續斷炮制工藝和炮制機制的研究進展Δ

陶 益，季 德，蔡寶昌，陸兔林（南京中醫藥大學中藥炮制重點實驗室，南京 210046）

續斷又名接骨、屬折，為川續斷科植物川續斷的干燥根，始載于《本經》，味苦、辛，微溫，歸肝、腎經。具有補肝腎、強筋骨、續折傷、止崩漏等功效。臨床常用于腰膝酸軟、風濕痹痛、崩漏、胎漏、跌打損傷等。生品補肝腎、通血脈、強筋骨，多用于腰膝酸軟；酒炙后可引藥向外行散，增強通血脈之功，多用于風濕痹痛、跌打損傷。有研究結果顯示，三萜皂苷類為續斷主要的藥效成分[1-2]。川續斷皂苷Ⅵ是續斷中主要的三萜皂苷類成分，是2010年版《中國藥典》用于控制續斷藥材質量的指標性成分之一。現代藥理研究結果顯示，續斷具有抗菌消炎、增強免疫、防氧化、抗衰老、促骨形成、心肌保護等多重功效，尤其是對跌打損傷、關節疼痛患者具有良好的治療效果[3]，是當代醫藥研究的熱點藥物之一。續斷現代炮制方法主要有切片、酒炙、鹽制、炒制、麩制、制炭等，2010年版《中國藥典》僅收載續斷片、酒續斷和鹽續斷3種在臨床上應用。本文從續斷炮制工藝出發，結合現代研究進展，對不同規格續斷飲片的炮制機制進行綜述。

1 續斷古代炮制方法

續斷古代炮制的方法很多，始載于南北朝劉宋時代，主要包括凈制、切制、酒制、米泔制、焙制、面制、炒制等。南朝宋時有酒浸焙制，唐代有米泔浸制，宋代有酒浸炒、酒浸，元代有面水炒制，明代增加了酒洗、酒拌、酒蒸、炒制等，清代有酒洗蒸、酒煎制。酒制又包括酒焙、酒炒、酒浸、酒洗、酒拌、酒蒸、酒煎等。在古代炮制方法中，以酒制法為主，續斷酒炙后可引藥上行、行散，增強通血脈、強筋骨的功效。

2 續斷各省市和《中國藥典》炮制方法

自1988年至今，全國各省和直轄市出版了一系列中藥飲片炮制規范。在續斷凈制方面，各地均要求“去雜質”，北京、上海、湖南、安徽、廣西等地還要求篩去碎屑。在切制方面，各地一般為“濕切”（洗潤后切）。炮炙方面，除山東、吉林外，大部分地區都有續斷酒炙品和鹽炙品，廣西和上海還包括炒制品（加麥麩和清炒），浙江還包括續斷炒炭。酒炙品以文火炒續斷，顏色至微黑或灰褐色，略有酒氣，輔料黃酒用量多以100∶10、100∶15為度，加酒形式以“先拌勻、后悶潤至透”為主，北京對悶潤時間進行了量化，為1～2h。鹽炙品以文火炒續斷，顏色至黑褐色，味微咸，輔料鹽用量多以100∶2為度，加鹽形式以“拌勻、悶潤至透”為主。

自1977年版《中國藥典》開始收載續斷，并規定了炮制方法和規格。1977年版、1985年版、1990年版、1995年版《中國藥典》只收載生續斷，均強調洗凈潤透、切薄片。2000年版和2005年版《中國藥典》開始收載續斷酒炙品和鹽炙品：酒炙時用文火炒顏色至微帶黑色，輔料黃酒用量為100∶10為度，加酒形式以拌勻、悶透；鹽炙時用文火炒干，輔料鹽用量為100∶2為度，加鹽形式以鹽水拌勻、悶透。2000年版和2005年版《中國藥典》新增生續斷浸出物測定項目，不得＜45.0%。2010年版《中國藥典》中，酒炙時輔料黃酒用量變為“100∶10～20”，續斷片增加含量測定（川續斷皂苷Ⅵ＞1.5%）、鑒別、檢查（水分＜15%，總灰分＜12%，酸不溶性灰分＜3%）3個項目，酒炙品和鹽炙品也增加了上述3個項目，而且鹽炙品還增加了性狀標準（表面黑褐色）。

3 續斷代表性專著炮制方法

自1985年至今，續斷被歷版《中藥炮制學》教材收載，主要有生續斷、酒續斷和鹽續斷這3種規格，并規定了炮制方法和質量標準。教材還收載了續斷炒炭這一規格。除1985年版教材外，其他教材收載生續斷炮制時均強調除雜質，在續斷片性狀方面均要求皮部墨綠色或棕色，木部灰黃色或黃褐色。除1985年版教材和1999年版教材外，大部分教材均要求續斷酒炙時黃酒被吸盡后，再用文火進行炒制，輔料黃酒用量為100∶10或100∶12為度，加酒形式以拌勻、悶透。續斷鹽炙時，大部分教材要求用文火炒干，1985年版教材要求炒至黃黑色。輔料鹽用量均為100∶2為度，加鹽形式以鹽水拌勻、悶透。在質量要求方面，2007年版教材和2008年版教材均要求水溶性浸出物含量不得＜45.0%，而2012年版教材增加了水分（不得＜10.0%）、總灰分（不得＞12.0%）、酸不溶性灰分（不得＞3.0%）、水溶性浸出物（不得＜45.0%）、川續斷皂苷Ⅵ（不得＜1.5%）這些標準，與2010年版《中國藥典》標準一致。

4 續斷現代炮制工藝研究

張丹等[4]采用正交設計法對炒制溫度、用鹽量、悶潤時間和炒制時間進行考察，優化續斷鹽炙工藝，得到最優鹽炙條件為：500g續斷藥材，加10g鹽水浸潤45min，在150℃條件炒制8min。許臘英等[5]使用正交設計法對續斷酒炙工藝條件如黃酒用量（10%、20%、30%）、炒制溫度（150℃、170℃、190℃）、炒制時間（6min、8min、10min）進行優化，得到最佳酒炙工藝為：續斷片用10%的黃酒浸潤，下鍋溫度150℃，炒制6min。陳華曦[6]應用正交試驗法和方差分析對續斷水洗工藝進行優化，最佳水洗工藝為5倍量水、水洗4次、洗3min；最佳干燥工藝為60℃烘制17h；最佳酒炙工藝為在150℃條件下用10%黃酒炒炙6min。宋麗[7]采用正交試驗法，選擇不同黃酒用量（10%、15%、20%、25%）、酒炙溫度（100℃、130℃、160℃、190℃）和酒炙時間（6min、8min、10min、12min）對酒炙工藝進行優化，最后得到最優酒炙條件為：在100℃條件下用10%黃酒炒制6min。金奇等[8]對續斷鹽炙過程中多個工藝參數進行了優化，選擇不同鹽用量、炒制溫度、炒制時間和炒藥機轉速，得到最優鹽炙條件為：100kg續斷用2kg食鹽，在轉速40r/min且溫度210℃下炒制12 min。

5 續斷炮制前后化學成分變化研究

馬新飛等[9]采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法比較了續斷不同炮制品中川續斷皂苷Ⅵ的變化。研究結果顯示，用不同輔料、不同方法加工炮制續斷，炮制品多個成分的含量較生品發生了明顯變化，而炮制品的臨床療效各有所長。提示這些變化成分可能與功效差異存在關聯，有待進一步深入研究。

李華鵬[10]采集多個產地的續斷，并自制酒續斷和鹽續斷，HPLC-蒸發光散射檢測（ELSD）分析發現9個共有峰，與生續斷比較，酒續斷中有4個峰峰面積下降，5個峰峰面積升高；而鹽續斷中4個峰峰面積升高，川續斷皂苷Ⅵ和另外一個峰峰面積下降。值得注意的是，在酒量10%時，川續斷皂苷Ⅵ和3個峰峰面積隨酒炙溫度升高而升高；酒量為20%時，峰面積隨酒炙溫度升高而降低。

張丹等[11]研究結果顯示，總皂苷含量在酒續斷和鹽續斷中較生續斷稍有增加，指標成分川續斷皂苷Ⅵ含量升高。樊媛潔等[12]按照2010年版《中國藥典》制備的3種炮制規格制備出續斷炮制品，即續斷片、酒續斷和鹽續斷。研究結果顯示，酒續斷和鹽續斷中川續斷皂苷Ⅵ含量均升高，但是前者更為明顯；續斷皂苷Ⅹ含量則下降。作者推斷可能與續斷皂苷Ⅹ水解變川成續斷皂苷Ⅵ有關。張丹等[13]參照2010年版《中國藥典》炮制工藝，制備4種續斷炮制品，即生品、酒續斷、鹽續斷和炒續斷。結果顯示，鹽續斷總生物堿含量最高，其次為生續斷、酒續斷、炒續斷。依照《全國中藥炮制規范》制備3種炮制品，即生品、鹽續斷、酒續斷。水分測定結果顯示，生品和鹽續斷水分含量較高；溶出率結果顯示：鹽續斷＞酒續斷＞生品；微量元素檢測結果顯示，酒續斷中鈣元素和鋅元素含量較高，鹽續斷中錳元素和硒元素含量最高；熊果酸含量測定發現酒續斷和鹽續斷中熊果酸含量較生品均升高[14-15]。

Xin N等[16]按照2010年版《中國藥典》規定炮制鹽續斷，并采集了續斷片和鹽續斷的近紅外光譜，使用3種分類器進行分類，發現均具有較好地分類能力；將近紅外光譜和化學計量學手段相結合，能夠快速地區分續斷不同炮制樣品。顧曉風等[17]首先制備生續斷-生牛膝、生續斷-炙牛膝、炙續斷-生牛膝、炙續斷-炙牛膝這4組藥對樣品，然后使用3種分類器對樣品共有指紋圖譜進行分類。研究結果顯示，線性判別分析分類效果最好，其次為簇類獨立軟件模式分類法和偏最小二乘判別分類法。

6 續斷炮制前后藥理藥效變化研究

陳旭等[18]前期研究比較了炮制對續斷抗凝血作用的影響。研究結果顯示，續斷不同炮制品均具抗凝血作用，以酒炙續斷的作用最強。同時還進行了炮制品的鎮痛和抗炎藥效測定。研究結果顯示，酒續斷鎮痛效果最好，鹽續斷和生品鎮痛效果一般；酒續斷抗炎效果最好，生品次之，鹽續斷最差。炮制對續斷成分和藥效作用影響的結果顯示，續斷經酒炙后對續斷皂苷等成分產生不同程度的影響，且酒炙后活血通絡作用明顯增強。

陳華曦[6]對生續斷和酒續斷水煎液的鎮痛抗炎作用差異進行比較，發現兩者皆有鎮痛作用，但是酒續斷的鎮痛作用更強。抗炎結果顯示，兩者都能抑制小鼠耳廓炎癥和腫脹，無明顯差異。

辛繼蘭等[19]制備了續斷酒炙品、清炒品、鹽炙品，并比較3種炮制品和生品的鎮痛、抗炎和消血腫作用的差異。研究結果顯示，酒續斷的鎮痛效果和抗炎效果最好，可能與酒的行散作用有關；而鹽續斷的消血腫作用最好，可能與鹽的軟堅散節作用有關。

Li F等[20]利用脂多糖（LPS）誘導RAW264.7細胞模型篩選中藥中的抗炎成分發現，續斷提取物具有較好的抗炎活性，從而進一步對其進行分離，得到21個單體化合物，并對這些單體化合物進行炎癥測試。研究結果顯示，dipasperoside A、咖啡酸、續斷苷A、續斷苷B、川續斷皂苷Ⅵ、4′-O-乙酰基續斷皂苷Ⅵ、續斷皂苷A這7個化合物具有抗炎活性，其中dipasperosideA和川續斷皂苷Ⅵ活性最好，由此推斷這兩個成分是續斷中的主要抗炎成分。

Kim BS 等[21]報道續斷二氯甲烷部分對人肺泡、骨髓來源的間充質干細胞成骨分化的作用。與對照組比較，續斷二氯甲烷部分可以明顯增強堿性磷酸酶活性、蛋白表達骨涎蛋白和骨鈣素。研究結果顯示，二氯甲烷部份具有促進間充質干細胞成骨分化的潛能。此外，從二氯甲烷部分分離到單體化合物常春藤3-O-（2-O-乙酰基）-α-L-阿拉伯吡喃糖苷，也能明顯增加堿性磷酸酶（ALP）活性、蛋白表達水平的骨涎蛋白和骨鈣素。以上研究結果顯示，續斷二氯甲烷部分和單體常春藤3-O-（2-O-乙酰基）-α-L-阿拉伯吡喃糖苷在骨再生方面可能有臨床應用前景。

Zhou YQ 等[22]制備了川續斷的5個不同組分（生物堿、揮發油、皂苷、環烯醚萜苷和多糖），以Aβ25-35誘導PC12細胞為模型，研究5個不同組分對β-淀粉樣肽誘導的細胞毒性的保護作用。研究結果顯示，皂苷組分具有明顯的保護作用。作者對皂苷組分進行了液相分析，結果顯示，其主要成分為川續斷皂苷Ⅵ。進一步對川續斷皂苷Ⅵ及其常春藤苷元單獨進行活性測試，結果顯示，川續斷皂苷Ⅵ有明顯的活性，而其苷元沒有活性。

據報道[23-24]，從川續斷根部分離得到馬錢苷酸乙酯、綠原酸、咖啡酸、馬錢苷、茶茱萸苷、丁香樹脂醇-4′，4′′-O-雙葡糖苷、asperosaponinA、asperosaponinB、asperosaponinC等，其中馬錢苷酸乙酯、馬錢苷、茶茱萸苷、asperosaponinA、asperosapon-inB、asperosaponinC具有神經細胞保護作用，可以抑制Aβ25-35誘導的PC12細胞凋亡。

JiangWL等[25]研究了川續斷皂苷Ⅹ抗心肌缺血和再灌注損傷的潛在機制，給予10mg/kg劑量的川續斷皂苷Ⅹ，大鼠心肌抗心肌缺血和再灌注損傷的梗死體積減少，血流動力學改善，心肌損傷程度減少。此外，川續斷皂苷Ⅹ可以降低大鼠血清促炎癥因子，減少高遷移率族蛋白B1、IκB-α的磷酸化和NF-κB在缺血心肌組織中的表達。

SongJS等[26]報道，中藥提取物可能會有引起血栓的風險，所以對21種中藥提取物進行篩選，試圖發現具有促血小板凝血活性和促血栓形成風險的中藥。研究結果顯示，續斷提取物有促凝血活性。作者使用液相對續斷提取物進行表征，發現10個化合物，其中續斷皂苷C的促凝血作用最強。

LiuJJ等[27]報道，續斷皂苷Ⅻ和續斷皂苷ⅫⅠ具有促進UMR106細胞增殖的作用，并在4μm濃度下提高UMR106細胞中的堿性磷酸酶活性，而堿性磷酸酶是成骨細胞分化早期和中期的關鍵物質。研究結果顯示，續斷皂苷Ⅻ和續斷皂苷ⅫⅠ具有促進成骨細胞分化的作用。

JungHW等[28]用Ⅱ型膠原誘導關節炎小鼠模型，研究續斷水提物在治療類風濕關節炎方面的療效。在造模后的21d，續斷水提液按50mg/kg和100mg/kg提取物灌胃給藥，43d后，處死小鼠，取血樣和關節組織進行分析。研究結果顯示，與模型組比較，續斷水提取物給藥組小鼠的關節炎得分明顯降低，血清抗Ⅱ型膠原IgG2α抗體、前列腺素、TNF-α、IL-1β和IL-6等指標也明顯降低。此外，從病理組織切片中觀察到續斷水提取物給藥組小鼠的關節構筑得到明顯改善。研究結果顯示，續斷水提取物具有較好的關節炎治療效果。

許建安[29]采用常規抗炎模型（二甲苯致小鼠耳廓腫脹）和鎮痛模型（熱板法和醋酸扭體法）等實驗研究續斷的抗炎、鎮痛作用。結果顯示，與模型組比較，100g/kg劑量續斷水煎液對大鼠耳廓腫脹度抑制率為45.2%，60g/kg劑量續斷水煎液給藥后，大鼠足跖腫脹度明顯減輕，10g/kg劑量續斷水煎液對大鼠肉芽組織增生抑制率達到44.8%，2g/kg劑量續斷水煎液給藥可以明顯增加大鼠痛閾時間，對大鼠扭體抑制率為55.8%。以上研究結果顯示，續斷水煎液具有良好的抗炎和鎮痛效果。

武密山等[30]研究川續斷皂苷Ⅵ對骨骼干細胞分化成熟的作用。研究結果顯示，1μm和10μm濃度川續斷皂苷Ⅵ可以明顯提高成骨細胞中骨鈣素含量和增強堿性磷酸酶的活性。此外，川續斷皂苷Ⅵ明顯增加核結合因子α-1（Cbfα-1）mRNA的表達，而Cbfα-1是調節骨鈣素基因表達的關鍵轉錄因子。因此，續斷皂苷Ⅵ主要通過調節Cbfα1、骨鈣素、堿性磷酸酶起到促進成骨細胞增殖和分化的作用。

7 結語

如何將現代科學技術與理論引入傳統炮制理論研究中、續斷炮制前后自身內在化學成分群發生了怎樣的量變和質變、續斷炮制后成分群變化與功效之間有何種相關性？這些問題已嚴重影響了續斷在臨床上的合理應用，同時也是制約中藥炮制理論在現代科學中進一步發展的瓶頸。解決上述問題是未來續斷炮制工藝和炮制機制研究的發展方向。

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