河南漢族冠心病患者CYP2C19基因多態性分布

吳干斌，周建華，劉科蘭

鄭州大學第二附屬醫院藥學部 鄭州 450014

河南漢族冠心病患者CYP2C19基因多態性分布

吳干斌△，周建華，劉科蘭

鄭州大學第二附屬醫院藥學部 鄭州 450014

△男，1967年9月生，碩士，副主任藥師，研究方向：臨床藥學，E-mail:wganbin521@sina.com

CYP2C19；基因多態性；氯吡格雷；河南省；冠心病

目的：研究河南冠心病患者氯吡格雷代謝相關基因CYP2C19基因多態性的分布。方法采用PCR-RFLP技術檢測600名來自河南的冠心病患者CYP2C19的基因型。結果CYP2C19*1/*1占42.6%、CYP2C19*1/*2占40.9%、CYP2C19*1/*3占6.5%、CYP2C19*2/*2占7.2%、CYP2C19*2/*3占2.5%、CYP2C19*3/*3占0.3%。結論河南省人群CYP2C19基因多態性的分布與全國其他地區基本一致。

冠心病患者在進行經皮冠狀動脈介入治療(PCI)后多服用氯吡格雷和阿司匹林。已有研究[1]表明這一處理可降低心血管事件的發生率以及支架內血栓形成的風險,但在術后長期隨訪中發現部分患者仍有血栓性事件的發生，即氯吡格雷抵抗現象[2-4]。已發現氯吡格雷抵抗與CYP2C19基因的多態性有關[5]。CYP2C19是一種重要的藥物代謝酶,參與多種藥物的體內代謝，是CYP2C超家族成員之一,主要參與氯吡格雷、奧美拉唑、丙戊酸、苯妥英等藥物的代謝;CYP2C19具有遺傳多態性且在不同人群中具有較大的差異,這種多態性是由于該酶的編碼基因發生突變而導致酶的活性異常,引起不同人群、不同個體對藥物的代謝能力下降或增強,影響相關藥物的體內代謝及療效[6-7]。作者對河南地區無血緣關系、擬行PCI的600份漢族冠心病患者的血樣進行CYP2C19基因型檢測和分析，為臨床醫師使用氯吡格雷類藥物提供參考。

1 對象與方法

1.1研究對象鄭州大學第二附屬醫院2012年12月至2013年7月診斷為冠心病、擬行PCI手術的600名河南地區、無血緣關系的患者。所有患者均否認家族遺傳病病史，漢族，年齡35～74歲，男415例，女185例。

1.2試驗儀器與試劑全自動雜交儀(上海百傲科技有限公司，型號BR526-24)，生物芯片識別儀(上海百傲科技有限公司，型號BE-2.0)，PCR儀(美國AB公司，型號ABI9902)，高速離心機(德國Eppendorf公司，型號5424R),醫用冷藏箱(青島海爾公司，型號HYC-260),DNA提取試劑盒、Taq DNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP、內切酶及蛋白酶K等(上海百傲科技有限公司)。

1.3PCR-RFLP取1 mL EDTA抗凝外周血,提取DNA。根據基因數據庫中SNP的序列信息，由上海百傲科技有限公司提供設計軟件及試劑進行在線擴增。PCR反應總體系為25 μL，基因組DNA為5 μL，引物、Taq DNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP、內切酶等共計20 μL。反應條件：95 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環； 72 ℃延伸5 min，結束擴增。取擴增產物10 μL加入到180 μL雜交緩沖液中，并依次加入抗體等試劑進行在線雜交、顯色，確定芯片基因型。

1.4檢測基因分型采用上海百傲科技有限公司提供的分型系統將PCR擴增產物嚴格按照其提供的標準操作流程進行相關操作，通過雜交儀采用單堿基延伸結合微陣列芯片法對位點進行檢測，最后通過掃描儀讀出相對應的基因型。根據上海百傲科技有限公司的分型標準將該等位基因的野生純合子定義為*1/*1型，單突變型定義為*1/*2型和*1/*3型，突變純合子定義為*2/*2型和*3/*3型，雙突變雜合子定義為*2/*3型。另將*1/*1型定義為強代謝型，*1/*2和*1/*3型定義為中間代謝性，*2/*2、*2/*3和*3/*3型定義為弱代謝型。

1.5數據處理將所獲數據作Hardy-Weinberg平衡檢驗，采用χ2檢驗比較不同性別間各基因型分布的差異，檢驗水準α=0.05。

2 結果

通過計算檢測符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.141，P=0.372)。各種基因型生物芯片識別圖見圖1。CYP2C19*1/*1占42.6%、CYP2C19*1/*2占40.9%、CYP2C19*1/*3占6.5%、CYP2C19*2/*2占7.2%、CYP2C19*2/*3占2.5%、CYP2C19*3/*3占0.3%。不同性別各基因型的分布頻率見表1。由表1可知，不同性別間各等位基因的頻率差異無統計學意義(χ2=2.952，P=0.064)。不同性別各代謝型基因的頻率分布見表2。由表2可知，不同性別間各代謝型基因的頻率差異無統計學意義(χ2=2.693，P=0.157)。

圖1 基因型生物芯片識別圖

表2 各代謝型基因的頻率分布 例

3 討論

目前，阿司匹林聯合氯吡格雷已成為PCI術后抗血小板聚集、溶栓治療的基石。但由于阿司匹林抵抗和氯吡格雷抵抗的存在，仍有一部分患者在術后一段時間內會發生心肌梗死、猝死等不良心血管事件[8]。

隨著藥物基因組學的發展，藥物代謝酶的基因多態性研究在臨床中的指導意義越來越大,基因導向個體化治療已在臨床應用。研究[5]表明，氯吡格雷抵抗與體內CYP2C19基因的多態性有關。CYP2C19基因所編碼的蛋白酶位于肝微粒體內。現已發現CYP2C19*1～CYP2C19*25等多個等位基因，編碼正常酶活性的基因是CYP2C19*1，而突變等位基因或是影響酶的催化活性或是影響酶蛋白的表達,CYP2C19*2和CYP2C19*3為CYP2C19最常見的酶缺陷型突變等位基因,可解釋99%的東方人弱代謝者及88%的白種人弱代謝者[9]。1994年，de Morais等[10]發現了CYP2C19兩個等位基因的突變位點，分別命名為CYP2C19外顯子5突變型和CYP2C19外顯子4突變型。

該研究結果顯示，河南地區擬行PCI的冠心病患者中，CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3和*3/*3型的分布頻率分別為42.6%、40.9%、6.5%、7.2%、2.5%和0.3%，并且各個基因型在不同性別間差異無統計學意義。強代謝型(野生純合子)占42.6%，而中代謝型(單突變)和弱代謝型(雙突變)占57.4%，也就是說在河南地區的患者中有近60%的人會存或輕或重的氯吡格雷抵抗現象，這比相關文獻[11]報道的50.6%高，與另一文獻[12]報道的54.3%較為接近；其中單突變頻率達到了47.4%，與文獻[13]報道的44.0%比較接近；雙突變占10.0%，與文獻[11,14]報道的11.6%和11%很接近。此外，該研究結果還顯示CYP2C19基因型中弱代謝型占10%，低于蒙古族(33.3%)、黎族(15%)、獨龍族(11.2%)及布依族(10.2%),但高于苗族(9.2%)、土族(9.0%)以及維吾爾族(4.17%)等[15]，考慮是地理環境的差異或樣本量較少所致。

總之，CYP2C19基因多態性在河南地區人群中分布比較普遍，且突變率較高。因此作者建議河南地區的醫務工作者在對相關患者進行治療時要重視該酶的基因分型，可以在允許的條件下進行CYP2C19基因分型的檢測，參考檢測結果進行治療用藥的選擇和劑量的增減，達到個體化用藥的目的，以降低術后心血管事件的發生概率，提高患者的生活質量。同時建議地方政府和國家相關部門盡快建立相應的基因型數據庫以及基因多態性與藥物代謝的關系庫，以便廣大醫護人員利用資源更好地為患者服務，真正為患者做到“量體裁衣”，個體化給藥。

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(2013-08-27收稿 責任編輯徐春燕)

Distribution of CYP2C19 genetic polymorphism in patients of Han nationality with coronary artery disease from Henan Province

WUGanbin,ZHOUJianhua,LIUKelan

DepartmentofPharmacy，theSecondAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014

CYP2C19；genetic polymorphism；clopidogrel；Henan Province；coronary artery disease

Aim: To survey the genetic polymorphism of CYP2C19 gene in the patients with coronary artery disease from Henan Province. Methods: The CYP2C19 genotypes of 600 patients with coronary artery disease from Henan Province were determined by PCR-RFLP. Results: The frequencies of CYP2C19*1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and *3/*3 were 42.6%,40.9%,6.5%,7.2%,2.5% and 0.3%,respectively. Conclusion: There are no significant differences in the distribution of CYP2C19 polymorphism between Henan and other areas of China.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.04.036

R969.1