Fas－670基因多態性與青海地區乳腺癌臨床病理指標間的關系＊

黃 欣，胡 英△，王秀娟，金麗艷，張雙元

（1.青海大學醫學院實驗診斷教研室，西寧 810001；2.青海大學附屬醫院乳甲外科，西寧 810001）

Fas基因屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員［1］，是調控細胞凋亡的重要因子之一，與腫瘤的發生、發展關系密切［2］。Fas基因啟動子區670位點位于核轉錄元件GAS的結合位點（ATTCCAGAAA）［3］，在該位點發生 GA→GG的替換，可破壞轉錄因子STAT1的結合位點，影響Fas基因的表達，從而使死亡信號轉導通路失調而致細胞癌變［4］。在全球范圍內乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一［5－6］。本研究探討凋亡基因Fas－670的基因多態性與乳腺癌臨床病理指標的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月至2012年11月青海大學附屬醫院收治的330例女性乳腺癌（均經組織病理學確診）患者術前外周血5mL?；颊咝g前均未經化、放療。由于考慮到基因可能具有種族差異性剔除了非漢族患者資料，并剔除病理資料不全的患者資料后實際納入研究232例。患者年齡26～83歲，中位年齡47歲。TNM分期Ⅰ期14例，Ⅱ期128例，Ⅲ期62例，Ⅳ期9例，分期不明19例。

1.2 方法 采集乳腺癌患者術前肘靜脈抗凝血標本（EDTANa2抗凝）5mL，用血液基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技北京有限公司）提取外周血DNA，用聚合酶鏈反應－限制性片段長度多態性（PCR－RFLP）方法檢測Fas－670（rs1800682）基因型。引物序列參照文獻［6］由上海捷瑞生物工程有限公司合成。上游引物5′－ATA GCT GGG GCT ATG CGA TT－3′，下游引物5′－CAT TTG ACT GGG CTG TCC AT－3′。PCR反應體系25μL，含100ng模板DNA，10μmol／L上、下游引物各1 μL，12.5μL 2×Taq PCR Master Mix（天根生化科技北京有限公司），加ddH2O至25μL。反應條件：95℃預變性3min，94℃變性30s，退火溫度為57℃，72℃延伸30s，共30個循環后，72℃最終延伸10min。PCR產物片段大小為193bp；20 μL PCR產物用限制性核酸內切酶ScrFⅠ（紐英倫生物技術北京有限公司）于37℃孵育2h以上，酶切產物于2.5%瓊脂糖凝膠（溴化乙錠染色）電泳（70V，60min），利用凝膠成像系統觀察基因型。

1.3 統計學處理 應用SPSS13.0軟件進行統計學處理。以χ2檢驗分析Fas－670與青海地區乳腺癌臨床指標的關系。檢驗方法均為雙側檢驗，檢驗水準α＝0.05。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 基因型分析 Fas－670純合野生型AA產生1個193bp片段，純合突變型GG有1個ScrFⅠ酶切位點，產生136bp和57bp兩個片段，雜合型AG產生193、136和57bp 3個片段。見圖1。

圖1 PCR－RFLP檢測FAS－670基因多態性

2.2 基因型分布 232例乳腺癌中，Fas－670基因多態頻率分布：純合野生型AA為39.7%（92／232）、雜合型AG為48.7%（113／232）、純合突變型 GG 為11.6%（27／232）。其 Fas－670基因多態分布的頻率分布符合群體遺傳學Hardy－Weinberg平衡定律（χ2＝0.757，P＝0.384）。

2.3 Fas－670基因型與青海乳腺癌臨床指標的關系 見表1。

表1 Fas－670基因型與青海地區乳腺癌臨床指標的關系［n（%）］

3 討 論

細胞增殖與細胞凋亡之間的不平衡是腫瘤形成的基礎，Fas基因是調控細胞凋亡的重要因子之一。FasL與細胞表面的Fas結合，即可誘導靶細胞凋亡，而Fas／FasL介導的腫瘤細胞免疫逃逸機制有：（1）腫瘤細胞表達FasL，促進Fas高表達激活的T細胞凋亡，使腫瘤細胞產生免疫逃逸［7］，現已發現在乳腺癌、肺癌、肝癌、胃腸道腫瘤等多種腫瘤細胞高表達FasL。在機體抗腫瘤免疫應答時，活化的腫瘤特異性T細胞Fas表達增多［8］。（2）腫瘤細胞表面Fas表達缺失或下降，使腫瘤細胞凋亡受阻［9］，有研究表明乳腺癌Fas表達丟失和FasL過表達不僅參與了腫瘤的免疫逃逸和免疫耐受，還與腫瘤的浸潤密切相關［10］。（3）凋亡抑制基因（如Bcl－2等）出現高表達［11］。

Fas基因啟動區存在的Fas－670多態位點由于影響Fas基因表達，在腫瘤的發生、發展中顯得尤為重要。本研究主要探討凋亡基因Fas－670基因多態性與青海地區乳腺癌臨床病理指標的關系。

國內張柏林等［12］對840例乳腺癌患者和840例健康人進行病例對照研究 Fas（－1377G／A 和－670A／G）和 FasL基因（－844T／C和7896G／C）基因多態性對乳腺癌發病風險的影響，結果發現：攜帶Fas－1377A／－670A單體型者乳腺癌的發病風險高 于 攜 帶 Fas－1377G／－670A 單 體 型 者，但 是 攜 帶 Fas－1377G／－670G單體型者乳腺癌的發病風險則低于Fas－1377G／－670A單體型攜帶者，提示Fas－FasL系統的功能性遺傳多態性可能與乳腺癌的發病風險增加有關。Hashemi等［13］對伊朗134例乳腺癌患者和152例健康女性進行Fas－1377G／A（rs2234767）和－670A／G（rs1800682）基因多態性和乳腺癌的聯系的研究，發現Fas－1377G／A（rs2234767）基因多態分布在這兩組間并無顯著不同，而Fas－670A／G（rs1800682）基因多態性與乳腺癌的風險有顯著聯系（P＝0.019）。

由于Fas基因多態性與腫瘤發病風險的關系存有爭議，Zhang等［14］以34個已發表的病例對照研究為基礎，對11 461例癌癥患者和12 708例健康對照組用Meta法分析Fas兩個基因多態性與腫瘤發病風險的關系，結果顯示：Fas－1377AA基因型比－1377GG或GA／GG基因型有較高的腫瘤發病風險，而Fas－670GG基因型無影響。Knechtel等［15］對216例淋巴結陽性的乳腺癌婦女檢測包括Fas－1377和Fas－670的16例基因多態性的影響，單因素分析發現Fas－1377基因多態性與無病生存率和總生存率顯著相關，而Fas－670基因多態卻與無病生存率和總生存率無關聯。Crew等［16］在美國紐約研究1 053例乳癌患者和1 102例健康人Fas和FasL基因多態性與乳腺癌風險的關系發現，Fas－1377G／A、Fas－670G／A和 FasL－844C／T基因多態性與乳腺癌發病風險無顯著聯系，也沒有數據顯示基因多態性與年齡和雌激素水平等相關。本研究結果也未發現Fas－670基因多態性與青海地區女性乳腺癌患者的臨床分期及腫瘤大小等臨床病理指標有聯系。

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