非小細胞肺癌患者腫瘤組織miRNA197表達及臨床意義

董揚揚 張海云 莊奕煌 許榮譽

(泉州市第一醫院腫瘤外科，福建 泉州 362000)

非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常見的類型，早期即發生轉移是影響NSCLC患者預后的重要因素，近年研究發現多種microRNA(miRNA)，在非小細胞肺癌的增殖、凋亡、分化和代謝等方面發揮重要的調節作用，最近研究發現miRNA197在多種腫瘤組織中表達升高，本文研究NSCLC組織中miRNA197的表達及相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2003年1月至2008年1月我院手術治療的NSCLC 121例，性別、年齡、腫瘤臨床分期及組織學分級資料完整，病理切片均由兩位以上的病理學專家共同閱片證實，術前均未接受放化療及生物治療，臨床TNM分期按照國際抗癌聯盟(UICC)2002年標準，得到我院倫理委員會的批準，均簽署知情同意書。

1.2觀察指標 分別選取腫瘤組織和癌旁正常組織切片進行miRNA197表達水平檢測，方法為：將所取組織剪成直徑1 cm大小，放入液氮罐中保存，后置入-80℃冰箱備用，Trizol法提取細胞總RNA，嚴格按照說明書進行，提取的RNA純度和濃度采用紫外分光光度計分別測定波長230、260和280 nm處的吸光度值。應用實時PCR法檢測，目的基因miRNA197引物序列：5′-GGTTCACCACCTTCTC-3′，下游引物序列5′-CAGTGCGTGTCGTGGAG-3′，內參U6引物序列：miRNA上游引物序列為5′-GCTTCGGCAGCACATATACTA-3′，下游引物序列為5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′，逆轉錄條件、RT-PCR反應條件分析參考文獻〔1〕，與內參比值大于1.5定為高表達〔2〕。

1.3統計學處理 采用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗和Kaplan-Meier生存分析。

2 結 果

2.1miRNA197在NSCLC組織和癌旁正常組織中的表達量 miRNA197在NSCLC組織表達量(高表達73例，低表達48例)明顯高于癌旁正常組織(高表達11例，低表達110例)(χ2=70.091,P=0.000 9)，見表1。

2.2miRNA-197診斷價值 miRNA高表達的患者淋巴結轉移較高(P<0.05)，臨床分期較高的患者miRNA197表達水平較高(P<0.05)，T分類為T3的患者miRNA197表達水平較高(P<0.05)，miRNA197表達水平與患者性別、年齡無關，見表1。

表1 miRNA197表達與各臨床病理特征的關系(n)

2.3miRNA-197與患者預后關系 miRNA-197高表達患者5年生存率(4.1%)明顯低于低表達患者(18.8%)(P<0.05)。見圖1。

圖1 miRNA197表達量與NSCLC患者預后關系

3 討 論

miRNAs是一類內源表達的、約22 nt左右的小分子非編碼RNA，它們通過轉錄后水平對靶基因進行調控，主要機制是剪切mRNA或者抑制mRNA的翻譯。miRNAs作為一種重要的生物分子，對細胞的生長、分化、增殖、細胞凋亡等具有重要的調控作用。MiRNAs可以通過同一通道調控多個目標而放大其生物學效應，一個miRNAs可以作用于上千個mRNAs，因此，即使相對較小的miRNAs表達的改變也可產生重要的生物學效應。研究表明超過50%的miRNAs位于與癌癥相關的染色體區域，其與腫瘤的發生、發展、轉移有重要關系，在肺癌組織中miRNAs通過不同方式參與腫瘤發生與起源、增殖、轉移、血管化等過程〔3〕，在肺癌的病理分型中，約80%為NSCLC，并且其惡性程度高，因此，對NSCLC組織中miRNAs的深入研究，將為早期肺癌提供新的檢測方法，并在個性化治療、提高療效等方面提供幫助〔4〕。

miRNA197是與人類腫瘤相關性很大的一個miRNA，研究發現miRNA197在乳腺癌、甲狀腺癌和胰腺癌中高表達〔5，6〕，并與患者預后密切相關。李俊等〔7〕證實miRNA197表達在喉癌組織中顯著升高，下調miRNA197表達可以顯著抑制喉癌細胞增殖，減弱侵襲和增殖能力〔8〕，Du等〔9〕發現miRNA197的NSCLC組織中miRNA197表達量明顯高于正常支氣管上皮細胞。研究表明，在A459和NIH-H460肺癌細胞株中，miRNA197具有顯著致癌性，下調miRNA表達量可以增加肺癌細胞凋亡，抑制增殖〔10〕，提示miRNA在肺癌組織的發生和發展中發揮重要作用，靶向miRNA的治療對于NSCLC的治療具有重要的臨床意義。但miRNA197將在肺癌的早期診斷及治療領域發揮重要作用：進一步明確miRNA相互調控的確切分子機制，需要更多的基礎、臨床試驗評估miRNA197類似物以及拮抗劑的治療效果、細胞毒性、藥代動力學等。

4 參考文獻

1李 俊，王建中，黃新生，等.喉鱗癌中microRNA-197表達水平的研究〔J〕.中國臨床醫學，2013；20(4)：443-6.

2Chen L，Li C，Peng Z，etal.miR-197 Expression in peripheral blood mononuclear cells from hepatitis B virus-infected patients〔J〕.Gut Liver，2013；7(3)：335-42.

3Yanaihara N，Caplen N，Bowman E，etal.Unique microRNA molecular profiles in lung cancer diagnosis and prognosis〔J〕.Cancer Cell，2006；9(3)：189-98.

4Boeri M，Verri C，Conte D，etal.MicroRNA signatures in tissues and plasma predict development and prognosis of computed tomography detected lung cancer〔J〕.Proceed Nat Acade Sci，2011；108(9)：3713-8.

5Hamada S，Satoh K，Miura S，etal.miR-197 induces epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer cells by targeting p120 catenin〔J〕.J Cell Physiol，2013；228(6)：1255-63.

6Wang T，Zhang X，Obijuru L，etal.A micro-RNA signature associated with race，tumor size，and target gene activity in human uterine leiomyoma〔J〕.Genes Chromosomes Cancer，2007；46(4)：336-7.

7李 俊，王建中，黃新生，等.喉鱗癌中microRNA-197表達水平的研究〔J〕.中國臨床醫學，2013；20(4)：443-6.

8李 俊，王建中，白廣平，等.慢病毒介導的miRNA-197-3p-siRNA對喉癌細胞系Hep-2生物學行為的影響〔J〕.復旦學報(醫學版)，2013；40(5)：550-5.

9Du L，Schageman JJ，Subauste MC，etal.miR-93，miR-98，and miR-197 regulate expression of tumor suppressor gene FUS1〔J〕.Molecular Cancer Res，2009；7(8)：1234-43.

10Fiori ME，Barbini C，Haas TL，etal.Antitumor effect of miR-197 targeting in p53 wild-type lung cancer〔J〕.Cell Death Diff，2014;21(5):774-82.