高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量

麥海燕 曲彩紅 江先合

高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量

麥海燕 曲彩紅 江先合

目的 探究利用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量的效果。方法 選擇15 g鉤藤藥粉, 將其分為兩份, 對照組進行高效液相色譜-紫外檢測器檢測, 實驗組進行高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測, 觀察兩組方法檢測的準確率和所需時間。結果 以精密鉤藤堿樣品的含量為“金標準”, 發(fā)現(xiàn)高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測可以更加準確地判定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量情況(P＜0.05)。同時實驗組檢測的天數(shù)少于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論 高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測的方法更有利于對中藥鉤藤中鉤藤堿的測定, 值得臨床進一步研究。

高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法；鉤藤；鉤藤堿；含量

鉤藤屬于藤本植物, 又名大鉤丁。莖枝呈圓柱形或類方形, 有細縱紋。節(jié)上有向下彎曲的單鉤和雙鉤, 鉤下有托葉痕。而鉤藤堿則是從鉤藤的帶鉤枝條中取出的一種生物堿。鉤藤堿具有降低血管阻力、抑制外周血擴散的作用, 在治療高血壓等疾病方面有顯著效果。鉤藤堿對人類帶來了極大的好處, 因此, 作者通過對比高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器檢測和高效液相色譜-紫外檢測器檢測法來為進一步精確測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量提供合理的依據(jù)［1］。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 此次試驗所需要的儀器有：高效液相色譜系統(tǒng)、配蒸發(fā)散射和紫外兩種檢測器。選用4.6 mm×200.0 mm, 5 μm的Dikma DiamonsilC18的色譜柱。精確度為0.01的電子天平、離心機、多用途漩渦混合器和超純水系統(tǒng)。對照品：鉤藤堿對照品。由南昌貝塔生物科技有限公司提供, 產(chǎn)品批號為10172-080117,乙腈、甲醇均為色譜純；醋酸銨由天津市化工研究所提供。鉤藤干藥材統(tǒng)一產(chǎn)自湖南。

1.2 方法 首先制備對照溶液。精密稱取5.0 g鉤藤堿對照品, 置于10 ml容量瓶中, 用無水甲醇定容濃度為0.5 mg/ml,作為對照液, 經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。取續(xù)濾液為儲備液。然后處理鉤藤藥材, 將鉤藤藥材進行粉碎, 準確量取15 g粉末, 將其分為兩份。分別加入50 ml甲醇混勻, 置于4℃冰箱中冷浸12 h,然后分別超聲30 min, 均定容于100 ml容量瓶內。最后分別經(jīng)過0.22 μm微孔過濾膜過濾［2］。然后對兩組藥品進行含量檢測。

實驗組樣品采用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定。流動相：乙腈聯(lián)合0.01 mol/L的醋酸銨；采用梯度法洗脫, 乙腈在20 min內比例由20:80遞增至40:60；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；進樣量為20 μl。蒸發(fā)散射檢測器參數(shù)：飄逸管溫度為105℃。載氣流速3.0 ml/min, 放大倍數(shù)為2；分流器關閉。對照組采用高效液相色譜-紫外檢測器法測定。流動相：甲醇聯(lián)合0.01 mol/L的磷酸二氫鉀溶液；采用梯度法洗脫, 乙腈在40 min內比例由30:70遞增至40:60, 41 min乙腈比例恢復30:70；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；進樣量為20μl。對比兩組藥品檢測所需的時間。同時與對照樣品進行比較, 觀察兩組樣品測得含量的準確率。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理, 計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗, 計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗,以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

所有樣品在形態(tài)、大小等方面差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。以鉤藤堿對照品作為“金標準”, 實驗組即采用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定的樣品含量準確率為97.4%。對照組即采用高效液相色譜-紫外檢測器檢測定的樣品含量準確率為66.7%, 兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。詳見表1。并且兩組患者檢驗花費的時間差異也有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。詳見表2。

表1 兩種方法準確率、靈敏度、特異性的比較(n, %)

表2 兩種方法所需要的時間比較( x-±s)

3 討論

鉤藤分布于我國陜西、湖南等地?！侗静輬D經(jīng)》中寫道：鉤藤, 《神農(nóng)本草經(jīng)》不載所出州土。蘇恭云出梁州, 今興元府亦有之。葉細莖長, 節(jié)間有刺若釣鉤。三月采。葛洪治小兒方多用之。又《廣濟》及《崔氏方》療小兒驚癎諸湯欽,皆用吊藤皮。

中藥鉤藤中的鉤藤堿對降血壓有較好的作用。此生物堿無論對麻醉動物或不麻醉動物, 正常動物或高血壓動物, 也不論靜脈滴注或灌胃給藥均有降壓作用［3］, 且無快速耐受現(xiàn)象。鉤藤堿能抑制雙側頸總動脈所致的加壓反射, 對乙酰膽堿的降壓作用不明顯, 但能顯著抑制甚至阻斷電刺激迷走神經(jīng)高中端所致的血壓下降, 不能對抗腎上腺素、去甲腎上腺素的苯丙胺的升壓作用, 卻能明顯增強腎上腺素和去甲腎上腺素的升壓作用。并能使離體兔耳血管擴張, 似有對外周血管的直接作用。認為鉤藤堿產(chǎn)生降壓作用的原理主要是直接和反射性地抑制了血管運動中樞以及阻滯交感神經(jīng)和神經(jīng)節(jié), 使外周血管擴張, 阻力降低所致。其直接擴張血管的作用比較強。同時鉤藤堿對平滑肌還有一定的影響, 可以抑制腸帶的收縮。因此, 鉤藤堿是一種對治療高血壓等疾病很有用的藥物成分。

高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法是一種新型的測定中藥鉤藤中鉤藤堿的方法, 隨著技術的精益求精和完善, 越來越廣泛的應用于醫(yī)藥、化工、食品等領域。此方法通過先進的自動分析儀器, 通過響應因子只與物性有關及與梯度洗脫相容等特點, 能夠使鉤藤堿與藥材中其他成分分離較好, 達到準確的測量。此方法符合速度快、成本低的優(yōu)點。由于此方法運用先進的儀器設備, 還沒有廣泛應用, 因此需要大量的人員對先進設備進行學習培訓。同時, 由于是機器檢測,準確性也會更加精確。

本次研究中以鉤藤堿對照品作為“金標準”, 實驗組即采用高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法測定的樣品含量準確率為97.4%。對照組即采用高效液相色譜-紫外檢測器檢測定的樣品含量準確率為66.7%, 兩組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。并且兩組患者檢驗花費的時間也具有明顯差異。通過對中藥鉤藤中鉤藤堿的含量測定, 使醫(yī)護人員對藥材的情況得到更加深入的了解, 同時方便對此種生物堿的利用［4］。因此可以看出, 高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法更有利于測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量。

在目前來說, 高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器法和高效液相色譜-紫外檢測器發(fā)兩種方法均是測定鉤藤堿含量的有效手段, 但是高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測法操作方便、測得的結果更加精確精確, 所得結果是一項很有意義的指標,有很大的參考價值［5］。因此廣泛推廣高效液相色譜-蒸發(fā)散射檢測器方法測定中藥鉤藤中鉤藤堿將是下一步研究的重點。

［1］ 胡嵐嵐, 湯建林, 徐穎, 等.HPLC_ELSD法測定中藥鉤藤中鉤藤堿的含量.重慶醫(yī)學, 2013, 42(10):1089-1091.

［2］ 吳衛(wèi), 周娜, 劉梅.HPLC法測定鉤藤提取物中鉤藤堿的含量.安徽農(nóng)業(yè)科學, 2012, 40(11): 6442-6443.

［3］ 周吉銀, 周世文, 湯建林.含鉤藤中藥復方制劑中鉤藤堿含量測定方法研究進展.西北藥學雜志, 2013, 28(4):434-435.

［4］ 劉清華, 葛爾寧.RP_HPLC法測定鉤藤煎劑中鉤藤堿含量及變化.浙江中醫(yī)藥大學學報, 2010, 34(2): 270-271.

［5］ 王曉穎, 劉永靜, 陳丹, 等.HPLC法測定不同產(chǎn)地鉤藤中鉤藤堿的含量分析.中國中醫(yī)藥科技, 2011, 18(3):215-217.

2014-04-17］

510630 中山大學附屬第三醫(yī)院藥學部