黃秋葵種子中生物堿類化合物抗疲勞活性研究

徐明+鄭鴻雁+王巍+陳玉娟+邙巍

摘要：目的：研究黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠的抗疲勞作用。方法：將健康雄性小鼠隨機(jī)分成4組，黃秋葵種子生物堿提取物高劑量組〔8毫升/（公斤·天）〕、中劑量組〔4毫升/（公斤·天）〕、低劑量組〔2毫升/（公斤·天）〕和蒸餾水空白對照組，各實驗組連續(xù)灌胃給藥30天后，測定小鼠負(fù)重游泳時間、血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量等指標(biāo)。結(jié)果：黃秋葵種子中生物堿提取物能增強小鼠負(fù)重游泳時間，耐力增強，能夠降低血液中血清尿素氮含量、血乳酸含量，黃秋葵種子中生物堿提取物能顯著提高肝糖原含量。結(jié)論：黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠有一定的抗疲勞作用，且高劑量組效果最顯著。

關(guān)鍵詞：黃秋葵；種子；生物堿；抗疲勞

基金項目：吉林省科技發(fā)展重點項目（20120949）

中圖分類號：R284111文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1674-0432（2014）-05-30-3

黃秋葵（（L.）Moench），又名秋葵、補腎草等，原產(chǎn)于印度，為錦葵科Malvaceae秋葵屬Abelmoschus一年生草本植物，英文名Okra，廣泛栽培于熱帶、亞熱帶。20世紀(jì)90年代引入我國[1-3]。黃秋葵果實可供食用，具有顯著的保健作用，歐美等國都把黃秋葵列入21世紀(jì)最佳綠色食品名錄。此外，黃秋葵還被許多國家定為運動員的首選蔬菜[6，7]，保健效果好，綠色、安全。

目前，國內(nèi)外都在加強對黃秋葵的研究，涉及保健、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域，黃秋葵種子的研究則鮮見報道，僅有少數(shù)是關(guān)于其化學(xué)成分及藥理作用的研究[11，12]。黃秋葵的種子中脂肪和蛋白質(zhì)含量較高，還含有較多鐵、鉀、鈣、錳等礦物質(zhì)元素[9，10]，具有很強的藥用價值。所以本次試驗重點研究黃秋葵種子中生物堿類提取物的抗疲勞作用，根據(jù)文獻(xiàn)[13-15]，本次試驗重點關(guān)注黃秋葵種子中的生物堿類物質(zhì)，對其進(jìn)行研究，以期找到黃秋葵種子中抗疲勞作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

黃秋葵種子由長春市昌達(dá)天然植物開發(fā)有限公司提供，以下用水除特殊說明外均為GB/T 6682-2008中規(guī)定的三級水；昆明種雄性小鼠，購自吉林大學(xué)動物實驗中心。等級：清潔級，20±5克，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（吉）2007-0003；游泳箱（40×50×50厘米）自制，水槽中控制水深30厘米，水溫控制在（30±2）℃。

1.2黃秋葵種子中生物堿提取物的制備

黃秋葵種子中生物堿提取物由長春理工大學(xué)新藥研發(fā)中心提取，使用前用蒸餾水1∶5混勻。

1.3實驗動物分組

將小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為黃秋葵種子生物堿提取物高、中、低劑量組和空白對照組。各組給予受試物劑量分別為（以體質(zhì)量計）：高劑量組黃秋葵種子生物堿提取物8毫升/公斤；中劑量組黃秋葵種子生物堿提取物4毫升/公斤；低劑量組黃秋葵種子生物堿提取物2毫升/公斤；空白對照組給予蒸餾水8毫升/公斤。各實驗組連續(xù)灌胃給藥30天，觀察記錄小鼠的皮毛顏色及情緒，之后測定小鼠負(fù)重游泳時間，血液中血清尿素氮、血乳酸含量、肝糖原含量。

1.4方法

1.4.1小鼠體質(zhì)量的測定首次灌胃前記錄各實驗組小鼠體質(zhì)量，并觀察小鼠精神狀態(tài)、皮毛色澤變化、末次給藥后游泳前再次記錄各組小鼠體質(zhì)量，對比實驗前后體質(zhì)量變化情況。

1.4.2負(fù)重游泳實驗各實驗組連續(xù)灌胃30天，末次給藥30分鐘后，給小鼠負(fù)重鉛皮（體重5%），放入水溫30℃、水深為30厘米的游泳箱中游泳，當(dāng)小鼠頭部沉入水中10秒仍不能返回水面視為力竭，記錄小鼠從放入泳池到力竭的時間[17]。

1.4.3血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量的測定各實驗組小鼠負(fù)重游泳力竭后取出，15分鐘后摘眼球取血，試劑盒法測定血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量[18]。

注：*與空白對照組相比，存在顯著差異（P<0.05），**極顯著性差異（P<0.01）。

從表1可以看出，與空白對照組相比，黃秋葵種子生物堿提取物高劑量組、中劑量組和低劑量組小鼠的體質(zhì)量變化情況并不明顯，說明給藥組并未對小鼠體重產(chǎn)生影響，在統(tǒng)計學(xué)上沒有顯著性差異（P>0.05）。

2.2黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠負(fù)重力竭游泳時間的影響

各組小鼠負(fù)重（鉛皮）游泳致力竭，記錄并統(tǒng)計從開始致其力竭的游泳時間，結(jié)果見表2。

表2黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠負(fù)重力竭游泳時間的影響（±s，n=10）

注：*與空白對照組相比，存在顯著差異（P<0.05），**極顯著性差異（P<0.01）。

從表2可以看出，黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組的小鼠負(fù)重力竭游泳時間均明顯長于空白對照組，在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性的差異（P<0.01）。

2.3黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠運動后血清尿素氮、血乳酸和肝糖原的影響

各實驗組小鼠游泳力竭后取出，15分鐘后摘眼球取血測定血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量變化，并統(tǒng)計各組小鼠運動后血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量，結(jié)果見表3。

表3黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠運動后血乳酸、血清尿素氮、和肝糖原的影響（±s， n=10）

注：*與空白對照組相比，存在顯著差異（P<0.05）；**有極顯著性差異（P<0.01）。

從表3可以看出，游泳運動后，黃秋葵種子生物堿提取物高、中劑量組與空白組相比血清尿素氮和血乳酸的含量均明顯降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義，有顯著的差異（P<0.01）；并且具有顯著差異（P<0.05）。各項檢測指標(biāo)中，各給藥組呈現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。

3討論

3.1黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠體質(zhì)量的影響

灌喂黃秋葵種子生物堿提取物后對小鼠體質(zhì)量變化無顯著影響，屬于正常體重變化。對實驗不產(chǎn)生復(fù)雜影響。

3.2黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠負(fù)重力竭游泳時間的影響

運動耐力的下降最直觀的表現(xiàn)為疲勞。而力竭游泳時間是測試運動耐力的最明顯的指標(biāo)[18]。生物堿類化合物多具有抗疲勞作用，研究結(jié)果也顯示，黃秋葵種子生物堿提取物的小鼠明顯增長負(fù)重力竭游泳時間，具有極顯著性差異（P<0.01），說明黃秋葵種子生物堿提取物確實能提高小鼠的抗疲勞能力。

3.3黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝糖原的影響

黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組小鼠經(jīng)過運動后，其血液中乳酸含量比空白對照組降低很多，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且有極顯著性的差異（P<0.01）。各實驗組呈現(xiàn)量效關(guān)系，說明黃秋葵種子生物堿提取物可顯著抑制小鼠運動引起的血乳酸升高，有助于緩解運動負(fù)荷引起的疲勞，從而延長小鼠力竭游泳時間。

血清尿素氮是評價機(jī)體耐受力的重要指標(biāo)，各國對此共識相同[20，22]。結(jié)果顯示黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組的小鼠運動后血清尿素氮含量顯著降低，其中高劑量組血清中尿素氮含量最低，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)意義，且具有極顯著性差異（P<0.01），說明黃秋葵種子生物堿提取物確能提高小鼠對運動負(fù)荷的承受能力，從而提高其抗疲勞能力。

運動導(dǎo)致的體力衰竭總是伴隨肌糖原的降解代謝，機(jī)體為了維持正常的血糖水平，必將將代謝肝糖原，以補充消耗，因此肝糖原是反映疲勞程度的一項重要指標(biāo)[22]。本研究結(jié)果顯示，黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組小鼠肝糖原含量均明顯高于空白對照組，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。

4結(jié)論

通過本次實驗測定血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原生化指標(biāo)為陽性，可判定黃秋葵種子生物堿提取物具有一定的抗疲勞作用，存在深入開發(fā)價值。

參考文獻(xiàn)

[1]于英杰.黃秋葵的栽培技術(shù)[J].農(nóng)村新技術(shù)，2004，（3）： 10-11.

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[4]譚業(yè)華，陳珍，顧種宜.中草藥黃蜀葵的研究現(xiàn)狀與展望[J].海南師范學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2006，19（2）：163-167.

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[13]孫宏，張宏波，谷振華.茶葉中提取咖啡堿實驗方法比較[J].高師理科學(xué)刊，2007，27（1）：40-41.

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[15]李曉林，鹿海真，張?zhí)箹|，等.茶葉中提取天然咖啡堿的方法改進(jìn)[J].山東師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2007，22（2）：139-140.

[16]張萬明.自茶葉中提取咖啡堿實驗教學(xué)探索與研究[J].化學(xué)教育，2007，28（1）：51-52.

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[19]曾五一，肖紅葉，統(tǒng)計學(xué)導(dǎo)論[M].北京：科學(xué)出版社， 2007： 340-352.

[20]徐國棟，駱清銘.運動時的血乳酸與血紅蛋白飽和度關(guān)系的研究：一種新型血紅蛋白含量測定法[J].武漢體育學(xué)院學(xué)報，2001，35（3）： 40-42.

[21]裴素萍，馮曉慧，金迪，等. 3種藥膳對小鼠抗疲勞的效果[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，6（5）： 335-337.

[22]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品的功能學(xué)評價程序和檢驗方法[M].

作者簡介：徐明，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，碩士研究生，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品食品加工工藝與應(yīng)用。

通訊作者：鄭鴻雁，碩士研究生，副教授，研究方向：功能食品、微生物菌種篩選及發(fā)酵工藝研究。

3.2黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠負(fù)重力竭游泳時間的影響

運動耐力的下降最直觀的表現(xiàn)為疲勞。而力竭游泳時間是測試運動耐力的最明顯的指標(biāo)[18]。生物堿類化合物多具有抗疲勞作用，研究結(jié)果也顯示，黃秋葵種子生物堿提取物的小鼠明顯增長負(fù)重力竭游泳時間，具有極顯著性差異（P<0.01），說明黃秋葵種子生物堿提取物確實能提高小鼠的抗疲勞能力。

3.3黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝糖原的影響

黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組小鼠經(jīng)過運動后，其血液中乳酸含量比空白對照組降低很多，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且有極顯著性的差異（P<0.01）。各實驗組呈現(xiàn)量效關(guān)系，說明黃秋葵種子生物堿提取物可顯著抑制小鼠運動引起的血乳酸升高，有助于緩解運動負(fù)荷引起的疲勞，從而延長小鼠力竭游泳時間。

血清尿素氮是評價機(jī)體耐受力的重要指標(biāo)，各國對此共識相同[20，22]。結(jié)果顯示黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組的小鼠運動后血清尿素氮含量顯著降低，其中高劑量組血清中尿素氮含量最低，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)意義，且具有極顯著性差異（P<0.01），說明黃秋葵種子生物堿提取物確能提高小鼠對運動負(fù)荷的承受能力，從而提高其抗疲勞能力。

運動導(dǎo)致的體力衰竭總是伴隨肌糖原的降解代謝，機(jī)體為了維持正常的血糖水平，必將將代謝肝糖原，以補充消耗，因此肝糖原是反映疲勞程度的一項重要指標(biāo)[22]。本研究結(jié)果顯示，黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組小鼠肝糖原含量均明顯高于空白對照組，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。

4結(jié)論

通過本次實驗測定血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原生化指標(biāo)為陽性，可判定黃秋葵種子生物堿提取物具有一定的抗疲勞作用，存在深入開發(fā)價值。

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[16]張萬明.自茶葉中提取咖啡堿實驗教學(xué)探索與研究[J].化學(xué)教育，2007，28（1）：51-52.

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[22]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品的功能學(xué)評價程序和檢驗方法[M].

作者簡介：徐明，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，碩士研究生，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品食品加工工藝與應(yīng)用。

通訊作者：鄭鴻雁，碩士研究生，副教授，研究方向：功能食品、微生物菌種篩選及發(fā)酵工藝研究。

3.2黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠負(fù)重力竭游泳時間的影響

運動耐力的下降最直觀的表現(xiàn)為疲勞。而力竭游泳時間是測試運動耐力的最明顯的指標(biāo)[18]。生物堿類化合物多具有抗疲勞作用，研究結(jié)果也顯示，黃秋葵種子生物堿提取物的小鼠明顯增長負(fù)重力竭游泳時間，具有極顯著性差異（P<0.01），說明黃秋葵種子生物堿提取物確實能提高小鼠的抗疲勞能力。

3.3黃秋葵種子生物堿提取物對小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝糖原的影響

黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組小鼠經(jīng)過運動后，其血液中乳酸含量比空白對照組降低很多，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且有極顯著性的差異（P<0.01）。各實驗組呈現(xiàn)量效關(guān)系，說明黃秋葵種子生物堿提取物可顯著抑制小鼠運動引起的血乳酸升高，有助于緩解運動負(fù)荷引起的疲勞，從而延長小鼠力竭游泳時間。

血清尿素氮是評價機(jī)體耐受力的重要指標(biāo)，各國對此共識相同[20，22]。結(jié)果顯示黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組的小鼠運動后血清尿素氮含量顯著降低，其中高劑量組血清中尿素氮含量最低，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)意義，且具有極顯著性差異（P<0.01），說明黃秋葵種子生物堿提取物確能提高小鼠對運動負(fù)荷的承受能力，從而提高其抗疲勞能力。

運動導(dǎo)致的體力衰竭總是伴隨肌糖原的降解代謝，機(jī)體為了維持正常的血糖水平，必將將代謝肝糖原，以補充消耗，因此肝糖原是反映疲勞程度的一項重要指標(biāo)[22]。本研究結(jié)果顯示，黃秋葵種子生物堿提取物各劑量組小鼠肝糖原含量均明顯高于空白對照組，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。

4結(jié)論

通過本次實驗測定血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原生化指標(biāo)為陽性，可判定黃秋葵種子生物堿提取物具有一定的抗疲勞作用，存在深入開發(fā)價值。

參考文獻(xiàn)

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作者簡介：徐明，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，碩士研究生，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品食品加工工藝與應(yīng)用。

通訊作者：鄭鴻雁，碩士研究生，副教授，研究方向：功能食品、微生物菌種篩選及發(fā)酵工藝研究。