全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在篩查地中海貧血中的臨床診斷價(jià)值

陳 星，初德強(qiáng)，梁開(kāi)艷，江笑文

(廣州市第八人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 廣州510060)

目前，地中海貧血已成為我國(guó)南方各省常見(jiàn)的由珠蛋白肽鏈合成障礙導(dǎo)致的以小細(xì)胞低色素性貧血為主要臨床表現(xiàn)的單基因遺傳性疾病[1-3]。PCR技術(shù)與其他分子生物學(xué)方法相結(jié)合作為其明確診斷的主要方法，由于其要求高、操作方法比較繁瑣、費(fèi)用高及對(duì)罕見(jiàn)突變或新突變檢出率低，在人群普查時(shí)應(yīng)用明顯受限[4]。近年來(lái)，血紅蛋白電泳分析技術(shù)已經(jīng)逐漸成為診斷和分離異常血紅蛋白的首選方法[5]。本研究應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)和全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)對(duì)我院收治的380例病例進(jìn)行地中海貧血篩查分析，旨在探討兩種不同技術(shù)在地中海貧血篩查中的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2008年9月—2012年4月我院篩查的380例病例作為研究對(duì)象，采用PCR基因診斷技術(shù)對(duì)全部病例進(jìn)行確診。

1.2 方法

采集6 ml靜脈血作為標(biāo)本，分裝3個(gè)試管，其中1號(hào)試管注入已加EDTA-K2的血常規(guī)管中，使血細(xì)胞分析儀(希斯美康XE5000)檢測(cè)血常規(guī)。另外2個(gè)試管分別采用兩種不同技術(shù)進(jìn)行血紅蛋白電泳。①瓊脂糖凝膠電泳技術(shù):采用法國(guó)Sebia公司生產(chǎn)的Hydrasys LC電泳系統(tǒng)及配套Hyrys掃描系統(tǒng)，配套血紅蛋白電泳試劑盒HYDRAGEL HEMOGLOBIN。按照儀器操作說(shuō)明書(shū)將標(biāo)本進(jìn)行洗滌、溶血制作溶血液；點(diǎn)樣；將點(diǎn)樣梳放入電泳單元后，選擇相應(yīng)程序進(jìn)行電泳；30 min儀器自動(dòng)完成電泳、烘干等步驟；電泳完畢及時(shí)取出膠片，放入儀器染色單元，選擇相應(yīng)程序，儀器自動(dòng)進(jìn)行沖洗、染色、脫色、烘干等步驟；染色結(jié)束后取出膠片，用配套的Hyrys系統(tǒng)掃描出結(jié)果。②全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù):采用法國(guó)Sebia公司生產(chǎn)的Capillarys 2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀及其配套血紅蛋白電泳試劑盒CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)。按照儀器操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，標(biāo)本不須洗滌和溶血，直接將抗凝標(biāo)本離心沉淀，取紅細(xì)胞加入試管中(標(biāo)本量>50 μl)。把裝有標(biāo)本的試管按順序放在儀器配套的檢測(cè)架上(一個(gè)檢測(cè)架一次可檢測(cè)7個(gè)標(biāo)本，7個(gè)標(biāo)本為一批，可同時(shí)檢測(cè)多批標(biāo)本)，在檢測(cè)架第八管位置加入大約4.0 ml的溶血試劑。把檢測(cè)架送入Capillarys 2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測(cè)，約30 min后全部檢測(cè)程序完畢，查看結(jié)果。

1.3 評(píng)定指標(biāo)

患者如果出現(xiàn)血常規(guī)異常，且MCV低于82 fl、MCH 低于27 pg，HbA2不超過(guò)3.2%，但血清鐵正常，可考慮為α-地中海貧血;患者如果HbA2不小于3.5%，HbF正常或者增加，可考慮為β-地中海貧血。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

采用PCR基因診斷技術(shù)在380例病例中共確診108例地中海貧血患者。對(duì)于α-地中海貧血，毛細(xì)管電泳技術(shù)的檢出率為90.91%，明顯高于凝膠電泳技術(shù)的檢出率65.91%；對(duì)于β-地中海貧血，毛細(xì)管電泳技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)的檢出率分別為94.23%和71.15%，毛細(xì)管電泳技術(shù)檢出率明顯高于凝膠電泳技術(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)于HbH病的檢出率，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩種電泳技術(shù)的檢出率對(duì)比n(%)

對(duì)各型地中海貧血患者紅細(xì)胞( RBC)、血紅蛋白( Hb)、平均紅細(xì)胞體積( MCV)及平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)等指標(biāo)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，地中海貧血患者的MCV及MCH均值相對(duì)于異常血紅蛋白病HbE、 HbCS的均值稍低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各型RBC、Hb、MCV、MCH指標(biāo)情況對(duì)比

注：組間比較，＊P<0.05

3 討論

地中海貧血主要是由于珠蛋白基因缺失或點(diǎn)突變導(dǎo)致組成珠蛋白的α、β、γ、δ鏈等4種肽鏈中相應(yīng)肽鏈的合成障礙[6]，最終導(dǎo)致血紅蛋白組分的改變[7,8]，體積減少或壽命降低。通常將地中海貧血分為α、β、δβ和δ等4種類(lèi)型，其中以β和α型地中海貧血最為常見(jiàn)。目前，采用PCR基因診斷技術(shù)對(duì)地中海貧血基本可以確診，但技術(shù)要求高且操作復(fù)雜，加之費(fèi)用較高，使其仍然不能在我國(guó)人群篩查中普及應(yīng)用。

在本研究中，以經(jīng)該技術(shù)進(jìn)行確診的108例地中海貧血患者為參照，比較全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于α-地中海貧血，毛細(xì)管電泳技術(shù)的檢出率為90.91%，明顯高于凝膠電泳技術(shù)的檢出率65.91%；對(duì)于β-地中海貧血，毛細(xì)管電泳技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)的檢出率分別為94.23%和71.15%，毛細(xì)管電泳技術(shù)的檢出率明顯高于凝膠電泳技術(shù)。而對(duì)于HbH病的檢出率兩組比較并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。由此可見(jiàn)，相對(duì)于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在地中海貧血篩查中具有更強(qiáng)的優(yōu)越性。主要由于全自毛細(xì)管電泳技術(shù)通過(guò)在充滿電泳液的石英毛細(xì)管中進(jìn)行電泳，使得紅細(xì)胞樣品在溶血試劑中被稀釋后注射到毛細(xì)管的負(fù)極端進(jìn)行電泳分離，通過(guò)靠近正極端的415 nm光波檢測(cè)裝置對(duì)血紅蛋白進(jìn)行檢測(cè)，可以準(zhǔn)確地對(duì)血紅蛋白組分進(jìn)行相對(duì)定量[9]。相對(duì)于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)樣品處理過(guò)程的繁瑣復(fù)雜，人工操作步驟多，導(dǎo)致精確度不夠等不足，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)樣品處理簡(jiǎn)單，自動(dòng)化處理可以有效地避免人工干擾，精確度明顯優(yōu)于瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，并且具有持續(xù)時(shí)間短、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等優(yōu)勢(shì)，對(duì)于地中海貧血的篩查及診斷具有較高的特異性，可以為進(jìn)一步基因診斷和遺傳咨詢提供一定的依據(jù)。在本研究中，地中海貧血的MCV及MCH均值處于稍微偏低的水平，相比之下，異常血紅蛋白病HbE、 HbCS值則稍高，甚至處于正常范圍，說(shuō)明地中海貧血患者紅細(xì)胞體積減少、脆性降低，在一定程度上可為其篩查提供幫助。

綜上所述，應(yīng)用全自毛細(xì)管電泳技術(shù)在地中海貧血的篩查和診斷中具有精確度高、操作簡(jiǎn)便、時(shí)間短、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等優(yōu)點(diǎn)，如果應(yīng)用于臨床，能夠?yàn)槲覈?guó)的診斷地中海貧血工作提供更有力的技術(shù)保障。

作者簡(jiǎn)介：陳星(1980-)，女，本科，主管技師，主要從事臨床檢驗(yàn)方向的研究。

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