乳癌患者原發灶、復發灶中VEGF與Cath-D蛋白的表達

寧殿賓，陳英敏，暴 雷

河北省人民醫院普外一科 石家莊 050051

乳癌患者原發灶、復發灶中VEGF與Cath-D蛋白的表達

寧殿賓△，陳英敏，暴 雷

河北省人民醫院普外一科 石家莊 050051

△男，1973年10月生，碩士，副主任醫師，研究方向：乳腺腫瘤，E-mail：ningdianbin@163.com

乳癌；血管內皮生長因子；組織蛋白酶D；淋巴結轉移

目的：檢測乳癌患者原發灶、復發灶中VEGF、組織蛋白酶D(Cath-D)蛋白的表達。方法采用免疫組化SP法檢測38例乳癌患者(有淋巴結轉移者25例)和22例乳癌胸壁復發患者(有淋巴結轉移者5例)原發灶、復發灶及有、無淋巴結轉移組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達。結果正常乳腺組織，乳癌原發灶、復發灶中VEGF、Cath-D蛋白的表達差異有統計學意義(χ2=50.029和24.461，P<0.05)，且乳癌原發灶、復發灶中VEGF、Cath-D蛋白的表達均高于正常乳腺組織，但二組織間差異無統計學意義。乳癌患者有淋巴結轉移組VEGF、Cath-D蛋白的表達高于無淋巴結轉移組(χ2=9.017和5.963，P<0.05)。乳癌組織中VEGF和Cath-D蛋白的表達呈正關聯(rP=0.411,P<0.001)。結論乳癌原發灶、復發灶及有淋巴結轉移的乳癌組織中VEGF與Cath-D蛋白高表達，二者可能在乳癌復發和淋巴結轉移中起協同作用。

據統計，我國每年女性乳癌發病16.9萬，死亡約4.5萬;乳癌居女性常見惡性腫瘤的第2位，居女性常見惡性腫瘤死亡原因的第6位[1]。淋巴結轉移和局部復發是乳癌預后的重要影響因素之一。惡性腫瘤的生長、侵襲及轉移受多種因素的影響，是一個多步驟的復雜過程，與腫瘤的血管生成密切相關。近年來，VEGF、組織蛋白酶D(cathepsin-D,Cath-D)作為判斷乳癌患者復發、轉移的重要指標而備受關注[2-4]。作者應用免疫組化SP法檢測了乳癌原發灶、復發灶以及有、無淋巴結轉移的乳癌組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達，分析其相關性，報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象選擇河北省人民醫院2001年1月至2012年12月行手術治療的乳癌患者，均為女性，其中乳癌原發患者38例，乳癌胸壁復發患者22例；原發患者有淋巴結轉移者25例,復發患者有淋巴結轉移者5例；年齡28～64歲，平均年齡52歲；Ⅰ期8例,Ⅱ期30例,Ⅲ期22例；浸潤性導管癌35例，浸潤性小葉癌25例。同時選取38例乳癌原發患者手術切除的癌旁正常乳腺組織作為對照。

1.2Cath-D和VEGF的免疫組化SP法檢測術中切除的乳癌原發灶、復發灶標本經體積分數10%甲醛溶液固定，4 μm連續切片，保存待測。采用免疫組化SP法進行染色，嚴格按照試劑說明書操作。Cath-D 和鼠抗人VEGF 單抗均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，使用時均按1:100稀釋。主要步驟:切片脫蠟、水化后以體積分數3%H2O2孵育10 min以阻斷內源性過氧化物酶; 抗原修復后分別滴加一抗，37 ℃ 孵育1～2 h 或過夜，PBS 沖洗，5 min×3次; 滴加生物素標記的二抗，37 ℃孵育20 min，PBS 沖洗，5 min×3 次; 滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，37 ℃孵育20～30 min，PBS 沖洗，5 min×3次; DAB顯色; 自來水充分沖洗、復染、脫水、透明、封片。實驗均由同一病理技師操作。

1.3結果判斷每張切片由2名醫生雙盲觀測。Cath-D 蛋白陽性染色位于細胞質，呈棕黃色。選取8個高倍鏡視野，計數8個視野中的陽性細胞總數，除以細胞總數計算陽性細胞百分比。陽性細胞百分比<20%為陰性，≥20%為陽性。VEGF蛋白陽性表達主要定位于細胞質和細胞膜。根據染色強度和陽性細胞百分比進行綜合計分。選取5個高倍鏡視野，同上計算陽性細胞百分比。無陽性細胞計0 分，≤25%計1分，～50%計2分，～75%計3分，﹥75%計4 分; 著色強度以多數陽性細胞呈現的染色計分，無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；2項計分相加，0～2分為陰性，≥3 分為陽性。

1.4統計學處理應用SPSS 11.5處理數據。采用χ2檢驗比較原發灶、復發灶、正常乳腺組織以及有、無淋巴結轉移的乳癌組織中VEGF和Cath-D蛋白的表達，采用列聯系數分析乳癌組織中VEGF和Cath-D蛋白表達的關系。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1正常乳腺組織、乳癌原發灶和復發灶組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達比較見表1。由表1可以看出，乳癌復發灶和乳癌原發灶組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達較正常乳腺組織增強。

2.2乳癌患者有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組VEGF、Cath-D蛋白的表達比較見表2。由表2可以看出，乳癌患者有淋巴結轉移組VEGF、Cath-D蛋白的表達較無淋巴結轉移組增強。

表1 3種組織中VEGF、Cath-D蛋白的表達 例(%)

*:與正常乳腺組織相比，P<0.017。

表2 乳癌患者有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組VEGF、 Cath-D蛋白的表達 例(%)

2.3乳癌組織中VEGF、Cath-D蛋白表達的關系見表3。

表3乳癌組織中VEGF、Cath-D蛋白表達的關系例

VEGFCath?D陽性陰性陽性427陰性47

rP=0.411,P<0.001。

3 討論

乳癌的侵襲與轉移是一個涉及多方面因素的過程，其中腫瘤細胞的過度增殖及新血管的生成是重要的影響因素。腫瘤的生長依賴腫瘤新生血管的形成，血管生成對腫瘤的發生、侵襲和轉移至關重要。VEGF是重要的血管生成正性調節因子和最強的促血管內皮細胞分裂劑。有研究[3]結果顯示VEGF 是促進乳癌血管生成的重要調節因子；微血管最豐富區位于乳腺惡性腫瘤與正常組織交界區。李穎嘉等[4]研究發現乳腺惡性腫瘤組VEGF及其主要受體Flk-1/KDR 的表達、MVD 計數均顯著高于良性腫瘤組；VEGF 能特異性地刺激內皮細胞增殖，具有促血管通透性作用，為血管內皮細胞的遷移和腫瘤細胞的轉移提供基質。該研究中乳癌原發組織及復發組織VEGF蛋白的表達均高于正常乳腺組織，且淋巴結轉移組VEGF蛋白的表達高于無淋巴結轉移組，與國內研究[5-6]結果一致。這說明VEGF 蛋白表達增高可促進乳癌的發生、復發及淋巴結轉移，提示VEGF促進腫瘤血管內皮細胞增殖，導致腫瘤血管數量增加，為乳癌細胞的轉移提供通道。

Cath-D是相對分子質量為34 000的蛋白。它低濃度存在于各種細胞胞質中,在正常或小葉增生的乳腺組織中濃度都很低[7]。Cath-D 能刺激細胞生長, 活化后可以直接催化基底膜和細胞外基質的降解，形成局部溶解區，構成腫瘤細胞移動的通道，并間接破壞血管基膜[8]。Cath-D還可以激活Cath-B，誘導產生活化的尿激酶型-纖溶酶原激活劑，后者也具有與Cath-D相似的功能。該研究結果顯示乳癌原發組織及復發組織Cath-D蛋白的表達均高于正常乳腺組織，而且乳癌有淋巴結轉移組Cath-D蛋白的表達高于無淋巴結轉移組，提示Cath-D在乳癌復發和轉移中起著重要作用。有研究[9-10]顯示，Cath-D可作為上游基因調節MMP-2 表達，MMP-2可以啟動MMPs 級聯反應，促進ECM 降解，誘導腫瘤細胞向周圍組織及淋巴結播散，同時MMP-2 可以啟動血管生成，直接促進新生血管形成，促進腫瘤生長和發生血道轉移。于湛等[11]在對胃癌的研究中同樣發現有淋巴結轉移組Cath-D蛋白的陽性表達率高于無轉移組，推測Cath-D蛋白可刺激癌細胞生長, 降解并破壞基底膜和細胞外基質, 為癌細胞轉移提供條件。

另外，該研究結果還顯示VEGF、Cath-D在乳癌組織中同時出現表達上調，存在正關聯，提示它們可能在乳癌的復發、轉移中起協同作用，具體機制有待進一步研究。

綜上所述，乳癌原發灶與復發灶及有淋巴結轉移的乳癌組織中VEGF與Cath-D蛋白高表達，二者可能在乳癌復發和淋巴結轉移中起協同作用。聯合檢測VEGF、Cath-D的表達在判斷乳癌的復發、轉移及預后方面有重要的臨床意義。

[1]張敏璐,黃哲宙,鄭瑩.中國2008年女性乳腺癌發病、死亡和患病情況的估計及預測[J].中華流行病學雜志,2012,33(10):1049

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[3]李穎嘉,楊莉,夏瓊,等.乳腺腫瘤血管生成功能性變化特征及其機制[J].南方醫科大學學報,2009,29(8):1557

[4]李穎嘉,文戈,王倩.VEGF及其主要受體Flk-1/KDR在乳腺良惡性腫瘤中的表達及其意義[J].南方醫科大學學報,2009,29(1):70

[5]黃柏強,賀勇,郝秀靜,等.乳腺癌及癌旁組織中VEGF及survivin-2B mRNA的表達意義[J].第四軍醫大學學報,2008,29(16):1479

[6]雷杰,費建東,劉振顯,等.乳腺癌組織中Ang-2及VEGF的表達及意義[J].腫瘤防治研究,2008,35(4):263

[7]Masson O,Prébois C,Derocq D,et al.Cathepsin-D, a key protease in breast cancer, is up-regulated in obese mouse and human adipose tissue, and controls adipogenesis[J].PLoS One,2011,6(2):e16452

[8]Brujan I,Margaritescu C,Simionescu C,et al.Cathepsin-D expression in breast lesion: an immunohistochemical study[J].Rom J Morphol Embryol,2009,50(1):31

[9]李偉漢.乳腺癌患者癌組織中組織蛋白酶D和基質金屬蛋白酶-2的表達及其判斷預后的價值[J].中國老年學雜志,2012,32(4):719

[10]Sullu Y,Demirag GG,Yildirim A,et al.Matrix metalloproteinase-2(MMP-2) and MMP-9 expression in invasive ductal carcinoma of the breast[J].Pathol Res Pract,2011,207(12):747

[11]于湛,高劍波,陳奎生,等.胃癌的螺旋CT征象與MMP-9及Cath-D蛋白表達的關系[J].鄭州大學學報:醫學版,2010,45(6):1004

(2013-11-07收稿 責任編輯徐春燕)

Expressions of VEGF and Cath-D in primary and recurrent focuses from patients with breast cancer

NINGDianbin,CHENYingmin,BAOLei

DepartmentofGeneralSurgery,HebeiProvincialPeople'sHospital,Shijiazhuang050051

breast cancer; VEGF; Cath-D; lymph node metastasis

Aim: To investigate the expressions of VEGF and Cath-D in primary and recurrent focuses from patients with breast cancer. Methods: Immunohistochemical SP method was used to detect the expressions of VEGF and Cath-D in 38 cases of breast cancer(25 with lymph node metastasis) and 22 cases of recurrent breast cancer(5 with lymph node metastasis).Results: The expressions of VEGF and Cath-D in primary focuses and recurrent focuses had no significant difference, but both of them were higher than normal breast tissue(χ2=50.029 and 24.461，P<0.05). The expressions of VEGF and Cath-D in breast cancer tissue with lymphatic metastasis were higher than that of without lymphatic metastasis(χ2=9.017 and 5.963，P<0.05). The expressions of VEGF and Cath-D in breast cancer tissue were positively associated(rP=0.411,P<0.001). Conclusion: There are high expressions of VEGF and Cath-D in primary， recurrent focuses and breast cancer tissue with lymph node metastasis from patients with breast cancer,and they may have synergetic effect on the recurrence and lymphatic metastasis of breast cancer.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.04.034

R737.9