補腎法對絕經后動脈粥樣硬化模型大鼠心肌能量代謝的影響

徐丁潔 徐 洪 仝瑞曉 高 星 成秀梅 杜惠蘭

(河北聯合大學中醫學院中西醫臨床教研室，河北 唐山 063000)

女性絕經后，卵巢功能衰退，雌激素水平下降，對血管保護降低，心腦血管疾病的發病率增高〔1〕。流調學顯示，絕經后女性冠心病的發病率是絕經前女性的4倍，以后每增加10歲，冠心病的發病率增高7倍〔2，3〕。雌激素替代療法(ERT)能顯著降低心血管病發病率〔4〕，但是研究顯示，ERT對于已絕經10年及已有動脈粥樣病變的女性沒有明顯的保護作用〔5〕，長期應用還增加了子宮內膜癌、血栓形成的風險〔6〕，故此，需要尋找更理想的治療方法及藥物防治絕經后女性心血管疾病的發生。中醫理論認為，女性絕經是腎精不足、沖任虧損的表現，臨床采用補腎法治療絕經后諸癥，效果顯著〔7〕。能量代謝是一切有機體功能活動的基礎，心肌能量代謝對心血管疾病的發生發展起重要作用〔8〕。本實驗觀察補腎中藥對絕經后動脈粥樣硬化模型大鼠心肌能量代謝的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物 健康SD大鼠，雌性，鼠齡3個月，體質量(190±10)g，由河北醫科大學實驗動物中心提供，清潔級動物，生產許可證號：SCXK(冀)2008-1-003，合格證號：1006025。

1.2分組及造模方法〔9〕大鼠60只，適應性飼養1 w后，隨機分為對照組、模型組、中藥組，每組20只。對照組：行偽手術(開腹后暴露雙側卵巢，不予切除，雙側縫合)+普通飲食。每日灌服生理鹽水1 ml/100 g。模型組和中藥組：行卵巢切除+高脂飼料喂養，卵巢切除后第10天，一次性注射血清蛋白(BSA)，250 mg/kg。模型組每日灌服生理鹽水1 ml/100 g；中藥組每日灌服補腎中藥1 ml/100 g；共12 w。

1.3主要試劑 補腎中藥組成：熟地，山萸肉、山藥、枸杞子、女貞子、肉蓯蓉、覆盆子、菟絲子、當歸、白芍、丹參、香附，藥物一次性購自石家莊樂仁堂。藥物共同浸泡40 min，煮沸后文火煎煮60 min，濾出藥液；藥渣加適量水繼續煎煮40 min，合并兩次濾液，水浴濃縮，放置于4℃冰箱中密閉保存。

雌二醇(E2)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)放免試劑盒購自天津九鼎醫學生物工程有限公司。考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒、ATP酶、琥珀酸脫氫酶(SDH)、ATP 標準品檢測試劑盒購自南京建成生物研究所。注射用牛血清蛋白(BAS)購自北京萊博生物實驗材料研究所。乙腈為色譜純(美國迪馬公司)，其他試劑均為國產分析純。

1.4取材 12 w后，取材前大鼠禁食24 h，用3%水合氯醛麻醉，從股動脈抽血5 ml，3 000 r/min離心20 min，分離血清，-20℃保存，備測。同時，無菌操作，取左心室，冰盤操作，吸去血跡，投入液氮中，備測。

1.5指標及檢測方法

1.5.1血清E2、TC、TG、LDL-C測定 E2、TC、TG、LDL-C均采用放射免疫法檢測，按各試劑盒說明書操作，專人統一測定。

1.5.2心肌ATP 酶、SDH活性及ATP含量測定 取左心室，用冰冷的分離介質按重量體積比加9倍生理鹽水，制成10%勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清按照試劑盒說明測定 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP 酶及SDH活性，組織蛋白的測定采用考馬斯亮藍法。采用高效液相方法測定心肌ATP含量，美國Agilent-1200高效液相色譜儀，色譜柱為Dikma Diamonsil C18，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液，柱溫30℃，流速為0.8 ml/min，檢測波長 254 nm。

1.6統計學方法 采用SPSS16.0軟件進行完全隨機設計的單因素方差分析。

2 結 果

2.1動物一般狀況 實驗過程中，對照組大鼠外觀精神狀況佳，毛色白而光澤，反應靈敏，體重增加正常；模型組大鼠毛色無光、精神不振、體態臃腫、活動量少；中藥組大鼠一般狀況介于兩者之間。

2.2各組血清E2、TC、TG、LDL-C比較 與對照組比較，模型組E2降低，TC、TG、LDL-C升高(P均<0.05)。經補腎中藥治療后，與模型組比較，中藥組TC、TG、LDL-C降低(P均<0.05)；與對照組比較，中藥組E2下降(P<0.05)。見表1。

表1 各組間血清E2、TC、TG、LDL-C比較±s，n=20)

2.3各組之間心肌ATP酶、SDH活性及ATP含量的比較 與對照組比較，模型組Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性、ATP含量均有不同程度降低(均P<0.05)。經中藥治療后，與模型組比較，中藥組Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性、ATP含量升高(P均<0.05)；與對照組比較，中藥組Ca2+-Mg2+-ATP 酶差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組之間卵巢ATP酶、SDH活性及ATP含量比較±s，n=20)

3 討 論

女性絕經后心血管疾病的發生是一種多因素所致、緩慢復雜的病理過程，由于體內雌激素水平下降，機體神經、內分泌、免疫功能、骨代謝、血脂、自由基代謝等繼發性改變，血管反應性異常，動脈粥樣硬化形成，繼而引發心血管疾病〔10，11〕。中醫無動脈粥樣硬化或者冠心病病名，根據其臨床表現，多屬于“胸痹”“心悸”“真心痛”等病證范疇〔12〕，《素問·上古天真論》記載“女子七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也”，故絕經后女性心血管疾病的發生本源于“腎精虧損”〔13〕，在此理論指導下，臨床用補腎中藥為主治本，兼加其他藥物治表，標本兼治，多能奏效。實驗也證實，補腎中藥通過調節內分泌免疫功能，抑制炎癥反應、修復氧自由基損傷等多個作用環節發揮防治絕經后女性心血管疾病發生的作用〔14，15〕。

能量代謝是一切有機體功能活動的基礎，心臟通過能量代謝將儲存于脂肪酸和葡萄糖中的化學能轉化為機械能，為心臟的收縮和舒張等耗能過程提供能量，故心肌能量代謝在心血管疾病的發生發展過程起重要作用〔16，17〕。本實驗以能量代謝為切入點，觀察絕經后動脈粥樣硬化模型大鼠及補腎中藥干預下心肌能量代謝的變化。

本實驗結果提示絕經后心血管疾病的發生和心肌細胞線粒體ATP的合成障礙有關。經補腎中藥治療后，提示補腎中藥可以增加心肌能量儲備，提高心肌工作效率，雖然E2升高不明顯，但是通過改善心肌能量代謝，直接或間接調節脂質代謝，從而對絕經后動脈粥樣硬化起到良好的防治作用，從能量代謝角度完善了補腎中藥防治女性絕經后心血管疾病發生的機制，揭示中藥多靶點、多環節治療疾病的作用機制。

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