FQ-PCR法與染色涂片法檢測腦脊液結核桿菌的對照性分析

郭麗

FQ-PCR法與染色涂片法檢測腦脊液結核桿菌的對照性分析

郭麗

目的 對比熒光定量聚合酶鏈式反應法(FQ-PCR)及染色涂片法在腦脊液結核桿菌檢測中的應用價值。方法 結核性腦膜炎(TBM)疑似患者320例, 臨床醫師在無菌操作下抽取患者腦脊液送至實驗室進行FQ-PCR法與染色涂片法檢測, 觀察檢測結果。結果 320例TBM疑似患者共確診45例。FQ-PCR法檢測的陽性率為15.63%, 明顯高于染色涂片法的6.25%, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；染色涂片法檢測的特異度為92.31%、靈敏度為44.44%, 均低于FQ-PCR方法的98.21%、90.91%, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。結論 相較于染色涂片法, FQ-PCR法具有更高的特異度及靈敏度, 且操作快速、簡便, 在腦脊液結核桿菌的檢測中具有重要的應用價值。

熒光定量聚合酶鏈式反應法；染色涂片法；結核性腦膜炎；腦脊液結核桿菌

結核性腦膜炎(TBM)是由結核桿菌導致的脊膜與腦膜的非化膿性炎性疾病。近年來, 隨著吸毒、AIDS、酗酒、免疫抑制劑使用率的不斷提高, 致使TBM的發生率迅速遞增。TBM是結核病中死亡率最高的類型之一［1］, 早發現、早治療對TBM患者的療效及預后十分重要。臨床發現, TBM的臨床表現及腦脊液(CSF)測定均不具備典型特征, 這給確診帶來了極大的困難。本研究對320例疑似TBM的患者分別應用FQ-PCR及染色涂片法進行CSF抗酸桿菌測定, 對比兩種方法的檢測結果, 為提高臨床診斷效果提供有效參考。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月～2014年1月本院收治的TBM疑似患者320例, 臨床醫師在無菌操作下抽取患者腦脊液送至實驗室進行FQ-PCR法與染色涂片法檢測。

1.2 儀器 FQ-PCR實時定量檢查儀(型號：ABI 7300, 產地：美國)；試劑：結核分枝桿菌(TB)核酸擴增熒光檢測試劑盒［2］(深圳市匹基生物工程有限公司, 國藥準字S20030084)。

1.3 方法

1.3.1 FQ-PCR法 CSF標本以1500 r的速度離心5 min,去除上清液, 將TB核酸提取液50 μl加入沉淀物中, 輕彈管底使沉淀物懸浮。在100℃放置樣本, 然后在-20℃或4℃下冷卻。樣本管以10000 r的速度離心5 min, 選擇上清液, 反應模板以4℃內保存, 在自動反應管中加入模板上清液2 μl以供PCR使用, 具體操作根據試劑盒說明書的要求嚴格執行。

1.3.2 染色涂片法 腦脊液標本離心后, 沉渣方式涂片抗酸染色, 并在鏡下查找抗酸桿菌。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計學分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法的抗酸桿菌測定結果 320份CSF標本經染色涂片法檢測, 共檢出抗酸桿菌20例, 陽性率為6.25%；經FQ-PCR法檢測, 檢出抗酸桿菌50例, 陽性率為15.63%；FQ-PCR檢測法的陽性檢出率明顯高于染色涂片法, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 兩種方法測定CSF結核桿菌的性能評估 320例疑似TBM的患者經MRI、CT、CSF生化檢驗并結合臨床癥狀診斷后, 共有45例確診為TBM。FQ-PCR檢測CSF結核桿菌的陽性率、特異度、靈敏度均高于染色法, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩種方法測定CSF結核桿菌的性能評估(%)

3 討論

目前, TBM的診斷依據主要依賴于臨床表現、CSF檢查結果及相關影像學檢查, 其中CSF的免疫學、生化及病原學、細胞學測定結果是確診的重要參考值。同時, 作者了解到,早診斷、早治療對TBM患者的療效及預后具有重要的影響,因此選擇一種快速、有效的結核桿菌檢測方法是保障TBM患者健康的關鍵。

本文研究結果可見, FQ-PCR對于CSF結核桿菌的陽性檢出率明顯高于染色涂片法(P＜0.05)；染色涂片法特異度為92.31%、靈敏度為44.44%, 均低于FQ-PCR方法的98.21%、 90.91%(P＜0.05)。其中FQ-PCR的陽性檢出率為50例, 高于確診TBM的45例, 作者認為這可能與FQ-PCR方法敏感性過高、實驗或取樣送檢過程中感染所致的假陽性有關；還可能與醫師在未經影像學及臨床癥狀確診的情況下用藥, 而使患者病情在未確診的情況下痊愈有關。雖然上述兩種原因可造成FQ-PCR陽性診斷率高于確診率, 但二者陽性率之間的差異性較小。

染色涂片法對于TBM的檢出率較低, 且需要進行1個月的培養處理, 耗時過長, 延誤了患者的治療時間。目前,改良染色涂片法雖然提高了檢出率, 但檢測效果也是差強人意［3］。因此, 在現階段的結核桿菌檢測方法中, FQ-PCR具有更明顯的應用優勢, 有效提高了臨床確診率。

綜上所述, FQ-PCR作為特異度強、靈敏度高、快速、簡便的腦脊液結核桿菌檢查方法, 在TBM的診斷中具有重要的臨床應用價值, 值得推廣。

［1］ 張愛民.實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測腦脊液中結核桿菌DNA的臨床應用.中國臨床實用醫學, 2010, 4(1):652.

［2］ 鞏建華,薛秀榮,馬愛玲.腦脊液結核桿菌抗原及核酸聯合檢測對結核性腦膜炎早期診斷的評價.河北醫學, 2012, 18(9):122-124.

［3］ 魏建華,薛曉紅,熊建軍, 等.結核分枝桿菌DNA分子生物學檢測.預防醫學情報雜志, 2012, 28(1):56-58.

2014-06-30］

130500 吉林省結核病醫院檢驗科