巴西牽牛組織培養技術初探

許泳清

(福建省農業科學院作物研究所 350013)

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巴西牽牛組織培養技術初探

許泳清

(福建省農業科學院作物研究所 350013)

以巴西牽牛試管苗的莖尖為外殖體，對巴西牽牛組織培養技術進行研究，結果表明：巴西牽牛組培苗腋芽生長增殖的最佳培養基為MS+NAA 0.5mg/L。

巴西牽牛；組織培養；組培苗；技術

病毒病已成為甘薯生產上的毀滅性病害，嚴重的可造成甘薯減產60%～80%。當前甘薯病毒病尚無特別有效的化學防治方法，加之甘薯屬于無性繁殖作物，極易造成病毒繼代傳染及傳播擴散。目前，通過莖尖組織培養獲得脫毒種苗是防治甘薯病毒病最為有效的措施，而病毒檢測是不可或缺的一環。甘薯病毒病多數是由多種病毒復合侵染造成的，目前最簡單有效并且可以一次檢查多種病毒的方法就是用指示植物——巴西牽牛嫁接法，巴西牽牛對多種侵染甘薯的病毒都很敏感，受病毒侵染后葉片上產生系統性癥狀，如明脈、脈帶、產生褪綠斑點、中脈扭曲、整株枯死等[1]。巴西牽牛雖然能產生大量的種子，但在繁殖過程中易受甘薯病毒的侵染，若通過組織培養技術在試管中繁殖巴西牽牛試管苗則能夠克服用種子繁苗的缺點[2]。為此，本試驗對巴西牽牛組織培養技術進行研究，旨在通過在試管中培養組培苗的方式，獲得大量生長一致的巴西牽牛組培苗用于甘薯病毒病的檢測。

1 材料與方法

1.1試驗材料

巴西牽牛種子(上一年收獲的種子，已經通過休眠期)。

1.2試驗處理設計

催芽處理設：處理1、種子用濃硫酸液泡1.5h；處理2、種子用刀破殼后經次氯酸鈉消毒。

種子萌發培養基MS，組培苗擴繁繼代培養基設3個處理：處理A、MS；處理B、MS+NAA 0.5mg/L；處理C、MS+NAA 0.5mg/L +6-BA 1.0mg/L。培養基制備后，均經121℃、1.5個大氣壓滅菌20min。

1.3試驗方法

在超凈工作臺上，將巴西牽牛種子進行催芽，處理1的種子用濃硫酸浸泡1.5h，無菌水清洗后接于MS培養基；處理2將種子用刀破殼后經次氯酸鈉消毒處理后接于MS培養基。兩個處理均于3d后觀察發芽率與污染率。種子發芽后每天進行2000lx的光照10h，培養7d后，在超凈工作臺上，用無菌剪刀、鑷子剪掉子葉，然后切取0.5～1.0mm長的莖尖接種到莖尖啟動培養基上，每瓶接種1個莖尖，置于25℃、2000lx、每天光照10h的條件下培養。待莖尖生長成健壯的巴西牽牛試管植株后，剪成單莖節段，將單莖節段斜插入繼代培養基上，腋芽位于培養基表面進行擴繁，每瓶接3株。20d后觀察組培苗的生長情況，包括株高、莖節數和根長等。

2 結果與分析

2.1不同催芽處理對巴西牽牛種子萌發的影響

由于巴西牽牛種子具有堅硬光滑的種皮，其種子萌發比較困難，且萌發時間參差不齊，因此應進行催芽處理。從表1中可以看出，兩個處理巴西牽牛種子的發芽率較高，均達到了90%以上，且出苗時間短，說明這兩種催芽處理的方式都是有效的。但兩種處理均發生污染，處理2的污染率較低，僅為2%。綜合上述表現，巴西牽牛種子宜用刀破殼后經次氯酸鈉消毒處理，有利于減少污染率，提高發芽率。

表1 巴西牽牛種子不同催芽處理的萌發情況

2.2不同培養基對巴西牽牛組培苗生長的影響

從表2中可以看出，3種培養基對巴西牽牛試管苗的生長情況均有影響。從生長勢看，巴西牽牛試管苗的單莖節段在MS培養基和MS+NAA 0.5mg/L培養基中，苗生長正常、葉色綠、根系發達，表明MS和MS+NAA 0.5mg/L兩種培養基均適合于巴西牽牛試管苗的生長；但巴西牽牛試管苗的單莖節段在MS+NAA 0.5mg/L培養基上生長最好，其生長20d后的株高、莖節數、生根數量及根長都較MS培養基上的試管苗高；MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L培養基中的苗生長受到抑制，株高矮，不長根，根部出現愈傷。試驗結果表明，MS+NAA 0.5mg/L培養基最適合巴西牽牛試管苗單莖節段繼代增殖培養。

表2 巴西牽牛單莖節在不同培養基中的生長情況

注：處理A為MS；處理B為MS+NAA 0.5mg/L；處理C為MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L。

3 小結與討論

巴西牽牛種子最適宜的催芽方式是采用破殼的方法，經消毒處理后接于MS培養基中，發芽率可達100%。本研究得出了巴西牽牛組培苗擴繁的最適宜培養基為MS+NAA 0.5mg/L，繁殖系數可達到5。通過組織培養的方式，可以不受季節影響在短時間內獲得大量的巴西牽牛組培苗[3]，通過移栽，進行大量甘薯病毒檢測。

本試驗已經篩選出適宜巴西牽牛組培苗單莖節段繼代增殖培養的培養基，能夠大量擴繁出無病毒生長一致的組培苗。下一步將研究將在試管中利用巴西牽牛和甘薯試管苗進行試管微嫁接來檢測甘薯試管苗是否帶有病毒。

[1]張希太，李俊玲，宋九英，等.巴西牽牛的組織培養技術研究[J].河南科技學院學報：自然科學版，2006，34(1)：41-44.

[2]張希太，張彥波，肖磊，等.利用巴西牽牛試管苗檢測甘薯組培苗病毒技術研究[J].農學學報，2013，3(12)：16-22.

[3]王蒂．植物組織培養[M].北京：中國農業出版社，2004.

(責任編輯：林玲娜)

Preliminaryprobetotissueculturetechnologyforipomoeasetosa

XU Yong-qing

(InstituteofCropsciences,FujianAcademyofAgricultureSciences,FujianProvince350013)

With shoot tip of Ipomoea setosa plantlet as explants,tissue culture technology for Ipomoea setosa was studied. The results showed that the best culture medium for axillary bud growth of Ipomoea setosa was MS+NAA 0.5mg/L.

Ipomoea setosa; tissue culture; tissue culture seedling; technology

2014-10-13

許泳清，女，1980年生，助理研究員。

國家甘薯產業技術體系(CARS-11-B-10-2013)；福建省財政專項—福建省農業科學院科技創新團隊項目(CXTD-1-1301)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2014.12.002