51例帶狀皰疹患者外周血淋巴細胞亞群分析

徐雅琴，曹淑梅，于 倩*，姜日花

(1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長春130033;2.解放軍總裝備部干休所，河北 保定071000)

帶狀皰疹(herpes zoster,HZ)是由水痘-帶狀皰疹病毒(varicella zostervirus,VZV)引起的病毒性皮膚病，既往研究證實淋巴瘤、肺癌、前列腺癌等惡性腫瘤患者更易罹患帶狀皰疹[1]。為此我們利用流式細胞儀檢測了51例帶狀皰疹患者外周血淋巴細胞亞群，結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年7月至2013年5月就診于我院的帶狀皰疹患者，診斷依據(jù)為臨床癥狀、體征及輔助檢查，所有患者近6個月內(nèi)未用過皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑等。患者51例，男23例，女28例，年齡22～75歲，平均年齡52.3。對照組為健康志愿者，兩組人群在性別、年齡上均具有可比性。

1.2 主要儀器及試劑

1.2.1 試劑與儀器 淋巴細胞亞群檢測試劑盒購自美國貝克曼庫爾特(Beckman Coulter)公司，儀器為美國BD公司生產(chǎn)的Cytomics FC500。離心機：類型：LD4-2A(Ⅰ)，北京京立公司產(chǎn)品。

1.2.2 研究方法 患者組及對照組均采集2ml EDTA-K2抗凝外周血進行淋巴細胞亞群測定。每個患者抽取抗凝血300 μl平均置于3個試管中。試管1中加入20 μl四色標記的CD45/CD4/CD8/CD3抗體，試管2加入CD45/CD56/CD19/CD3抗體，試管3加入等量同型對照抗體(美國貝克曼庫爾特Beckman Coulter公司)。于每個試管內(nèi)加入500 μl溶血素，充分混勻后置于室溫下避光保存15 min；將3 ml PBS加入各個試管內(nèi)，充分混勻后放入離心機離心(轉(zhuǎn)速：1 500 rpm)5 min后去除上清；最后將500 μl PBS加入去除上清后的各試管中，充分混勻。所制備液體上機進行流式細胞儀檢測。

2 結(jié)果

2.1 外周血T淋巴細胞亞群的比較

患者組與對照組比較,外周血CD3+細胞、CD3+CD4+細胞百分比降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CD3+CD8+細胞百分比及CD3+CD4+/CD3+CD8+雖較正常組降低，但無統(tǒng)計學差異 (P>0.05)。詳見表1。

2.2 外周血B淋巴細胞及NK細胞比較

患者組與對照組比較，外周血CD3-CD19+B淋巴細胞的百分比升高，CD16+56+NK細胞的百分比降低，但差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表2。

表1 外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果

表2 外周血B淋巴細胞及NK細胞檢測結(jié)果

3 討論

在機體的調(diào)節(jié)性免疫反應(yīng)中發(fā)揮主要作用的T淋巴細胞及B淋巴細胞分別主要介導(dǎo)細胞免疫和體液免疫。目前的研究從多方面證實了機體在對抗VZV感染過程中是以細胞免疫反應(yīng)為主。既往報道感染過帶狀皰疹病毒的成人與正患有水痘的兒童密切接觸后，其外周血VZV特異性CD3+CD4+T細胞及其分泌的細胞因子干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和 白細胞介素-2(IL-2)與未暴露組和暴露前相比明顯升高[2]。健康人中針對水痘-帶狀病毒細胞漿和細胞膜的糖蛋白GB、GE、和位于細胞核的IE62上述VZV蛋白質(zhì)反應(yīng)是CD3+CD4+T細胞介導(dǎo)，而CD3+CD8+T細胞對這三個VZV蛋白質(zhì)的反應(yīng)則維持在較低水平[3],皮損的組織病理顯示浸潤細胞中CD3+CD4+T細胞/CD3+CD8+T細胞比值范圍從1.0到2.0不等[4]。

固有免疫系統(tǒng)是細胞免疫反應(yīng)對抗致病性感染的第一道防線，NK細胞是固有免疫細胞中防御傳染病尤其是病毒感染的關(guān)鍵，它能直接裂解受病毒感染的靶細胞[5]，其還能依賴其分泌的細胞因子干擾素IFN-γ介導(dǎo)CD3+CD8+T細胞的增殖[6]。雖然目前尚不清楚NK細胞消除病毒感染細胞的確切機制，但已有病例報告顯示在選擇性NK細胞缺失的患者中出現(xiàn)了致死性的皰疹病毒感染[7]。

本實驗患者組外周血CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞百分比均較正常組降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，這與以上研究結(jié)論基本一致，提示CD3+CD4+T細胞在對抗水痘-帶狀皰疹病毒的過程中發(fā)揮著主要作用，機體CD3+CD4+T細胞的減少是體內(nèi)病毒被激活的關(guān)鍵。此外，本研究CD3+CD8+T細胞百分比、CD16+56+(NK)細胞百分比、CD3+CD4+/CD3+CD8+細胞比值較正常組降低，CD3-CD19+細胞即B細胞百分比與正常組比稍高，但均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，可能由于樣本量較少，存在偏倚，有待今后繼續(xù)研究。

本研究結(jié)果表明：帶狀皰疹患者存在細胞免疫功能低下，調(diào)節(jié)患者的細胞免疫狀態(tài)，可能有助于本病的治療，對惡性腫瘤的預(yù)防也會起到積極作用。

參考文獻：

[1]Iglar K,Kopp A,Glazier RH.Herpes zoster as a marker of underlying malig-nancy[J].Open medicine,2013,7(2):e68.

[2]Vossen MT,Gent MR,Weel JF,et al.De-velopment of virus-specific CD4+T cel-ls on reexposure to Varicella-Zoster virus[J].The Journal of Infectious Diseases,2004,190(1):72.

[3]Kleemann P,Distler E,Wagner EM,et al.Varicella-zoster virus glycoproteins B and E are major targets of CD4+and CD8+T cells reconstituting during zosterafter allogeneic transplantation[J].Haematologica,2012,97(6):874.

[4]Morizane S,Suzuki D,Tsuji K,et al.The role of CD4 and CD8 cytotoxic T lymphocytes in the formationof viral vesicles[J].The British Journal of Dermatology,2005,153(5):981.

[5]Ihara T,Kato T,Torigoe S,et al.A-ntibody response determined with antibod-y-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC),neutralizing antibody,and vari-cella skin test in children with natural varicella and after varicella immunizati-on[J].Acta paediatrica Japonica,1991,33(1):43.

[6]Whitmire JK,Eam B,Benning N,et al.Direct interferon-gamma signali-ng dramatically enhances CD4+and CD8+T cell memory[J].Journal of Immunology,2007,179(2):1190.

[7]Etzioni A,Eidenschenk C,Katz R,et al.Fatal var-icella associated with selective natural k-iller cell deficiency[J].The Journal of Pediatrics,2005,146(3):423.