HPLC法測定腎石消膠囊中迷迭香酸的含量

平崇 郭迎霞 吳海霞

·藥物研究·

HPLC法測定腎石消膠囊中迷迭香酸的含量

平崇 郭迎霞 吳海霞

目的建立用反相高效液相色譜法測定腎石消膠囊中迷迭香酸含量的方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS 5μm 250×4.6 mm色譜柱，以甲醇-0.1%三氟乙酸(40：60)為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為330 nm。結果迷迭香酸進樣量在0.5015～5.0151 μg范圍內線性關系良好(r=0.9998)(n=5)，平均回收率為99.6%，RSD為0.57%。結論該法結果準確、方法簡便、分離度高，可用于該制劑的質量控制。

高效液相色譜法；腎石消膠囊；迷迭香酸

腎石消膠囊是邯鄲市中醫院的自制制劑，在臨床應用療效顯著，由夏枯草、延胡索、金錢草等九味中藥材組成。具化石排石、利濕止痛的功效,主要用于泌尿系結石及泌尿系感染的治療。此制劑現有質量標準簡單，尚無定量內容，經查閱和參考相關文獻[1，2]，建立了用高效液相色譜法測定其君藥夏枯草有效成分迷迭香酸的含量，該方法簡單、準確、靈敏度高，為制定其質量標準打下了基礎。

1 儀器與試藥

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津)，檢測器：UV-VIS，LCsolution色譜工作站；T1901型紫外可見分光光度計(北京普析通用)；AUW120D電子天平(日本島津)(十萬分之一)；KQ-400KDE型高功率數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)(功率：400W、頻率：40KHZ)；迷迭香酸對照品(批號：111871-201203，含量：98.8%，中國食品藥品檢定研究院)；腎石消膠囊(邯鄲市中醫院提供)(生產批號：120101、120201、120301、120302、120303、120401)；甲醇為色譜純，水為純化水,其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS 5 μm 250×4.6 mm (日本島津)；流動相：甲醇-0.1%三氟乙酸(40：60)；流速：1 ml/min；檢測波長：330 nm；進樣量：10 μl；理論塔板數按迷迭香酸峰計算不低于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取迷迭香酸對照品0.01269 g，置50 ml容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，制成每毫升含0.251 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：精密稱取本品2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備：按處方比例依據該制劑制備工藝制備不含夏枯草的陰性對照供試品，依據供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 方法學確證

2.3.1 線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液2、5、10、15、20 μl注入液相色譜儀，測定峰面積，以迷迭香酸進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y= 1.584×106X-1.275×10-4，r=0.9998。結果表明，迷迭香酸進樣量在0.5015～5.0151 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.3.2 專屬性試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，按上述色譜條件注入液相色譜儀，測定。結果陰性對照溶液在與迷迭香酸對照品主峰的保留時間相同位置峰處無色譜峰(見圖1)。

圖1 腎石消膠囊液相色譜圖

2.3.3 精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液(濃度為0.251 mg/ml)10 μl，重復進樣5次,計算迷迭香酸色譜峰面積的RSD為0.23%(n=5)。結果表明精密度良好。

2.3.4 重復性試驗：取同一批號(120101)樣品5份，按2.2.2項下方法操作，在上述色譜條件下進樣測定，迷迭香酸平均含量為0.236 mg/g，RSD為0.41%(n=5)。結果表明方法重復性良好。

2.3.5 穩定性試驗：取同一供試品溶液(批號為120101)，分別于0、2、4、8、12、24按上述色譜條件測定，測得迷迭香酸峰面積RSD為0.39%，結果表明供試品溶液室溫下放置24 h穩定。

2.3.6 回收率試驗：取已知含量的同一批號(批號：120101，含量0.236 mg/g)樣品共6份，每份約1.0 g，精密稱定，每份樣品分別精密加入低、中、高濃度迷迭香酸對照液(分別精密量取迷迭香酸對照品溶液4、5、6 ml，分置250 ml容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，備用)50 ml，稱定重量，按2.2.2項下方法操作，在上述色譜條件下測定。見表1。

表1 迷迭香酸回收率測定結果

2.4 樣品測定 按2.2.2項下的方法，在上述色譜條件下進樣測定(n=4)，測得6批樣品含量分別為0.236 mg/g(RSD=0.33%)、0.244 mg/g(RSD=0.37%)、0.242 mg/g(RSD=0.19%)、0.245 mg/g(RSD=0.26%)、0.216 mg/g(RSD=0.49%)、0.217 mg/g(RSD=0.41%)。

3 討論

3.1 用紫外分光光度法對迷迭香酸對照品溶液在200～400 nm范圍掃描，在199 nm和331nm處有最大吸收峰，考慮到流動相在低波處有較強的末端吸收，為減少干擾，提高信噪比，選擇與《中國藥典》2010年版夏枯草含量測定項下的330 nm處為檢測波長。

3.2 本試驗供試品溶液制備對超聲時間進行了考察了，分別超聲10、15、20、25、30、35 min后進行測定，測定結果顯示20 min時測定成分已經提取完全，故超聲時間定為20 min即可充分提取。

1 國家藥典委員會.中國藥典(一部).北京：中國醫藥科技出版社，2010.263.

2 李偉光，梁敬鈺.迷迭香酸的研究進展.海峽藥學，2004,16:121.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.054

056001 河北省邯鄲第三棉紡織有限公司職工醫院藥劑科(平崇)；河北省邯鄲市食品藥品檢驗中心(郭迎霞、吳海霞)

R 917.4

A

1002-7386(2014)10-1558-02

2013-11-11)