生姜離體快繁方案

楊曉娜

（保山學院資源與環境學院，云南 保山 678000）

1 生姜離體快繁的意義

生姜(Zingiber offwinale Rose)為姜科屬的多年生宿根植物，是一年生蔬菜作物，生姜營養豐富，且具有藥用價值[1-2]，需求量很大,是人民生活中不可缺少的藥食兼用型植物，原產我國及東南亞地區。由于生姜不開花結實，不能利用有性繁殖進行育種，生產上長期以成熟根狀莖為種源進行無性繁殖，不僅繁殖系數低，容易造成姜體內多種病毒及青枯假單孢桿菌（Ralstonia solanacearum）積累，而且易通過帶病的種姜傳播病害，例如姜青枯腐爛病(姜瘟)、猝倒病(根腐病)[3]。目前國內外對生姜病毒的防治仍沒有特效藥和抗病品種，因此造成了生姜優良種性退化，品質變劣，藥用成分含量不穩定，產量降低，嚴重的可造成30%～50%的減產[4]。通過植物組織培養技術，可以解決上述問題，但成本較高，限制了該項技術的發展。所以開展生姜及種苗快速繁殖技術研究，可以為生姜種苗產業化奠定技術基礎。

2 生姜離體快繁的研究進展

隨著植物組織培養快速繁殖技術的不斷成熟，對生姜的不同外植體進行組培的研究已有一些報道，如：1995年張秀清等以生姜生長點為外植體，研究得出在含KT或BAA的培養基都能生根[5]。同年黃菊輝等以生姜莖尖和葉鞘切段為外植體，研究提出NAA對生根是絕對且必要的，6-BA和NAA可促進生姜幼芽發生，且具有相互增益效應[6]。1999年潘學峰等用生姜莖尖為外植體[7]。2002年李承永等用生姜根狀莖為外植體,進行了離體培養研究[8]。2002年徐燕等以生姜芽尖為外植體，MS為基本培養基，添加不同的激素配比，在MS+BA1.0 mg／L上誘導分化形成苗，在1.5MS+BA2.0 mg／L+IBAO.5 mg／L上繼代培養可達到快繁的目的，生根適宜的培養基為MS+NAAO.1 mg／L，通過該生產體系，可在短期內生產出大量的健壯合格苗，達到快繁目的[9]。2002年唐玉明等研究用不同的處理方法對生姜組織培養的影響，認為加入BA的培養基，愈傷組織誘導率明顯高于加入KT的培養基，BA更有利于生姜愈傷組織的分化[10]。2003年張玲等用生姜的成熟根狀莖、幼芽肉質基部和假莖作外植體進行快繁的技術，結果表明愈傷組織的誘導僅出現在添加了2,4-D的培養基中，NAA對誘導愈傷組織沒有效果[11-12]。2006年雷開榮對生姜組織培養快速繁殖技術進行了研究，建立了生姜試管苗增殖與生根同步培養技術規程[13]。這些研究結果為生姜的快繁提供了技術基礎。

3 生姜離體快繁的技術路線

姜塊→培養催芽→姜芽 （外植體）→消毒→解剖鏡下剝取0.2～0.3mm的莖尖→接種（脫分化培養基）→誘導愈傷組織→接種（再分化培養基）→誘導芽分化→繼代培養→叢芽→接種（生根培養基）→生根培養→煉苗移栽→大田準備和移栽→田間管理→上市銷售

4 材料與方法

4.1 材料

外植體的選擇：

選用四川樂山五指黃姜。將姜塊在流水下反復沖洗干凈，涼干水分后放置在消過毒的砂盤中，用細砂覆蓋，澆上少量的水分，將砂盤放至35～37℃的高溫下培養催芽。當姜芽萌發至2～3cm時，及時切下作為接種材料外植體[14]。

4.2 外植體的消毒

將切取下來的幼芽在流水下沖洗2～3h，在50℃度高溫下，快速處理5min；此后，用0.1%HgCl2消毒10min，沖洗6～7次，再用5%的次氯酸鈉液消毒5min，無菌水反復沖洗4～5次。在解剖鏡下剝取大小為0.2～0.3mm 的莖尖，待接種[14]。

4.3 培養基

初代培養：脫分化培養基MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L;繼代培養：再分化培養基 MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L;生根培養基：MS+NAA 1.5mg／L+KT1mg／L

4.4 初代培養物的建立

在25～26℃溫度下，將剝取大小為0.2～0.3mm的莖尖接種在MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L（脫分化培養基）上的莖尖，經過 4～6 周的暗培養，誘導出愈傷組織[13]。

4.5 芽分化和幼芽繼代

將分化出的愈傷組織，接種于MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L（再分化培養基），在室溫25～26℃度下，經過4～5周的光培養后，培養基上的愈傷組織分化出叢生芽，經過第二代繼代培養，叢生芽的分化數量不斷增加[13]。

4.6 生根培養

當試管苗長至2～5cm時，及時地將叢芽切割成單株接種在MS+NAA 1.5mg／L+KT1mg／L（生根培養基）上，經過 30～40d 的壯苗生根培養后，根長達到2～3cm時，準備煉苗移栽[13]。

4.7 煉苗移栽

把長達2～3cm的根在自然光照和28～30℃的溫度條件下煉苗25d左右，當苗高7～10cm有4～5條白色長根時，從瓶內取出洗凈培養基，然后移栽至大棚盛有熟土+腐熟有機肥(2：1)的營養杯種植。此時棚內溫度保持在25～30℃，相對濕度80%，棚頂覆蓋遮陽網。1個月后，植株高達10～15cm時，揭開棚頂遮陽網煉苗1周，然后直接進行大田種植[14]。

4.8 大田準備和移栽

選擇平坦、肥沃的土地，要求土壤濕潤，不積水，開好排水溝。田塊經兩犁兩耙后平整土地，然后按東西向挖深溝，溝深30cm，溝底寬30cm，畦高60cm，溝與溝之間約30cm。挖好溝后先在溝內覆一層熟土約10cm，將農家肥與復合肥混合放在熟土上面，再覆上一層熟土，然后把生姜組培苗去掉營養袋種入溝內。株距20-25cm，密度6000～7000／667m2。種好后澆定根水?；适┺r家肥2500kg／667m2，復合肥50kg／667m2、兩者混合施人溝底[15]。

4.9 田間管理

組培苗種植后1周開始長出新根，視墑情適當澆水。第一次追腐熟糞水 500-750kg／667m2，或尿素 4-5kg／667m2、對水 250kg／667m2。6～7月份生姜組培苗苗高30cm、有1～2個分枝時施第一次壯苗肥(復合肥75kg／667m2)。8月份植株進入生長旺盛期，植株生長速度加快，生長量大，追施長效完全肥，混適量速效肥(花生麩肥75kg／667m2，復合肥10kg／667m2)，偏重施磷、鉀肥，可以促進根莖肥大，減少病害。生姜喜濕潤，忌水。在生姜組培苗定植約20d后結合松土除草培土。生姜苗封行后不宜中耕。11～12月份為生姜的收獲期，選擇晴天收獲生姜，收獲后的生姜放在屋內陰涼處晾干，然后貯藏，作為第二原種備用，或上市銷售[15]。

5 生姜組培苗的市場前景

利用組織培養技術，限制病毒在植物分生組織的擴散速度，快速繁殖脫毒脫菌種苗，能克服種性退化，提高抗逆生疏，有效防治植物病毒病。目前經實踐統計證明，生姜的組培苗當年種植當年收獲，平均產量約2900kg／667m2，比普通姜增產10%。第二年用組培生姜原種種植，平均產量可達4200kg／667m2，比普通姜增產約30%。組培姜單重增大，均勻整齊，皮色光亮，色澤鮮黃，質量好，辣味濃，商品性好，市場銷路好[15]。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：化學工業出版社,2005.

［2］張虹,羅鵬.四川幾種常見五味子的核型研究[J].西南農業大學學報,2000,22(2)：177-180.

［3］王教義.姜脫毒組培技術研究[J].山東農業科學,1999(6)：7-9.

［4］高山林,卞云云,陳伯君.生姜組織培養脫病毒、快繁和高產栽培[J].中國蔬菜,1999(3)：40-41.

［5］張秀清,王春英,劉玉敬,等.萊蕪片姜生長點的離體培養與快速繁殖(簡報)[J].植物生理學通訊,1995,31(3)：192-193.

［6］黃菊輝.生姜種質資源的離體繁殖和保存[J].中國農業科學,1995,28(2)：24-30.

［7］潘學峰,李紹良,符明.生姜莖尖離體培養的研究[J].海南大學學報：自然科學版,1999,17(1)：59-63.

［8］李承永,蓋樹鵬,王玉華.萊蕪生姜根狀莖再生植株的研究[J].山東農業科學,2002(1)：16-17.

［9］徐燕,李忠幸,聶華林.生姜組織培養研究[J].長江蔬菜,2002.

［10］唐玉明,李興蓮,任道群,等.不同方法處理對生姜組織培養的影響[J].西南農業學報,2002,15(4)：116-118.

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［12］趙德婉,徐坤,艾希珍.生姜高產栽培[M].北京：金盾出版社,2000.

［13］雷開榮.生姜組織培養中增殖與生根同步培養技術研究[J].中國種業,2006(5)：33-34.

［14］宣樸,郭元林,岳春芳,等.生姜莖尖組培快繁技術研究[J].西南農業學報,2004,17(4)：484-486.

［15］杭玲,黃卓忠,江文,等.生姜組織培養快繁技術研究與應用[J].江蘇農業科學,2006：125-127.