DC-CIK生物免疫治療聯合放療在肝癌治療中的臨床效果

朱珍英 竺順斌 陳 剛 鮑 晉 張 秦 孫春華

我國是肝癌的高發國家，且原發性肝癌起病隱匿，確診時多已發展到晚期階段，手術治療較為困難[1]。臨床上多采用肝動脈栓塞化療、放療等治療肝癌，但研究發現，肝癌細胞對射線具有一定的抵抗性，部分患者的放療效果不理想[2]。隨著免疫學分子和細胞生物學的發展，樹突狀細胞-細胞因子誘導的殺傷細胞(dendritic cell-cytokine-induced killers，DC-CIK)生物免疫治療成為了腫瘤治療的重要輔助手段[3]。本研究選取78例患者作為研究對象，觀察DC-CIK生物免疫治療聯合放療治療不同類型肝癌的臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年2月到2014年2月我院收治的78例患者作為研究對象，其中男性54例，女性24例，年齡46～74歲，平均(61.8±11.4)歲；78例患者中52 例有肝硬化,9例合并有門靜脈高壓，其他患者無合并癥狀。將患者隨機分為2組，對照組39例，其中男性28例，女性11例，年齡49～72歲，平均(60.8±10.9)歲，其中26例患者合并肝硬化,5例合并有門靜脈高壓；觀察組39例，其中男性26例，女性13例，年齡46～74歲，平均(62.6±11.3)歲，其中26例患者合并肝硬化,4例合并有門靜脈高壓。2組患者的性別、年齡和病情無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例納入標準

78例患者均符合以下標準：①患者的臨床分期為Ⅲ期或Ⅳ期，為晚期肝癌；患者預計生存期≥3個月。②患者存在手術禁忌證或患者及家屬不愿接受手術，患者接受放射治療前未接受化療手術等其他治療方法。③患者無嚴重的血液系統疾病，骨髓造血功能無異常。④所有患者在知情的前提下自愿參與本次研究，符合醫學倫理學原則。

1.3 治療方法

1.3.1 放療 2組患者均接受放射治療，采用電子直線加速器進行全肝移動照射，放射劑量為30～50 Gy，每周為一療程。

1.3.2 DC-CIK生物免疫治療 觀察組在放療的基礎上聯合DC-CIK生物免疫治療。DC-CIK生物免疫治療方法如下：①自體DC-CIK細胞的制備。CD細胞培養：抽取患者的外周血，使用血細胞分離機分離單核細胞，使用Ficoll 淋巴細胞分離液進一步分離淋巴細胞。洗滌分離的細胞，使用BIN無血清培養基制備細胞懸液，置于5%的CO2孵育箱孵育2 h。將細胞懸液移除后加入500 U/L的IL-4和1 000 U/mL的GM-CSF，繼續培養2～3 d后換液1次，第6天加入500 U/mL的TNF-α。CIK 細胞培養：分離淋巴細胞后加入1 000 U/mL的重組人IFN-γ和含有10%AB型人血清的PMI-1640培養液，孵育24 h后更換成含100 ng/mL小鼠抗人CD3單克隆抗體、1 000 U/mL的 IL-1 和IL-2 的RPMI-1640完全培養液繼續培養2 d后換含IL-2的完全培養液隔日換液維持培養。將培養到第7天的DC和CIK細胞按1∶5混合，制備DC-CIK細胞懸液。②DC-CIK細胞回輸：靜脈回輸5×109個/L的DC-CIK 細胞，每4次為1個療程，患者根據病情進行3～8個療程的治療。

1.4 觀察指標

比較2種方法的臨床治療效果，觀察患者治療前后的免疫功能和生活質量，觀察2組患者的不良反應的發生情況。①患者的臨床治療效果評價：按照RECIST 實體瘤近期療效評價標準[4]評價腫瘤的治療效果，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩定(SD)和疾病進展(PD)，總有效率=(CR+PR+SD)/總病例數。同時，每半年對患者進行一次電話隨訪，持續3年，記錄患者的生存期。②患者的免疫功能評價：治療前后分別抽取患者的外周血并提取單核細胞，使用流式細胞儀分析患者T細胞亞群、調節性T細胞及NK細胞變化，評價患者的免疫功能的變化。③患者的生活質量評價：患者生活質量評價采用KPS[5]評分，比較患者治療前后的生活質量的變化。④患者不良反應的發生：觀察患者有無出現肝腎功能的損害等嚴重并發癥，其他并發癥包括惡心嘔吐、發熱和乏力等。

1.5 統計學處理

2 結果

2.1 2種方法的臨床治療效果評價

2組患者RECIST 實體瘤近期療效評價結果具有統計學差異(Z=11.82,P<0.05)，觀察組患者的治療總有效率為80.05%，明顯高于對照組的56.41%(χ2=6.02,P<0.05)；2組患者的生存隨訪結果具有統計學差異(Z=15.32,P<0.05)，觀察組患者平均生存期為(23.8±7.4)個月，治療組為(14.9±3.3)個月，差異具有統計學意義(t=6.88,P<0.05)。見表1。

表1 2種方法的臨床治療效果評價(例，%)

2.2 患者治療前后的免疫功能和生活質量情況

經過治療后，2組患者的KPS評分較治療前明顯好轉(P<0.05)，觀察組患者治療后的免疫功能較治療前明顯好轉，具有統計學差異(P<0.05)。治療后觀察組患者的免疫功能和KPS評分明顯高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 患者治療前后的免疫功能和生活質量

注：*為與對照組比較，P<0.05；#為與治療前比較，P<0.05。

2.3 2組患者的不良反應的發生情況

2組患者均未發生嚴重的肝腎功能損害，部分患者出現較輕微的不良反應：觀察組5例(12.82%)患者出現不良反應，其中惡心嘔吐1例，發熱3例，乏力1例；對照組4例(10.26%)患者出現不良反應，其中發熱1例，乏力3例。2組患者的不良反應發生率無統計學差異(χ2=0.00，P>0.05)。

3 討論

研究表明，放療可以有效減少肝癌的腫瘤面積，改善患者預后，但由于肝癌細胞對放射線具有一定的抵抗作用，單純放療在肝癌治療中的效果并不理想[6]。隨著免疫學和細胞生物學的發展，DC-CIK生物免疫治療作為腫瘤的一種新型的腫瘤輔助治療的手段，受到了廣泛的關注。

本研究發現，觀察組患者的腫瘤控制效果、生存期和生活質量均明顯高于對照組，DC-CIK生物免疫治療聯合放療在肝癌的治療中療效較為顯著。這一結果與鐘國成等[7]的結果較為一致。此外，經過治療后，觀察組患者血中的CD3+和CD16+CD56+的T淋巴細胞明顯增加，CD4+/CD8+升高，患者的機體免疫功能較治療前明顯好轉。這一結果與DC-CIK生物免疫治療的機制密切相關。DC細胞與CIK細胞共同培養可活化2個細胞群體，使IL-2和IFN-γ的表達和分泌明顯升高。DC細胞分泌多種細胞因子可促進CIK細胞成熟，從而獲得腫瘤殺傷活性更強的DC-CIK細胞。當DC-CIK細胞回輸到患者體內后， CD3+CD56+的T細胞以MHC非限制機制殺傷殺滅體內肝癌細胞，而部分CD3+CD8+的T細胞和CD3+CD4+的T細胞則能特異性清除體內腫瘤細胞。同時成熟的DC細胞通過誘導T細胞的分化和活化NK細胞，可發揮免疫調節作用，增強患者的免疫力[8]。研究中，2組患者的不良反應發生率無明顯差異，患者均未發生嚴重的不良反應。觀察組不良反應以發熱為主，經過對癥治療后均明顯減輕。故聯合治療并不會明顯增加患者的不良反應，較為安全。綜上所述,DC-CIK生物免疫治療聯合放療治療肝癌的臨床療效較為顯著，患者不良反應發生率較低，值得推廣應用。

[1] 湯釗猷.提高肝癌療效的我見〔J〕.中華肝膽外科雜志,2010,16(8):561-562.

[2] 劉紅丹.三維適形放療在治療原發性肝癌中的研究進展〔J〕.實用癌癥雜志,2013,28(1):103-104.

[3] 王廣偉,顧元龍,劉敏豐,等.負載自身腫瘤裂解物的樹突狀細胞聯合殺傷細胞對肝癌患者術后免疫功能的影響〔J〕.中華普通外科雜志,2012,27(4):337-338.

[4] Jang GS,Kim MJ,Ha H,et al.Comparison of RECIST version 1.0 and 1.1 in assessment of tumor response by computed tomography in advanced gastric cancer〔J〕.Chin J Cancer Res,2013,25(6):689-694.

[5] 鄭 琳,郭晨陽,黎海亮,等.肝動脈化療栓塞聯合索拉非尼治療原發性肝癌〔J〕.中華消化外科雜志,2013,12(3):236-237.

[6] 張江洲.肝癌放療的應用進展〔J〕.實用癌癥雜志,2013,28(2):215-217.

[7] 鐘國成,張小玉,孫 薏,等.抗原致敏DC聯合CIK在原發性肝癌治療中的應用〔J〕.中國腫瘤臨床,2009,36(24):1404-1408.

[8] 孟冉冉,張躍偉,趙廣生,等.樹突狀細胞腫瘤疫苗抗腫瘤研究進展〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2012,19(20):1597-1600.