SOX6和SOX9基因轉染對人原發性骨關節炎關節軟骨間充質祖細胞增殖和成軟骨分化的調控作用

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(沈陽軍區總醫院骨科，遼寧 沈陽 110016)

原發性骨關節炎(osteoarthritis， OA)關節軟骨中間充質祖細胞(mesenchymal progenitor cells，MPCs)數量僅占其關節軟骨細胞數量的3%～4%，雖然OA關節軟骨MPCs比正常人增殖活躍，但其成軟骨、成骨分化能力較低。如何利用有效基因過表達，調控原發性OA關節軟骨MPCs的增殖和成軟骨分化作用，恢復OA關節軟骨細胞調節和維持軟骨組織損傷與修復的動態平衡，具有重要的科學意義和臨床應用前景。在體外培養中添加細胞因子易流失，且細胞因子價格昂貴，因此結合應用轉基因技術，將具有促進關節軟骨MPCs增殖和成軟骨分化的目的基因導入其中，在細胞中高表達促進關節軟骨MPCs的增殖和分化，修復退變和損傷的軟骨，無疑具有重要的作用。目前對SOX家族促軟骨分化作用研究，國內外相關文獻報道較少。本實驗應用基因轉染技術，用SOX6、SOX9基因感染原發性OA關節軟骨的MPCs，誘導其成軟骨分化，比較SOX6、SOX9基因感染和未感染組細胞的成軟骨分化能力的變化。進一步探討基因治療在關節軟骨退變中應用的可行性，為臨床治療軟骨退變和軟骨損傷提供新的理論支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

采用免疫磁珠方法分選得到原發性OA及正常人關節軟骨MPCs。SOX6、SOX9基因轉染相關試劑：脂質體( 美國lipofectAMINE 2000 )、Ⅱ 型膠原多克隆抗體(美國santa cruze) Pme I,Pac I內切酶(英國 NEB)、Xho I，Sal I，T4連接酶及T載體(大連寶生物公司)、腺病毒載體。主要儀器設備：細胞培養、RT-PCR檢測儀器設備。

1.2 方法

1.2.1 SOX6、SOX9基因的構建 細胞及細胞株(人胚腎FT-293細胞)購自invitriogen公司。pAdTrack-CMV-SOX6，SOX9的構建。pAdtrack-CMV-SOX6，SOX9穿梭質粒的鑒定。使用Sal I、Xho I雙酶切后，凝膠電泳鑒定應見到576bp片段為SOX6，SOX9，9.2kb片段為pAdtrack-CMV載體片段?！?br>