食管鱗癌IGF-1R、EGFR蛋白的表達及其臨床意義

張俊凱 潘佩玲 吳穎猛

食管鱗癌IGF-1R、EGFR蛋白的表達及其臨床意義

張俊凱 潘佩玲 吳穎猛

目的 研究IGF-1R、EGFR蛋白在食管鱗癌患者中的表達情況及其臨床意義。方法 應用免疫組織化學SP法檢測50例食管鱗癌患者IGF-1R、EGFR蛋白的表達情況, 取20例手術標本正常組織作為對照組。結果 食管鱗癌中IGF-1R蛋白陽性表達率明顯升高(χ2=28.29, P<0.05), EGFR蛋白陽性表達率明顯升高(χ2=4.56, P<0.05)。IGF-1R的陽性表達與食管癌的病理分級有關, 分級越高陽性率越高, 與浸潤深度有關, 侵及深肌層及外膜IGF-1R的表達明顯高于侵及淺肌層及黏膜的表達, 與TNM分期有關, 分期越晚陽性率越高, 差異均有統計學意義。淋巴結轉移組IGF-1R或EGFR的表達明顯高于非轉移組。結論 初步結果分析顯示IGF-1R可能與食管鱗癌的病理分級及侵襲、轉移有關, EGFR可能與食管鱗癌的轉移有關。

食管癌；IGF-1R蛋白；EGFR蛋白；免疫組織化學

本文應用免疫組化的方法研究IGF-1R和EGFR在食管鱗癌中的異常表達,對食管鱗癌中使用靶向治療具有積極意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選50病例本院2009年8月～2011年12月經手術切除食管癌標本, 且經病理證實均為食管鱗狀細胞癌, 所有病例術前均無其他惡性腫瘤或嚴重內科疾病, 術前均未接受化療、放療及免疫治療。其中男性47例, 女性3例,年齡32~74歲, 平均52.5歲。取20例手術標本正常組織作為對照組, 正常組織取自手術殘端, 距癌組織3 cm以上。

1.2 試劑及方法 采用免疫組化檢測50例患者及20例正常組織中IGF-1R、EGFR蛋白的表達情況。標本經40 g/L甲醛固定, 石蠟包埋, 每塊連續切取3張4 μm厚的切片,貼附于用生物膠處理的載玻片上, 60℃烤60 min。切片脫蠟至水, 清洗3次。體積分數0.03的H2O2封閉內源性過氧化物酶20 min, 清洗3次。切片微波抗原修復、冷卻、清洗。按說明書滴加抗體, 濕盒4℃過夜。清洗后, 滴加二抗, 37℃30 min。清洗3次。DAB顯色, 蘇木精襯染, 脫水, 封片, 光學顯微鏡下觀察。

1.3 結果判斷 以PBS代替一抗作為陰性對照。IGF-1R蛋白表達陽性為胞膜上出現棕黃色細顆粒。綜合染色強度及分布范圍進行半定量分析:染色強度陰性為0分, 染色弱但強于陰性對照為1分, 染色清晰為2分, 染色強為3分, 分布范圍評分標準:陽性細胞數<10%為0分, 10%~30%為1分, 31%~60%為2分, >60%為3分。上述兩種評分相加0~1分為(-), 2分為(+), 3~4分為(++), 5~6分為(+++)。+為陽性表達, ++、+++為過度表達。操作EGFR蛋白以細胞膜和細胞漿染成棕黃色為陽性染色, 細胞膜或細胞漿里淡黃(染色弱)、棕黃(中等強度染色)和棕褐色(強陽性)。每張切片隨機觀察10個高倍視野, 按染色強度及陽性細胞數分為3級:陰性(-) ,無陽性細胞；弱陽性(±) ,< 50%細胞呈弱、中等強度染色,強陽性細胞數<30%；陽性(+),≥50 %細胞呈弱、中等強度陽性細胞, 強陽性細胞數≥30%。其中IGF-1R抗體購自福建邁新公司。EGFR抗體購自北京金菩嘉公司。

1.4 統計學方法 所有統計處理均用SPSS 13.0統計軟件進行。計數資料頻率比較及相關性分析采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

表1 IGF-1R和EGFR的在食管鱗癌和正常組織中的表達

表2 IGF-1R和EGFR的表達與食管鱗癌臨床病理參數的關系

3 結論

胰島素樣生長因子(IGF)包括IGF-1和IGF-1R, 屬于多肽類家族的成員, 與胰島素約有50%的同源性［1］。IGF-1R主要分布在細胞膜上, 能促進體外培養細胞的有絲分裂［2］。細胞的增生與細胞膜上IGF-1R的數目成正比,當IGF-1R表達水平下降或IGF-1R丟失會導致腫瘤細胞大量凋亡；相反, IGF-1R表達水平升高則會抑制細胞凋亡［3］。Chen［4］研究發現IGF-1R和EGFR在食管癌細胞系CE48T/VGH中過度表達。表皮生長因子受體( EGFR)與其配體EGF或TGF-α結合可激活受體本身的酪氨酸蛋白激酶活性, 進一步激活信號傳導系統, 刺激細胞生長增殖。日本、美國和法國的研究資料表明,食管鱗癌細胞系EGFR 基因擴增率為8%~30%［5］。

國內吳慧等研究結果示, 食管鱗癌組織中IGF-1R的陽性表達率明顯高于正常組織, 并且在浸潤深層的癌組織中陽性表達率明顯高于淺層組, 淋巴結轉移組的表達率明顯高于非轉移組, 兩者相比差異有統計學意義［6］。Imsumran［7］研究100例外科手術切除的食管鱗癌患者, 使用免疫組化的方法檢測IGF-IR和IGF-II配體的表達和預后的關系。結果提示IGF-IR和IGF-II蛋白分別在60%和50%的食管鱗癌標本中有表達陽性, 而且和腫瘤的浸潤深度、轉移、分期較晚、復發等有關聯［7］。Carneiro 等［8］報道30例食管鱗癌患者中19例顯示EGFR強陽性表達( 免疫染色為3+), 其中12例有基因擴增的現象, 另外11例患者中, 僅2例基因擴增, EGFR過表達與基因擴增發生一致。

本研究結果中, IGF-1R和EGFR在食管鱗癌組織中的表達高于在正常食管黏膜上皮中的表達, 差異有統計學意義。本研究還發現, IGF-1的陽性表達與食管癌的病理分級有關,分級越高陽性率越高, 與浸潤深度有關, 侵及深肌層及外膜IGF-1的表達明顯高于侵及淺肌層及黏膜的表達, 與TNM分期有關, I期、Ⅱ期、IIIA和B期, 分期越晚陽性率越高, 差異均有統計學意義。說明IGF-1可能參與了食管癌的病理分化及侵襲、進展。淋巴結轉移組IGF-1R或EGFR的表達明顯高于非轉移組, 提示IGF-1與EGFR可能參與了食管癌的淋巴道轉移。

綜上所述, 本研究提示IGF-1R和EGFR在食管鱗癌的異常表達可成為食管鱗癌的重要生物學指標, 由于本研究樣本例數較少, 關于IGF-1R和EGFR的蛋白表達是否為影響食管鱗癌預后的獨立危險因素, 還有待進一步研究。

［1］ Daughaday W H.The possible autocrine/paracrine and endocrine roles of insulin-like growth factors of humantumors(editorial).Endocrinology, 1990, 127(1):1-4.

［2］ 張明生, 袁宏銀, 熊斌, 等.IGF-ⅡmRNA、bcl-2蛋白在結腸直腸腺癌組織中的表達及臨床意義.癌癥, 2002, 21(11): 1226-1230.

［3］ 李雪蓮, 李錦玉.胰島素樣生長因子-1受體與腫瘤的研究進展, 國外醫學婦幼保健分冊, 2005, 16(6), 435-437.

［4］ Chen SC.Overexpression of epidermal growth factor and insulinlike growth factor-I receptors and autocrine stimulation in human esophageal carcinoma cells.Cancer Res, 1991,51(7):1898-1903.

［5］ Al-Kasspooles M, Moore JH, Orringer MB.Amplification and overexpression of the EGFR and erbB-2 genes in human esophageal adenocarcinomas.Int J Cancer, 1993,54(2):213-219.

［6］ 吳慧, 陳奎生.食管鱗癌組織IGF-1和IGF-1R的表達及其相關性研究, 中華腫瘤防治雜志, 2008, 6, 15(11), 826-828.

［7］ Imsumran A, Adachi Y, Yamamoto H.Insulin-like growth factor-I receptor as a marker for prognosis and a therapeutic target in human esophageal squamous cell carcinoma.Carcinogenesis, 2007, 28(5):947-956.

［8］ Carneiro A, Isinger A, Karlsson A, et al.Prognostic impact of arraybased genomic profiles in esophageal squamous cell cancer.BMC Cancer, 2008,11(8):98.

Expression and significance of IGF-1R and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma

ZHANG Jun-kai, PAN Pei-ling, WU Ying-meng.
Department of Oncology, People's Hospital of Zhongshan, Zhongshan 528403,China

Objective To investigate the expression of IGF Type 1 Receptor protein and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma patients and its clinical significance.Methods The expressions of IGF-1R and EGFR protein were detected in 50 patients with esophageal squamous carcinoma, 20 cases of normal esophageal tissue by SP immunohistochemistry method.Results The positive rate of IGF-1R protein was markedly higher in esophageal squamous carcinoma than in normal esophageal tissue.(χ2=28.29, P=0.032).The positive rate of EGFR protein was also higher.(χ2=4.56, P<0.05).Close correlation was found on the expression of IGF-1R between pathological grade of esophageal squamous carcinoma,the invasion of tumor and TNM stages.Difference was statistically significant.The expression of IGF-1R or EGFR was higher in lymph node metastasis positive patients than that in negative patients.Conclusion The expression of IGF-1R protein has some relationship with the pathological grade, invasion, metastasis and esophageal squamous carcinoma.The expression of IGF-1R protein has some relevance with the metastasis of esophageal squamous carcinoma．

Esophageal carcinoma; IGF Type 1 Receptor protein; EGFR protein; Immunohistochemistry

528403 中山市人民醫院化療科