流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)急性髓細(xì)胞白血病微小殘留病的臨床價(jià)值

何正梅 陶善東 鄧 媛 于 亮

白血病屬于造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病,死亡率較高,臨床治療難度較大,急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)屬于白血病的一種常見類型[1]。近幾年研究發(fā)現(xiàn)微小殘留病(minimal residual disease,MRD)與白血病復(fù)發(fā)有緊密聯(lián)系，但其在人體內(nèi)分布和生存特點(diǎn)較為復(fù)雜,尤其是MRD增殖受機(jī)體免疫情況影響較大[2]。因此,準(zhǔn)確、快速檢測(cè)MRD成為了關(guān)注的熱點(diǎn)。我院采用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)對(duì)66例AML患者誘導(dǎo)化療前后的各亞型髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)和分析,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月至2013年6月我院收治的66例初治AML患者作為研究對(duì)象。所有患者均符合AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)(依據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)及免疫學(xué)確立診斷[3])。患者年齡為14～70歲,平均年齡為(37.22±8.33)歲,按照法美英(French-American-British,FAB)分型標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行分型,M2型40例,M3型18例,M4型6例,M5型2例。按照誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)患者臨床療效,將66例患者分為緩解組46例和未緩解組20例。選取我院同期收治的20例缺鐵性貧血患者骨髓作為對(duì)照組,其中男性9例,女性11例,年齡為14～72歲,平均年齡為(47.05±8.77)歲,髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率為(0.69±0.25)%。

1.2 方法

使用COULTER?EPICS?ALTRATM流式細(xì)胞儀(美國(guó))采用免疫熒光標(biāo)記法對(duì)白血病免疫表型進(jìn)行檢測(cè),單克隆抗體9種,包括MPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD34[5],均購(gòu)自美國(guó)Beckman-Coulter公司,采用CD45/SSC散點(diǎn)圖設(shè)門。細(xì)胞膜抗原陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：熒光陽(yáng)性細(xì)胞>20%；CD34、CD38和胞漿抗原陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：熒光陽(yáng)性細(xì)胞>10%；MRD陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：總陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組即為MRD陽(yáng)性[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄初診時(shí)與誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)AML患者各亞型髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)情況,比較誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)緩解組、未緩解組及對(duì)照組患者髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 AML患者初診時(shí)各亞型髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率比較

本組66例AML患者陽(yáng)性總表達(dá)率為(19.98±11.98)%,各亞型陽(yáng)性表達(dá)率由高到低依次為：M4、M2、M3、M5。各髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率由高到低依次為：MPO、CD13、CD117、CD33、HLA-DR、CD34、CD11b、CD15、CD14(表1)。

表1 AML患者初診時(shí)各亞型髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率比較/%

2.2 誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)緩解組與未緩解組患者各亞型髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率比較

本組66例AML患者誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)46例緩解、20例未緩解。緩解組髓系抗原陽(yáng)性總表達(dá)率為(10.50±10.49)%,各髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率由高到低依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、HLA-DR、CD117、CD34、CD14；未緩解組髓系抗原陽(yáng)性總表達(dá)率為(16.80±17.39)%,各髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率由高到低依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、CD34、HLA-DR、CD117、CD14(表2)。

表2 誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)2組患者各亞型髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率比較/%

2.3 誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)3組髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率比較

緩解組與未緩解組患者髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率分別為(10.50±10.49)%、(16.80±17.39)%，均顯著高于對(duì)照組的(0.69±0.25)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；緩解組患者髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于未緩解組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

白血病是以惡性克隆性增殖為特點(diǎn)的血液系統(tǒng)疾病,其抗原的表達(dá)具有很大的異質(zhì)性[7]。異常表達(dá)的抗原不僅在初發(fā)白血病細(xì)胞中能夠被檢測(cè)出[8]，在形態(tài)學(xué)完全緩解后殘存的白血病細(xì)胞和復(fù)發(fā)時(shí)的白血病細(xì)胞中也能夠保留其初發(fā)時(shí)的抗原異常表達(dá)特征[9]。因此,可以依據(jù)白血病細(xì)胞的這一克隆性增生的特征進(jìn)行微小殘留病灶檢測(cè),而確定特異性抗體組合是FCM檢測(cè)MRD的關(guān)鍵[10]。

研究表明單一抗原在檢測(cè)MRD中有較高臨床價(jià)值,但AML亞型多、免疫表型復(fù)雜,單一抗原或某一亞型難以準(zhǔn)確檢測(cè)MRD[11]。本研究對(duì)AML表型表達(dá)陽(yáng)性率較高的一組髓系CD抗原(MPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD34)[12]進(jìn)行AML患者各亞型MRD動(dòng)態(tài)檢測(cè)。結(jié)果顯示,初診時(shí)AML患者免疫表型陽(yáng)性總表達(dá)率為(19.98±11.98)%,誘導(dǎo)緩解化療后為(10.50±10.49)%。表明誘導(dǎo)化療具有顯著臨床效果,AML髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率隨治療時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸下降。另外,初診時(shí)AML患者各髓系抗原陽(yáng)性表達(dá)率由高到低依次為：MPO、CD13、CD117、CD33、HLA-DR、CD34、CD11b、CD15、CD14,誘導(dǎo)化療結(jié)束時(shí)緩解組依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、HLA-DR、CD117、CD34、CD14,未緩解組依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、CD34、HLA-DR、CD117、CD14,相互比較可知MPO、CD13、CD33總是排在前列,表明MPO、CD13、CD33是AML最有特異性的白細(xì)胞分化抗原[13]。

本研究緩解組患者髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于未緩解組,表明誘導(dǎo)化療能夠顯著改善AML患者M(jìn)RD陽(yáng)性情況；緩解組與未緩解組患者髓系抗原總陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于對(duì)照組,表明緩解組患者仍存在MRD陽(yáng)性,誘導(dǎo)緩解化療后患者雖處于細(xì)胞形態(tài)學(xué)持續(xù)緩解狀態(tài),但仍有較高水平殘存白血病細(xì)胞。可見緩解組患者尚未達(dá)到免疫學(xué)水平的緩解,需鞏固化療。也表明髓系特異性抗體組合對(duì)處于細(xì)胞形態(tài)學(xué)持續(xù)緩解狀態(tài)的MED殘留仍有較高敏感性。

總之,MRD是AML復(fù)發(fā)的主要因素,其水平高低對(duì)AML患者預(yù)后和復(fù)發(fā)有重要意義,利用上述9種單克隆抗體能夠較好地檢測(cè)MRD,臨床應(yīng)用價(jià)值較高。

[1] Fullmer A,O'Brien S,Kantarjian H,et al.Emerging therapy for the treatment of acute lymphoblastic leukemia〔J〕.Expert Opin Emerg Drugs,2010,15(1):1-11.

[2] 文莉莉.白血病微小殘留病檢測(cè)方法及臨床意義〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2008,35(15):3031-3033.

[3] 張之南，沈 悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)〔M〕.第3版.北京：科學(xué)出版社，2007：106-115.

[4] Grimwade D,Hills RK,Moorman AV,et al.Refinement of cytogenetic classification in acute myeloid leukemia:determination of prognostic significance of rare recurring chromosomal abnormalities among 5876 younger adult patients treated in the United Kingdom Medical Research Council trials〔J〕.Blood,2010,116(3):354-365.

[5] 顧沈陽(yáng),俞俊杰,劉亞東,等.全自動(dòng)圖像細(xì)胞法、熒光原位雜交法、流式細(xì)胞儀對(duì)膀胱腫瘤的診斷和意義〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2014,29(1):41-44.

[6] 丁 茜,陳建安,朱學(xué)海,等.流式細(xì)胞術(shù)分析急性髓細(xì)胞白血病免疫分型特點(diǎn)〔J〕.臨床合理用藥雜志,2012,5(15):108-109.

[7] Dicker F,Haferlach C,Sundermann J,et al.Mutation analysis for RUNX1,MLL-PTD,FLT3-ITD,NPM1 and NRAS in 269 patients with MDS or secondary AML〔J〕.Leukemia,2010,24(8):1528-1532.

[8] 田孝鵬,孫愛寧,李渭陽(yáng),等.多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病微小殘留在急性髓細(xì)胞性白血病誘導(dǎo)治療階段的臨床意義〔J〕.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,32(3):376-381.

[9] Metzeler KH,Maharry K,Radmacher MD,et al.TET2 mutations improve the new European LeukemiaNet risk classification of acute myeloid leukemia:a Cancer and Leukemia Group B study〔J〕.J Clin Oncol,2011,29(10):1373-1381.

[10] 李元媛,王慧君,秘營(yíng)昌.流式細(xì)胞技術(shù)在急性髓系白血病微小殘留病檢測(cè)中的應(yīng)用〔J〕.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,36(2):255-258.

[11] Thol F,Damm F,Lüdeking A,et al.Incidence and prognostic influence of DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia〔J〕.J Clin Oncol,2011,29(21):2889-2896.

[12] Peters JM,Ansari MQ.Multiparameter flow cytometry in the diagnosis and management of acute leukemia〔J〕.Arch Pathol Lab Med,2011,135(1):44-54.

[13] 侯麗雪,任翠愛,張 磊,等.流式細(xì)胞術(shù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)AML完全緩解后微小殘留病的臨床意義〔J〕.遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,35(1):14-18.