慢性阻塞性肺疾病病人外周血T淋巴細胞的檢測及意義

錢文君 王佩芳 徐 慧 顧宗江

(蘇州市立醫院北區急診科，江蘇 蘇州 215008)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)與肺部對香煙煙霧等有害氣體或有害顆粒的異常炎癥反應有關。COPD患者戒煙后肺內炎癥持續存在，可能是包括炎癥在內的復合因素最終決定了疾病進展。COPD的炎癥過程中有中性粒細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞及多種細胞因子、炎癥介質參與，有學者提出COPD是自身免疫性疾病的假設〔1〕。本文探討細胞免疫在COPD發病中的作用。

1 資料與方法

1.1病例選擇 2009年4月至2010年6月在蘇州市立醫院(北區)經臨床診斷的入院治療的COPD病人13例。臨床診斷包括體征、X線和實驗室有關項目檢測，診斷符合2007年中華醫學會呼吸病分會制定的COPD診治規范(草案)中的診斷標準〔2〕。正常對照組12例，均為蘇州市立醫院(北區)體檢中心60歲以上正常人群。

1.2試劑 PE標記的抗人CD3+、CD4+、CD8+和CD28+抗體，FITC標記的抗人CD4+、CD8+、CD25+、CD45+RA和CD45RO+抗體，PE和FITC標記的小鼠Ig對照抗體以及紅細胞溶解液均購自Immunotech公司。

1.3方法 抽取COPD患者和正常體檢老人的靜脈抗凝血3 ml，吸出300 μl，分配至10個流式檢測管中，每管30 ul，其余靜脈血經4 000 r/min速度離心10 min后，吸取血漿置于EP管，-20℃冰箱內保存，用于細胞因子檢測。根據檢測要求，在每管中加入抗體微量全血法，對的T淋巴細胞檢測進行PE和FITC的雙標記，室溫孵育15 min后，加入紅細胞溶解液120 μl，37℃水浴20 min，加入磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌液3 ml，離心洗滌后，上Beckman-Coulter公司的流式細胞儀檢測并分析(參考值：CD3+：60%～85%、CD4+：28%～58%、CD8+：19%～48%、CD4+/CD8+：1.33～1.99)〔3〕。

1.4統計學方法 采用SPSS10.0軟件包進行t檢驗。

2 結 果

2.1外周血總T細胞、CD4+和CD8+亞群的檢測 與參考值相比較，健康對照組的CD3+、CD4+均值和CD4+/CD8+的比值均有所下降，急性期COPD組的CD3+和CD4+均值也有下降，而CD8+均值有所上升，導致CD4+/CD8+的比值下降并倒置，但組間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組研究對象總T細胞、CD4+和CD8+亞群±s，%)

2.2CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+亞群的檢測 急性期COPD組的CD4+CD45RA+均值和CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+比值與健康對照組相應的組別比較有所下降，而CD4+CD45RO+均值有所上升，組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。急性期COPD組的CD8+CD45RA+均值、CD8+CD45RO+均值和CD8+CD45RA+/CD8+CD45RO+比值與健康對照組相應的組別比較有所上升，差異均未達到統計學的意義(P>0.05)。見表2,表3。

表2 兩組研究對象CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+亞群檢測結果±s，%)

表3 兩組的CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+亞群檢測結果±s)

2.3CD4+CD28+亞群的檢測 急性期COPD組的CD4+CD28+均值與健康對照組的組別比較有所下降〔(19.25±5.70%)%vs(25.83±6.35)%，P<0.05〕。

3 討 論

正常人外周血T細胞及亞群的參考值標準主要是針對成年人。老年人機體內各個生理系統的功能都有衰退，免疫系統也不例外，淋巴細胞的數量和功能都存在下降。COPD好發于老年人，而且呈現反復發作的特點，因此選取了60歲以上正常老人作為健康對照組， COPD患者的外周血T細胞及亞群可以與年齡相仿的老年人進行比較，使得結果更具可比性。由于CD4+和CD8+分子除主要在T細胞上表達外，也有部分表達于其他細胞。相對于各種文獻在研究COPD疾病時采取的單標記方法檢測患者和對照組人群外周血T細胞和CD4+、CD8+亞群，本研究中采取結合CD3分子，進行CD3+CD4+和CD3+CD8+分子的雙標記檢測，可以更準確地界定CD4+和CD8+T細胞亞群。檢測的結果表明，說明老年人的T細胞免疫功能有所衰退。COPD患者體內免疫功能存在紊亂。CD8+T細胞在COPD患者的發病機制和疾病進程中起著重要的作用，體內的CD8+T細胞升高，CD4+T細胞降低，因為采用CD4+/CD8+的比值大部分都在1.5以上，導致CD4+/CD8+的比值嚴重倒置，有明顯的統計學差異。本研究中，由于采取了不同的方法和標準，兩組間CD4+/CD8+的比值并無統計學意義上的差異。

淋巴細胞上表達CD45RA主要和初始淋巴細胞有關，而表達CD 45RO主要和記憶淋巴細胞有關。由于T細胞在COPD疾病的發病過程中起著重要作用，而且COPD好發于老年人，呈現反復發作的特點，檢測兩個組別的CD4CD45RA和CD4CD45RO的表達，顯示急性期COPD組的CD4CD45RA表達下降，而CD4CD45RO的表達升高，導致CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+的比例降低，提示反復發作的COPD可能導致患者體內記憶性的CD4+T細胞增加。檢測兩個組別的CD8CD45RA和CD8CD45RO的表達，沒有顯示出類似的特點，不僅健康對照組中的CD8CD45RA的表達高于CD8CD45RO的表達，而且在COPD的急性發作時，CD8CD45RA和CD8CD45RO的表達都有所增加，前者的增加多于后者。有學者發現COPD患者外周血中細胞毒T細胞(CD27-/CD45RA+)的活性增強〔4〕，由于細胞毒T細胞主要存在于CD8+T細胞，隨著患者外周血中細胞毒T細胞(CD27-/CD45RA+)活性的增強，提示可伴隨CD8+CD45RA+數量的增加。

COPD的病因較復雜，吸煙是COPD眾多病因中最常見的重要因素，但近年來的研究發現部分患者在戒煙后，肺部的損害并未完全停止，仍有持續進展，因此，也有學者提出，COPD是自身免疫性疾病的假設〔5〕。在自身免疫性疾病中，CD4+CD28+T細胞是重要的亞群，這個亞群存在著下降。在正常成年人體內，CD4+CD28+T細胞約占CD4+T細胞 的90%。老年人體內，常有自身免疫現象，CD4+CD28+T細胞有所下降，本研究結果也證實了這一點。但在急性期COPD組，CD4+CD28+T細胞下降，對COPD是自身免疫性疾病的假設提供了一定的支持。

4 參考文獻

1黃紹光.自身免疫在慢性阻塞性肺病的作用〔J〕.上海交通大學學報(醫學版)，2008;28(9)：1062-4.

2中華醫學會呼吸病學分會.慢性阻塞性肺疾病(COPD)診治指南〔J〕.中華結核和呼吸雜志，2007；30(1)：8-17.

3許力軍, 唐 穎, 吳英慧，等. 聯合吸入治療對AECOPD患者外周T淋巴細胞、IL-2、CRP表達的調節以及肺功能的影響〔J〕.中國現代醫學雜志, 2009;19(7): 1035-8.

4萬 鵬，鐘小寧. 免疫反應與慢性阻塞性肺疾病〔J〕.中國實用內科雜志, 2009;29(4)：371-3.

5Stefanska AM，Walsh PT.Chronic obstructive pulmonary disease:evidence for an autoimmune component〔J〕.Cell Mol Immunol,2009;6(2): 81-6.