HPLC法測定婦炎康顆粒中黃芪甲苷含量

何屹 王興海

·藥物研究·

HPLC法測定婦炎康顆粒中黃芪甲苷含量

何屹 王興海

婦炎康顆粒；黃芪甲苷；含量測定

婦炎康顆粒由黃芪、當歸、川芎、赤芍、丹皮五味中藥組成，具有益氣活血、逐瘀散結、行氣止痛功能，臨床主要用于慢性盆腔炎氣虛血瘀證。經多年臨床使用，療效確切。本文采用HPLC(蒸發光散射檢測器)法對主藥黃芪有效成分黃芪甲苷進行含量測定方法[1-5]研究，以完善婦炎康顆粒質量標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10AT高效液相色譜儀，SEDE×75檢測器(迪馬公司)，色譜柱Dikma ODS C18(5 μm，150×4.6mm)；XWK-3A空氣泵(天津市華生儀器分析廠)；JA2003N電子天平(上海精密科學儀器廠)；KQ-50DE型數控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0781-20008供含量測定用)；乙腈為色譜純；水為三蒸水；婦炎康顆粒(陜中附院自制制劑，批號120301,120401,120501)。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取已干燥至恒重的黃芪甲苷對照品5.8 mg，加甲醇(色譜純)定容至10 ml，從中取2 ml溶液定容至5 ml，制成0.232 mg/ml的對照溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備：取樣品粉末研細，取約10 g，精稱，加甲醇50 ml，稱定重量，超聲(功率220 W，頻率50 kHz)30 min，放至室溫，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液25 ml，置水浴上蒸干，殘渣加水20 ml，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌兩次，每次60 ml，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次60 ml，合并水洗后的正丁醇液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇定容至5 ml量瓶中，搖勻，濾過，取續濾液，備用。

2.1.3 陰性樣品干擾的考察：按婦炎康顆粒的處方制備不含黃芪的陰性制劑。取陰性樣品約10.0 g，精密稱定，按供試品制備方法制成陰性樣品溶液，照樣品測定方法測定，結果表明，陰性樣品中的其他成分對黃芪甲苷測定無干擾。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱Dikma ODS C18(5 μm，150×4.6 mm)；柱溫：室溫；流動相：乙腈∶水(32∶68)；流速：1.0 ml/min；蒸發光散射檢測器，漂移管溫度為99℃；黃芪甲苷和樣品中其他色譜峰的分離度良好；理論板數以黃芪甲苷峰計算不低于10 000。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察：取0.232 mg/ml的黃芪甲苷對照溶液，分別以2、4、8、12、16、20 μl量進樣，記錄色譜圖，計算峰面積，并以峰面積(A)為縱坐標，以進樣量(C)為橫坐標，作一直線見附圖，求得回歸方程：A=7316.3C-1231.7，R2=0.9991。結果表明，在0.464～4.640 μg內，黃芪甲苷峰面積與進樣量有良好的線性關系。

2.3.2 精密度考察：將濃度為0.232 mg/ml的黃芪甲苷對照品溶液，連續重復進樣6次，每次10 μl，測得峰面積的RSD為2.22%。見表1。

表1 精密度試驗考察結果

2.3.3 重復性考察：取同一批樣品6份，分別按供試品處理方法處理，按含量測定項下方法測定，計算其中芍藥苷含量。見表2。

表2 重現性試驗考察結果

2.3.4 穩定性考察：取一組樣品溶液，分別在0、2、4、6、8 h進樣，記錄色譜圖，測得峰面積值。見表3。

表3 穩定性試驗考察結果

2.3.5 加樣回收率考察：取已知黃芪甲苷含量(0.1180 mg/g)的同一批樣品6份，約10.0 g，精密稱定，分別加入一定量的對照品(溶液)，按照含量測定項下的方法進行測定，記錄色譜圖，計算峰面積值，求出加樣回收率。見表4。

黃芪甲苷回收率(%)=(測得黃芪甲苷的總含量-樣品中的黃芪甲苷含量)/黃芪甲苷對照品的加入量×100%。

表4 加樣回收率試驗考察結果

2.4 樣品含量測定 分別取3批樣品，按供試品溶液制備方法處理，進樣10 μl，記錄色譜圖，計算峰面積值，用外標法求樣品中芍藥苷的含量。見表5。

表5 樣品含量測定試驗考察結果

由上表可見，三批中試樣品中黃芪甲苷的含量分別為0.1166 mg/g、0.1198 mg/g、0.1157 mg/g，平均含量為0.1174 mg/g。又因每袋8 g，考慮到樣品中黃芪甲苷含量隨飲片的品質與裝量差異的影響，結合大生產實際情況，將樣品中黃芪甲苷的含量在平均值的基礎上下調20%，故暫定本品每袋含黃芪甲苷量不得少于0.75 mg。

3 討論

本文對婦炎康顆粒制劑中主藥黃芪有效成分黃芪甲苷進行了含量測定方法考察，可作為婦炎康顆粒質量控制標準的參考。在HPLC法測定黃芪甲苷的含量時，應用的是蒸發光散射檢測器，由于其穩定性差于紫外檢測器，因此，在測定時應使儀器處于較為穩定狀態，應盡量在較為安靜和受外界影響較小的環境中進行。

1 國家藥典委員會.中國藥典2010年版(一部).北京：中國醫藥科技出版社，2010.283.

2 金毅群，隋軍，賈蘭秀． HPLC 蒸發光散射檢測器測得芪丹健腦顆粒的黃芪甲苷的含量． 中醫藥學報，2006，2: 22-23．

3 張錦文，寥梅，張勇慧，等． 高效液相色譜-蒸發光散射法測定參芪扶正注射液中黃芪甲苷含量． 中國醫院藥學雜志，2008，3: 104-106．

4 董紅紅，張麗增，郭小青，等． HPLC-蒸發光散射檢測法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷的含量． 中國藥房， 2008，6: 444-446．

5 楊素芹，劉文惠，張繼敏，等.高效液相色譜-紫外檢測法測定腎康超微粉膠囊中黃芪甲苷的含量.河北醫藥，2011,33:3645-3646.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.09.061

712000 陜西省咸陽市，陜西中醫學院

R 917.4

A

1002-7386(2014)09-1411-02

2013-09-23)