助劑有限公司）。

1.3室內病菌離體試驗

1.3.1單一藥劑篩選采用生長抑制法篩選單一藥劑。取每種待測原藥粉劑1 g，分別配成濃度為1 g/L的單一藥劑，分別稀釋成600、700、800、900、1 000倍液，形成濃度分別為1.67、1.43、1.25、1.11、1.00 mg/L的藥液，制成含藥平板，每個處理3次重復[1]。以加入等體積無菌水的PDA平板為對照，取直徑為5 mm的菌絲塊，處理過的培養皿置于25 ℃恒溫培養箱中培養，2～3 d后取出用十字交叉法測量菌落直徑，計算各處理平均值，進而計算出菌絲生長抑制率、毒力回歸方程、抑制中濃度（EC50值）及決定系數r2[2]。

菌絲生長抑制率=（對照菌落直徑-5 mm）-（處理菌落直徑-5 mm）對照菌落直徑-5 mm×100%

1.3.2復配藥劑篩選 將單劑篩選中選出的2種效果最佳的原藥進行復配試驗，分別按照1 ∶9、2 ∶8、3 ∶7、4 ∶6、5 ∶5、6 ∶4、7 ∶3、8 ∶2、9 ∶1比例開展上述試驗，計算增效系數（SR），進而確定最佳復配配比[3]。

EC50（理論）=（A+B）/[A/EC50（A）+B/EC50（B）]

SR=EC50（理論）/EC50（實際）

式中：A、B分別代表復配藥劑中2種有效成分。當SR<0.5 時，表示拮抗作用；當0.5≤SR≤1.5 時，表示相加作用；當 SR>1.5 時，表示增效作用[4]。

1.4配方篩選及各項指標分析方法

1.4.1配方篩選方法采用擠壓造粒法制成水分散粒劑，按照潤濕劑、分散劑、載體、崩解劑的順序，通過組合篩選法依次篩選出復配藥劑的最佳助劑。初始試驗選用硅藻土為載體，以懸浮率為第一指標，最后通過正交試驗確定復配藥劑的助劑配比。

1.4.2潤濕性的測定采用刻度量筒法。稱取1 g樣品快速倒入盛有25 ℃、500 mL標準硬水的500 mL量筒中，立刻計時，記錄99%樣品沉入筒底的時間，小于1 min為合格。

1.4.3分散性的測定采用量筒混合法。稱取2 g樣品加入盛有98 mL水的100 mL量筒中，來回顛倒10次，每次2 s，靜置1 h后目測其分散性。再顛倒10次，使其完全再分散，靜置1 d后顛倒量筒，記錄使沉積物再分散而顛倒的次數，低于10次為合格。

1.4.4崩解性的測定以樣品顆粒在水中全部崩解的時間進行評價。將0.5 g樣品顆粒加入盛有25 ℃、90 mL蒸餾水的100 mL具塞量筒中，塞緊筒口，夾住量筒中部，以8 r/min速度繞中心旋轉，直到樣品在水中全部崩解，一般要求崩解時間小于3 min[5]。

1.4.5懸浮率的測定按照GB/T 14825《農藥懸浮率測定方法》測定。

1.5田間藥效防治試驗

田間藥效防治試驗在鐵嶺市昌圖縣雙廟子鎮煙葉種植產區進行，設置50%腐霉利·惡霉靈水分散粒劑600、800、1 000 倍液，腐霉利800倍液，惡霉靈800倍液及清水對照，共計6個處理，每個處理3次重復。株距50 cm，每壟20株煙株，壟寬1.2 m，共選擇5株，每小區面積60 m2。施藥前進行病情調查，并于首次和第2次施藥7 d后調查病情，計算病情指數，根據病情指數增長率計算相對防效[6]。煙草靶斑病病害分級標準：0級：無病斑；1級：病斑占整個葉片面積的1%以下；3級：病斑占整個葉片面積的10%以下；5級：病斑占整個葉片面積的30%以下；7級：病斑占整個葉片面積的50%以下；9級：病斑占整個葉片面積的50%及以上[7]。

病情指數=∑（各級病葉數×相對病級值）調查總葉片數×最高級值×100

病情指數增長率=施藥后病情指數-施藥前病情指數施藥前病情指數×100%

相對防效=對照病情指數增長率-處理病情指數增長率對照病情指數增長率×100%

2結果與分析

2.1藥劑篩選結果

2.1.1單一藥劑篩選由表1可見，惡霉靈的EC50值為0126 6 mg/L，在10種供試藥劑中其EC50值最小，說明其對煙草靶斑病菌的抑制效果最好；腐霉利的EC50值也很小，為0133 8 mg/L；苯醚甲環唑、代森錳鋅的EC50值相對較大，說明這2種藥劑抑菌效果較差。由此可見，惡霉靈、腐霉利對煙草靶斑病菌具有較好的防治效果，可用于復配藥劑。

表110種殺菌劑對煙草靶斑病菌的毒力測定

原藥毒力回歸方程EC50值

（mg/L）決定系數

（r2）惡霉靈y=1.749 2x+6.569 80.126 60.905 1腐霉利y=1.824 3x+6.593 80.133 80.742 2多菌靈y=1.800 1x+5.517 60.515 80.975 7三唑酮 y=2.677 4x+5.563 80.615 80.960 1百菌清y=1.597 5x+5.316 00.634 10.945 5烯唑醇 y=1.578 8x+5.172 70.777 20.884 9甲基硫菌靈y=1.526 2x+5.103 10.855 90.935 9咪鮮胺y=4.174 9x+4.853 81.084 00.874 4苯醚甲環唑y=2.141 3x+4.752 01.305 60.942 8代森錳鋅y=2.080 5x+4.604 51.549 20.763 6

2.1.2復配藥劑篩選試驗選擇腐霉利和惡霉靈進行復配，測定其對煙草靶斑病菌的抑制效果，計算增效系數。由表2可見，當腐霉利與惡霉靈按照1 ∶9、2 ∶8、8 ∶2、9 ∶1比例復配后，均顯示相加作用；以其他比例復配時，均顯示增效作用；當腐霉利和惡霉靈按照4 ∶6比例復配時，增效系數最大，為4.364 1，明顯高于其他處理，由此確定腐霉利 ∶惡霉靈為 4 ∶6 為最佳配比。表2腐霉利和惡霉靈復配對煙草靶斑病菌的聯合毒力測定

腐霉利和惡霉靈配比毒力回歸方程決定系數

（r2）EC50值（mg/L）實測值理論值增效系數

（SR）10 ∶0y=1.749 2x+6.569 80.905 10.126 6 0 ∶10y=1.824 3x+6.593 80.742 20.133 8 1 ∶9y=1.546 9x+5.645 40.854 70.133 2 0.133 0 0.998 52 ∶8y=1.633 6x+5.286 40.856 20.107 0 0.132 3 1.236 43 ∶7y=2.584 4x+4.877 50.932 50.066 6 0.131 6 1.974 44 ∶6y=2.874 5x+5.122 10.968 40.030 0 0.130 8 4.364 15 ∶5y=2.551 2x+4.685 40.912 70.053 8 0.130 1 2.417 86 ∶4y=2.845 6x+5.655 60.817 20.051 3 0.129 4 2.522 87 ∶3y=1.988 8x+5.122 80.971 30.077 9 0.128 7 1.652 78 ∶2y=2.743 3x+5.736 10.855 20.130 6 0.128 0 0.979 89 ∶1y=2.155 8x+4.975 90.935 50.100 5 0.127 3 1.266 4

2.2水分散粒劑配方篩選結果

2.2.1潤濕劑篩選將待選潤濕劑十二烷基硫酸鈉（K12）、十二烷基苯磺酸鈉（DBS）、2-萘磺酸甲醛聚合物鈉鹽（NNO）按5%潤濕劑+50%復配原藥+載體（補足至100%），分別制成水分散粒劑，進行潤濕性測定，記錄潤濕時間，篩選出最佳潤濕劑。由表3可見，在同樣用量下，將K12、DBS按照1 ∶1比例混合時，潤濕時間最短，為10 s，潤濕效果最好，因此將其作為最佳潤濕劑。

潤濕劑篩選結果

潤濕劑用量（%）潤濕時間（s）潤濕性能K12514合格DBS542合格NNO537合格K12+DBS（1 ∶1）510合格K12+NNO（1 ∶1）528合格

2.2.2分散劑篩選待選分散劑聚乙烯醇（PVA）、聚乙二醇（PEG）、木質素磺酸鈉（CMN）按5%分散劑+5%最佳潤濕劑+50%復配原藥+載體（補足至100%），分別制成水分散粒劑，進行分散性測定，記錄潤濕時間、分散性，計算懸浮率，篩選出最佳分散劑。由表4可見，在同樣用量下，PEG、CMN按照 1 ∶1 比例混合時，懸浮率最大，為85.86%，懸浮性能最好，潤濕性和分散性也相對較好。因此選用PEG、CMN（比例為1 ∶1）作為最佳分散劑。

分散劑篩選結果

分散劑用量

（%）潤濕時間

（s）分散性

（次）分散

性能懸浮率

（%）PVA5114合格63.19PEG5135合格79.93CMN574合格72.14PEG+PVA（1 ∶1）5145合格72.56PEG+CMN（1 ∶1）574合格85.86

2.2.3載體篩選待選載體硅藻土、高嶺土、白炭黑，按5%最佳潤濕劑+5%最佳分散劑+50%復配原藥+載體（補足至100%），分別制成水分散粒劑，進行載體篩選，記錄潤濕時間，計算懸浮率，篩選出最佳載體。由表5可見，在相同用量的3種載體處理下，硅藻土處理的懸浮率為86.26%，明顯高于高嶺土、白炭黑處理，且該處理潤濕時間最短，分散性能最好。因此選用硅藻土為最佳載體。

載體篩選結果

載體用量

（%）潤濕時間

（s）分散性

（次）分散性能懸浮率

（%）硅藻土4075合格86.26高嶺土4096合格69.55白炭黑40107合格70.32

2.2.4崩解劑篩選待選崩解劑硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈣，按5%崩解劑+5%最佳潤濕劑+5%最佳分散劑+50%復配原藥+最佳載體（補足至100%），分別制成水分散粒劑，進行崩解劑篩選，記錄崩解時間，篩選出最佳崩解劑。由表6可見，在同樣用量下，崩解時間順序為硫酸銨處理<硫酸鈉處理<氯化鈣處理，崩解性能均合格。因此選用硫酸銨為最佳崩解劑。

2.3配方優化

在以上篩選試驗的基礎上，將篩選出的助劑按正交設計

崩解劑篩選結果

崩解劑用量

（%）崩解時間

（s）崩解性能硫酸銨523合格硫酸鈉530合格氯化鈣535合格

方法設定不同用量組合，加工成水分散粒劑，分別測定崩解時間、分散性能、懸浮率。由表7可見，潤濕劑用量對各性能指標影響不大；分散劑用量對懸浮率有較大影響，隨著分散劑用量增加，懸浮率隨之增加；崩解劑用量對崩解性能影響較大，崩解時間隨崩解劑用量增加而縮短；當潤濕劑用量6%、分散劑用量6%、崩解劑用量5%時，崩解時間最短，為18 s，懸浮率最高，為86.64%，分散性能合格。

不同配方的崩解時間、分散性能和懸浮率測定

編號潤濕劑

（%）分散劑

（%）崩解劑

（%）崩解時間

（s）分散性

（次）分散性能懸浮率

（%）14442511不合格63.032455229合格72.563466197合格80.0645452311不合格69.985556207合格75.036564264合格80.367646199合格75.228654246合格77.559665185合格86.64

本研究篩選出的最佳試劑配方：潤濕劑為K12（3%）、DBS（3%），分散劑為PEG（3%）、CMN（3%），崩解劑為硫酸銨（5%），載體為硅藻土（補足至100%）。

2.4田間藥效試驗結果

2次施藥后，50%（腐霉利+惡霉靈）水分散粒劑復配藥劑的相對防效均高于腐霉利和惡霉靈單劑，說明復配藥劑的藥效優于單一藥劑。對于復配藥劑而言，稀釋600、800、1 000倍液對煙草靶斑病的相對防效分別為5661%、60.03%、58.25%，因此50%（腐霉利+惡霉靈）水分散粒劑稀釋800倍相對防效最高，可在一定程度上控制病情的發展。表8不同處理對煙草靶斑病的防治效果

處理稀釋

倍數施藥前

病情指數第1次施藥后7 d第2次施藥后7 d病情指數病情指數

增長率（%）相對防效

（%）病情指數病情指數

增長率（%）相對防效

（%）50%（腐霉利+惡霉60023.4424.665.2041.7226.3111.2856.61靈）水分散粒劑復配80023.0524.164.8246.0825.6511.2860.03100024.0225.646.7424.4826.8511.7858.25腐霉利單劑80019.8621.16.2430.0923.2116.8740.22惡霉靈單劑80020.9822.376.6325.8124.5517.0239.69清水—23.8525.988.9330.5828.22

3結論與討論

本研究結果表明，10種藥劑對煙草靶斑病菌均有不同程度的抑制作用，惡霉靈、腐霉利抑菌效果最顯著，EC50值分別為0126 6、0.133 8 mg/L，可作為復配藥劑；腐霉利與惡霉靈按照4 ∶6比例復配后，增效效果最明顯，增效系數為 4.364 1，且明顯高于其他比例復配藥劑和腐霉利、惡霉靈的單一藥劑，將其確定為最佳配比；分別篩選出最佳潤濕劑、分

散劑、載體、崩解劑，并進行配方優化，得出最佳試劑配方：潤濕劑為十二烷基硫酸鈉（3%）、十二烷基苯磺酸鈉（3%），分散劑為聚乙二醇（3%）、木質素磺酸鈉（3%），崩解劑為硫酸銨（5%），載體為硅藻土（補足至100%）；將制得水分散粒劑用于田間藥效試驗，結果表明50%（腐霉利+惡霉靈）水分散粒劑800倍液相對防效最高，為60.03%，對煙草靶斑病的發生具有一定控制作用。本研究結果對煙草靶斑病的防控具有一定指導意義。

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