紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的生物活性試驗

華勁松+歐陽朝輝

基金項目 四川省教育廳科研重點項目（2012ZA151）。

摘要測試了4種濃度的紫莖澤蘭提取液對煙青蟲的觸殺、胃毒和選擇性忌避作用等室內(nèi)生物活性。試驗結(jié)果表明，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的胃毒作用效果比較明顯，當(dāng)濃度大于6 g/L，處理48 h后，煙青蟲校正死亡率可達60%以上；選擇性忌避作用也較為明顯，濃度為10 g/L，處理48 h后，煙青蟲忌避率可達為53.33%；而在觸殺作用方面效果不太理想，作用較遲緩；對煙青蟲的生物活性強度均隨提取液濃度的增大和處理時間的延長而增強。

關(guān)鍵詞煙青蟲；紫莖澤蘭提取物；生物活性

中圖分類號S435.72文獻標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0115-02

煙青蟲（Helicoverpa assulta（Guenee））是煙草的一種重要害蟲，廣泛分布于我國各個煙區(qū)，嚴重影響煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量[1]。目前我國防治煙青蟲主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，而化學(xué)農(nóng)藥的長期使用，不僅導(dǎo)致煙青蟲天敵大量死亡，而且致使煙青蟲對多種農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，造成煙青蟲再度猖獗，同時化學(xué)農(nóng)藥的大量使用還會導(dǎo)致環(huán)境污染，增加煙葉中農(nóng)藥殘留，嚴重影響煙葉質(zhì)量。面對當(dāng)前化學(xué)農(nóng)藥使用產(chǎn)生的各種問題，植物源殺蟲劑以其對害蟲的獨特作用機制，不容易產(chǎn)生抗藥性，以及對天敵、人畜低毒、無殘留污染等優(yōu)點而成為國內(nèi)外研究的熱點。

紫莖澤蘭（Eupatouium adenophorum Spreng）為菊科澤蘭屬，多年生草本植物，原產(chǎn)于墨西哥，自20世紀40年代傳入我國，目前在云貴川等地已造成嚴重危害，是國家環(huán)保局公布的我國首批16種外來入侵性有害生物之一，其入侵性位居前列[2]，被稱為“生物癌癥”。隨著對紫莖澤蘭的化學(xué)成分、綜合利用研究的深入，紫莖澤蘭中含有殺蟲生物活性物質(zhì)已被證實，據(jù)報道，紫莖澤蘭提取物對螨蟲、菜青蟲、蚜蟲、倉儲害蟲等害蟲具有較好的毒殺作用[3-5]。為驗證將其應(yīng)用到煙青蟲防治上是否具有相同防治效果，筆者測定了幾種濃度的紫莖澤蘭提取液對煙青蟲的室內(nèi)生物活性，以探索其作為植物源殺蟲劑對煙青蟲的防治效果，并為紫莖澤蘭的開發(fā)利用和煙青蟲無公害防治提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試紫莖澤蘭采集于西昌市袁家山，取其地上部分陰干后用粉碎機進行粉碎，然后過40目篩，按乙醇∶紫莖澤蘭體積比約4∶1加入95%乙醇，浸泡約24 h，用布氏漏斗進行過濾，再重復(fù)浸泡5次，混合所有的浸提液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮直至提取物呈膏狀，且重量不再變化，稱重、密封，并進行低溫避光保存?zhèn)溆谩９┰嚐煵萜贩N為涼山州煙草公司提供的云煙85。供試煙青蟲采集于德昌縣麻栗鄉(xiāng)未噴過農(nóng)藥的煙田，將采回的煙青蟲卵放在培養(yǎng)皿中讓其孵化，飼養(yǎng)至3齡進行觸殺、胃毒和選擇性忌避試驗。幼蟲飼養(yǎng)及試驗的條件為：溫度為（25±2）℃，濕度為75%~80%，光照為16∶8（L∶D）。

1.2試驗方法

1.2.1提取液濃度設(shè)置。用少量甲醇將提取物溶解，待溶劑自然揮發(fā)干后，用含0.1%吐溫80的蒸餾水（測定胃毒作用時不加）將提取物稀釋成10、6、3、1 g/L等4種濃度作為供試藥液。

1.2.2觸殺作用測定。采用小型噴霧器噴霧法。取直徑為15 cm的玻璃培養(yǎng)皿，在其中放入1張中性濾紙，在上面滴幾滴清水用來保濕，接入健康活潑、生長發(fā)育一致的3齡幼蟲，每皿20頭，手持小型噴霧器對準幼蟲噴霧，每皿噴藥液約1 mL，以噴含0.1%吐溫80的蒸餾水為對照。在培養(yǎng)皿中放入1張新鮮幼嫩的煙葉供幼蟲取食，葉柄用浸水的脫脂棉包裹，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，用昆蟲針扎若干氣孔，于噴藥12、24、48 h后檢查死蟲數(shù)并計算死亡率和校正死亡率，每處理重復(fù)3次。判斷煙青蟲死亡以細毛筆觸及足和觸角等附肢時完全不動為死亡[6-8]。計算公式如下：

死亡率（%）=死蟲數(shù)/總蟲數(shù)×100

校正死亡率（%）=[（處理死亡率-對照死亡率）/（1-對照死亡率）]×100

1.2.3胃毒作用測定。取新鮮的煙草葉片，將葉柄剪整齊插入藥液中浸泡48 h后取出，用浸水的脫脂棉包裹葉柄放入直徑為15 cm的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿中先放1張中性濾紙，滴清水保濕，然后接入健康活潑、生長發(fā)育一致的3齡幼蟲（試驗前饑餓5 h），每皿20頭。對照葉柄浸蒸餾水。培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，并用昆蟲針扎若干氣孔。于12、24、48 h后檢查死蟲數(shù)并計算死亡率和校正死亡率，重復(fù)3次[9]。

1.2.4選擇性忌避作用測定。將新鮮的煙草葉片剪成直徑為7.5 cm的圓葉，用藥液涂抹葉片正、反兩面，待藥液晾干，煙葉表面形成藥膜后放入培養(yǎng)皿中，對照用含0.1%吐溫80的蒸餾水涂抹。每培養(yǎng)皿中放置2片煙草葉片，藥液和蒸餾水處理各1片。將3齡幼蟲接入培養(yǎng)皿中，每培養(yǎng)皿接蟲20頭，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，并用昆蟲針扎通氣孔，于12、24、48 h后檢查煙草葉片上煙青蟲棲息數(shù)量，并計算忌避率。每處理設(shè)重復(fù)3次。忌避率（%）=[（對照葉片棲息蟲數(shù)-處理葉片棲息蟲數(shù)）/（對照葉片棲息蟲數(shù)+處理葉片棲息蟲數(shù)）]×100。

2結(jié)果與分析

2.1紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺效果如表1所示。從表1可以看出，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲有一定的觸殺作用，但濃度較小時，觸殺效果不是很明顯，3、1 g/L濃度的紫莖澤蘭提取物噴藥48 h后，煙青蟲校正死亡率僅有16.96%、11.86%。同時，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺作用較慢，噴藥12 h后，4個濃度處理的煙青蟲死亡數(shù)都較少，但隨著處理時間的延長其觸殺作用持續(xù)增強，噴藥24 h和48 h后，各處理的煙青蟲死亡數(shù)增多，10、6 g/L濃度噴藥48 h后，煙青蟲校正死亡率分別達到55.91%、40.66%，各濃度處理之間差異達到極顯著水平。

2.2紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的胃毒作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲具有較強的胃毒作用（表2），即使1 g/L濃度處理，48 h后對煙青蟲也有明顯的胃毒作用，校正死亡率達21.43%。當(dāng)紫莖澤蘭提取物濃度大于6 g/L時，其校正死亡率可達60%以上；而且從處理煙青蟲后不同時間的校正死亡率還可以看出，隨著時間的延長，各濃度處理的校正死亡率都呈明顯上升趨勢，48 h后，10、6、3、1 g/L濃度的紫莖澤蘭提取物處理的校正死亡率分別比24 h時增加了24.29%~41.23%。

2.3紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的選擇性忌避作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲具有一定的選擇性忌避作用，其作用隨濃度的增大而增強（圖1）。48 h后，10、6、3、1 g/L濃度處理煙青蟲忌避率分別為53.33%、36.67%、6.67%、3.33%，各處理間差異達極顯著水平。同時，低濃度處理（1、3 g/L）對煙青蟲的忌避率隨著時間的延長呈逐漸下降的趨勢，高濃度處理（6、10 g/L）對煙青蟲的忌避率隨著時間的延長逐漸呈上升趨勢。由此可見，紫莖澤蘭提取物中含有對煙青蟲有驅(qū)避作用的物質(zhì)，在濃度大于6 g/L時，對其忌避效果較好。

3結(jié)論與討論

目前研究表明，植物源殺蟲劑對昆蟲的防治作用方式主要有觸殺作用、胃毒作用、忌避作用等[6]。本試驗結(jié)果表明，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的生物活性以胃毒作用效果最好，其次是選擇性忌避作用，在觸殺作用方面，雖然有一定的效果，但需要的濃度較大，時間較長。

目前大多數(shù)植物源農(nóng)藥研究還停留在粗提物和復(fù)配階段，對進一步的有效活性成分分析及殺蟲作用毒理研究較少。試驗中發(fā)現(xiàn)紫莖澤蘭提取物防治煙青蟲具有較好的效果，因此應(yīng)對其提取物中的活性物質(zhì)進行分離純化，以明確其有效成分及結(jié)構(gòu)，使其成為一種植物源殺蟲劑而被開發(fā)利用，為紫莖澤蘭綜合防治利用和煙草優(yōu)質(zhì)無害化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

4參考文獻

[1] 朱賢朝，王彥亭，王智發(fā).中國煙草病蟲害防治手冊[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2] 候太平，劉世貴.有毒植物紫莖澤蘭研究進展[J].國外畜牧學(xué)：草原與牧草，1998（4）：8.

[3] 李小平，胡學(xué)難，羅興毅.紫莖澤蘭提取液防治柑桔全爪螨田間藥效試驗[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1995（1）：48-49.

[4] 王一丁，高平，張其紅，等.紫莖澤蘭滅蚜活性物質(zhì)的分離、純化及其對棉蚜乙酰膽堿酯酶的影響[J].高技術(shù)通訊，2002（9）：21-23.

[5] 李云壽，鄒華英，佴注，等.紫莖澤蘭精油各餾份對4種倉庫害蟲的殺蟲活性[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，22（4）：331-333.

[6] 商顯坤，曾濤，曾憲儒.植物源農(nóng)藥對蚜蟲控制作用的研究概述[J].廣西植保，2009，22（4）：21-24.

[7] 商顯坤，韋德衛(wèi)，周興華，等.廣西4種外來入侵植物提取物對煙蚜的生物活性[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，39（6）：763-766.

[8] 商顯坤.鴉膽子提取物對煙蚜的生物活性研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，21（6）：1591-1594.

[9] 程麗坤，劉小俠，張青文，等.紫莖澤蘭提取物對美洲大蠊和米蛾的忌避活性[J].昆蟲知識，2007，44（4）：538-541.

基金項目 四川省教育廳科研重點項目（2012ZA151）。

摘要測試了4種濃度的紫莖澤蘭提取液對煙青蟲的觸殺、胃毒和選擇性忌避作用等室內(nèi)生物活性。試驗結(jié)果表明，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的胃毒作用效果比較明顯，當(dāng)濃度大于6 g/L，處理48 h后，煙青蟲校正死亡率可達60%以上；選擇性忌避作用也較為明顯，濃度為10 g/L，處理48 h后，煙青蟲忌避率可達為53.33%；而在觸殺作用方面效果不太理想，作用較遲緩；對煙青蟲的生物活性強度均隨提取液濃度的增大和處理時間的延長而增強。

關(guān)鍵詞煙青蟲；紫莖澤蘭提取物；生物活性

中圖分類號S435.72文獻標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0115-02

煙青蟲（Helicoverpa assulta（Guenee））是煙草的一種重要害蟲，廣泛分布于我國各個煙區(qū)，嚴重影響煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量[1]。目前我國防治煙青蟲主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，而化學(xué)農(nóng)藥的長期使用，不僅導(dǎo)致煙青蟲天敵大量死亡，而且致使煙青蟲對多種農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，造成煙青蟲再度猖獗，同時化學(xué)農(nóng)藥的大量使用還會導(dǎo)致環(huán)境污染，增加煙葉中農(nóng)藥殘留，嚴重影響煙葉質(zhì)量。面對當(dāng)前化學(xué)農(nóng)藥使用產(chǎn)生的各種問題，植物源殺蟲劑以其對害蟲的獨特作用機制，不容易產(chǎn)生抗藥性，以及對天敵、人畜低毒、無殘留污染等優(yōu)點而成為國內(nèi)外研究的熱點。

紫莖澤蘭（Eupatouium adenophorum Spreng）為菊科澤蘭屬，多年生草本植物，原產(chǎn)于墨西哥，自20世紀40年代傳入我國，目前在云貴川等地已造成嚴重危害，是國家環(huán)保局公布的我國首批16種外來入侵性有害生物之一，其入侵性位居前列[2]，被稱為“生物癌癥”。隨著對紫莖澤蘭的化學(xué)成分、綜合利用研究的深入，紫莖澤蘭中含有殺蟲生物活性物質(zhì)已被證實，據(jù)報道，紫莖澤蘭提取物對螨蟲、菜青蟲、蚜蟲、倉儲害蟲等害蟲具有較好的毒殺作用[3-5]。為驗證將其應(yīng)用到煙青蟲防治上是否具有相同防治效果，筆者測定了幾種濃度的紫莖澤蘭提取液對煙青蟲的室內(nèi)生物活性，以探索其作為植物源殺蟲劑對煙青蟲的防治效果，并為紫莖澤蘭的開發(fā)利用和煙青蟲無公害防治提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試紫莖澤蘭采集于西昌市袁家山，取其地上部分陰干后用粉碎機進行粉碎，然后過40目篩，按乙醇∶紫莖澤蘭體積比約4∶1加入95%乙醇，浸泡約24 h，用布氏漏斗進行過濾，再重復(fù)浸泡5次，混合所有的浸提液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮直至提取物呈膏狀，且重量不再變化，稱重、密封，并進行低溫避光保存?zhèn)溆谩９┰嚐煵萜贩N為涼山州煙草公司提供的云煙85。供試煙青蟲采集于德昌縣麻栗鄉(xiāng)未噴過農(nóng)藥的煙田，將采回的煙青蟲卵放在培養(yǎng)皿中讓其孵化，飼養(yǎng)至3齡進行觸殺、胃毒和選擇性忌避試驗。幼蟲飼養(yǎng)及試驗的條件為：溫度為（25±2）℃，濕度為75%~80%，光照為16∶8（L∶D）。

1.2試驗方法

1.2.1提取液濃度設(shè)置。用少量甲醇將提取物溶解，待溶劑自然揮發(fā)干后，用含0.1%吐溫80的蒸餾水（測定胃毒作用時不加）將提取物稀釋成10、6、3、1 g/L等4種濃度作為供試藥液。

1.2.2觸殺作用測定。采用小型噴霧器噴霧法。取直徑為15 cm的玻璃培養(yǎng)皿，在其中放入1張中性濾紙，在上面滴幾滴清水用來保濕，接入健康活潑、生長發(fā)育一致的3齡幼蟲，每皿20頭，手持小型噴霧器對準幼蟲噴霧，每皿噴藥液約1 mL，以噴含0.1%吐溫80的蒸餾水為對照。在培養(yǎng)皿中放入1張新鮮幼嫩的煙葉供幼蟲取食，葉柄用浸水的脫脂棉包裹，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，用昆蟲針扎若干氣孔，于噴藥12、24、48 h后檢查死蟲數(shù)并計算死亡率和校正死亡率，每處理重復(fù)3次。判斷煙青蟲死亡以細毛筆觸及足和觸角等附肢時完全不動為死亡[6-8]。計算公式如下：

死亡率（%）=死蟲數(shù)/總蟲數(shù)×100

校正死亡率（%）=[（處理死亡率-對照死亡率）/（1-對照死亡率）]×100

1.2.3胃毒作用測定。取新鮮的煙草葉片，將葉柄剪整齊插入藥液中浸泡48 h后取出，用浸水的脫脂棉包裹葉柄放入直徑為15 cm的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿中先放1張中性濾紙，滴清水保濕，然后接入健康活潑、生長發(fā)育一致的3齡幼蟲（試驗前饑餓5 h），每皿20頭。對照葉柄浸蒸餾水。培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，并用昆蟲針扎若干氣孔。于12、24、48 h后檢查死蟲數(shù)并計算死亡率和校正死亡率，重復(fù)3次[9]。

1.2.4選擇性忌避作用測定。將新鮮的煙草葉片剪成直徑為7.5 cm的圓葉，用藥液涂抹葉片正、反兩面，待藥液晾干，煙葉表面形成藥膜后放入培養(yǎng)皿中，對照用含0.1%吐溫80的蒸餾水涂抹。每培養(yǎng)皿中放置2片煙草葉片，藥液和蒸餾水處理各1片。將3齡幼蟲接入培養(yǎng)皿中，每培養(yǎng)皿接蟲20頭，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，并用昆蟲針扎通氣孔，于12、24、48 h后檢查煙草葉片上煙青蟲棲息數(shù)量，并計算忌避率。每處理設(shè)重復(fù)3次。忌避率（%）=[（對照葉片棲息蟲數(shù)-處理葉片棲息蟲數(shù)）/（對照葉片棲息蟲數(shù)+處理葉片棲息蟲數(shù)）]×100。

2結(jié)果與分析

2.1紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺效果如表1所示。從表1可以看出，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲有一定的觸殺作用，但濃度較小時，觸殺效果不是很明顯，3、1 g/L濃度的紫莖澤蘭提取物噴藥48 h后，煙青蟲校正死亡率僅有16.96%、11.86%。同時，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺作用較慢，噴藥12 h后，4個濃度處理的煙青蟲死亡數(shù)都較少，但隨著處理時間的延長其觸殺作用持續(xù)增強，噴藥24 h和48 h后，各處理的煙青蟲死亡數(shù)增多，10、6 g/L濃度噴藥48 h后，煙青蟲校正死亡率分別達到55.91%、40.66%，各濃度處理之間差異達到極顯著水平。

2.2紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的胃毒作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲具有較強的胃毒作用（表2），即使1 g/L濃度處理，48 h后對煙青蟲也有明顯的胃毒作用，校正死亡率達21.43%。當(dāng)紫莖澤蘭提取物濃度大于6 g/L時，其校正死亡率可達60%以上；而且從處理煙青蟲后不同時間的校正死亡率還可以看出，隨著時間的延長，各濃度處理的校正死亡率都呈明顯上升趨勢，48 h后，10、6、3、1 g/L濃度的紫莖澤蘭提取物處理的校正死亡率分別比24 h時增加了24.29%~41.23%。

2.3紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的選擇性忌避作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲具有一定的選擇性忌避作用，其作用隨濃度的增大而增強（圖1）。48 h后，10、6、3、1 g/L濃度處理煙青蟲忌避率分別為53.33%、36.67%、6.67%、3.33%，各處理間差異達極顯著水平。同時，低濃度處理（1、3 g/L）對煙青蟲的忌避率隨著時間的延長呈逐漸下降的趨勢，高濃度處理（6、10 g/L）對煙青蟲的忌避率隨著時間的延長逐漸呈上升趨勢。由此可見，紫莖澤蘭提取物中含有對煙青蟲有驅(qū)避作用的物質(zhì)，在濃度大于6 g/L時，對其忌避效果較好。

3結(jié)論與討論

目前研究表明，植物源殺蟲劑對昆蟲的防治作用方式主要有觸殺作用、胃毒作用、忌避作用等[6]。本試驗結(jié)果表明，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的生物活性以胃毒作用效果最好，其次是選擇性忌避作用，在觸殺作用方面，雖然有一定的效果，但需要的濃度較大，時間較長。

目前大多數(shù)植物源農(nóng)藥研究還停留在粗提物和復(fù)配階段，對進一步的有效活性成分分析及殺蟲作用毒理研究較少。試驗中發(fā)現(xiàn)紫莖澤蘭提取物防治煙青蟲具有較好的效果，因此應(yīng)對其提取物中的活性物質(zhì)進行分離純化，以明確其有效成分及結(jié)構(gòu)，使其成為一種植物源殺蟲劑而被開發(fā)利用，為紫莖澤蘭綜合防治利用和煙草優(yōu)質(zhì)無害化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

4參考文獻

[1] 朱賢朝，王彥亭，王智發(fā).中國煙草病蟲害防治手冊[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2] 候太平，劉世貴.有毒植物紫莖澤蘭研究進展[J].國外畜牧學(xué)：草原與牧草，1998（4）：8.

[3] 李小平，胡學(xué)難，羅興毅.紫莖澤蘭提取液防治柑桔全爪螨田間藥效試驗[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1995（1）：48-49.

[4] 王一丁，高平，張其紅，等.紫莖澤蘭滅蚜活性物質(zhì)的分離、純化及其對棉蚜乙酰膽堿酯酶的影響[J].高技術(shù)通訊，2002（9）：21-23.

[5] 李云壽，鄒華英，佴注，等.紫莖澤蘭精油各餾份對4種倉庫害蟲的殺蟲活性[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，22（4）：331-333.

[6] 商顯坤，曾濤，曾憲儒.植物源農(nóng)藥對蚜蟲控制作用的研究概述[J].廣西植保，2009，22（4）：21-24.

[7] 商顯坤，韋德衛(wèi)，周興華，等.廣西4種外來入侵植物提取物對煙蚜的生物活性[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，39（6）：763-766.

[8] 商顯坤.鴉膽子提取物對煙蚜的生物活性研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，21（6）：1591-1594.

[9] 程麗坤，劉小俠，張青文，等.紫莖澤蘭提取物對美洲大蠊和米蛾的忌避活性[J].昆蟲知識，2007，44（4）：538-541.

基金項目 四川省教育廳科研重點項目（2012ZA151）。

摘要測試了4種濃度的紫莖澤蘭提取液對煙青蟲的觸殺、胃毒和選擇性忌避作用等室內(nèi)生物活性。試驗結(jié)果表明，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的胃毒作用效果比較明顯，當(dāng)濃度大于6 g/L，處理48 h后，煙青蟲校正死亡率可達60%以上；選擇性忌避作用也較為明顯，濃度為10 g/L，處理48 h后，煙青蟲忌避率可達為53.33%；而在觸殺作用方面效果不太理想，作用較遲緩；對煙青蟲的生物活性強度均隨提取液濃度的增大和處理時間的延長而增強。

關(guān)鍵詞煙青蟲；紫莖澤蘭提取物；生物活性

中圖分類號S435.72文獻標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0115-02

煙青蟲（Helicoverpa assulta（Guenee））是煙草的一種重要害蟲，廣泛分布于我國各個煙區(qū)，嚴重影響煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量[1]。目前我國防治煙青蟲主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，而化學(xué)農(nóng)藥的長期使用，不僅導(dǎo)致煙青蟲天敵大量死亡，而且致使煙青蟲對多種農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，造成煙青蟲再度猖獗，同時化學(xué)農(nóng)藥的大量使用還會導(dǎo)致環(huán)境污染，增加煙葉中農(nóng)藥殘留，嚴重影響煙葉質(zhì)量。面對當(dāng)前化學(xué)農(nóng)藥使用產(chǎn)生的各種問題，植物源殺蟲劑以其對害蟲的獨特作用機制，不容易產(chǎn)生抗藥性，以及對天敵、人畜低毒、無殘留污染等優(yōu)點而成為國內(nèi)外研究的熱點。

紫莖澤蘭（Eupatouium adenophorum Spreng）為菊科澤蘭屬，多年生草本植物，原產(chǎn)于墨西哥，自20世紀40年代傳入我國，目前在云貴川等地已造成嚴重危害，是國家環(huán)保局公布的我國首批16種外來入侵性有害生物之一，其入侵性位居前列[2]，被稱為“生物癌癥”。隨著對紫莖澤蘭的化學(xué)成分、綜合利用研究的深入，紫莖澤蘭中含有殺蟲生物活性物質(zhì)已被證實，據(jù)報道，紫莖澤蘭提取物對螨蟲、菜青蟲、蚜蟲、倉儲害蟲等害蟲具有較好的毒殺作用[3-5]。為驗證將其應(yīng)用到煙青蟲防治上是否具有相同防治效果，筆者測定了幾種濃度的紫莖澤蘭提取液對煙青蟲的室內(nèi)生物活性，以探索其作為植物源殺蟲劑對煙青蟲的防治效果，并為紫莖澤蘭的開發(fā)利用和煙青蟲無公害防治提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試紫莖澤蘭采集于西昌市袁家山，取其地上部分陰干后用粉碎機進行粉碎，然后過40目篩，按乙醇∶紫莖澤蘭體積比約4∶1加入95%乙醇，浸泡約24 h，用布氏漏斗進行過濾，再重復(fù)浸泡5次，混合所有的浸提液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮直至提取物呈膏狀，且重量不再變化，稱重、密封，并進行低溫避光保存?zhèn)溆谩９┰嚐煵萜贩N為涼山州煙草公司提供的云煙85。供試煙青蟲采集于德昌縣麻栗鄉(xiāng)未噴過農(nóng)藥的煙田，將采回的煙青蟲卵放在培養(yǎng)皿中讓其孵化，飼養(yǎng)至3齡進行觸殺、胃毒和選擇性忌避試驗。幼蟲飼養(yǎng)及試驗的條件為：溫度為（25±2）℃，濕度為75%~80%，光照為16∶8（L∶D）。

1.2試驗方法

1.2.1提取液濃度設(shè)置。用少量甲醇將提取物溶解，待溶劑自然揮發(fā)干后，用含0.1%吐溫80的蒸餾水（測定胃毒作用時不加）將提取物稀釋成10、6、3、1 g/L等4種濃度作為供試藥液。

1.2.2觸殺作用測定。采用小型噴霧器噴霧法。取直徑為15 cm的玻璃培養(yǎng)皿，在其中放入1張中性濾紙，在上面滴幾滴清水用來保濕，接入健康活潑、生長發(fā)育一致的3齡幼蟲，每皿20頭，手持小型噴霧器對準幼蟲噴霧，每皿噴藥液約1 mL，以噴含0.1%吐溫80的蒸餾水為對照。在培養(yǎng)皿中放入1張新鮮幼嫩的煙葉供幼蟲取食，葉柄用浸水的脫脂棉包裹，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，用昆蟲針扎若干氣孔，于噴藥12、24、48 h后檢查死蟲數(shù)并計算死亡率和校正死亡率，每處理重復(fù)3次。判斷煙青蟲死亡以細毛筆觸及足和觸角等附肢時完全不動為死亡[6-8]。計算公式如下：

死亡率（%）=死蟲數(shù)/總蟲數(shù)×100

校正死亡率（%）=[（處理死亡率-對照死亡率）/（1-對照死亡率）]×100

1.2.3胃毒作用測定。取新鮮的煙草葉片，將葉柄剪整齊插入藥液中浸泡48 h后取出，用浸水的脫脂棉包裹葉柄放入直徑為15 cm的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿中先放1張中性濾紙，滴清水保濕，然后接入健康活潑、生長發(fā)育一致的3齡幼蟲（試驗前饑餓5 h），每皿20頭。對照葉柄浸蒸餾水。培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，并用昆蟲針扎若干氣孔。于12、24、48 h后檢查死蟲數(shù)并計算死亡率和校正死亡率，重復(fù)3次[9]。

1.2.4選擇性忌避作用測定。將新鮮的煙草葉片剪成直徑為7.5 cm的圓葉，用藥液涂抹葉片正、反兩面，待藥液晾干，煙葉表面形成藥膜后放入培養(yǎng)皿中，對照用含0.1%吐溫80的蒸餾水涂抹。每培養(yǎng)皿中放置2片煙草葉片，藥液和蒸餾水處理各1片。將3齡幼蟲接入培養(yǎng)皿中，每培養(yǎng)皿接蟲20頭，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，并用昆蟲針扎通氣孔，于12、24、48 h后檢查煙草葉片上煙青蟲棲息數(shù)量，并計算忌避率。每處理設(shè)重復(fù)3次。忌避率（%）=[（對照葉片棲息蟲數(shù)-處理葉片棲息蟲數(shù)）/（對照葉片棲息蟲數(shù)+處理葉片棲息蟲數(shù)）]×100。

2結(jié)果與分析

2.1紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺效果如表1所示。從表1可以看出，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲有一定的觸殺作用，但濃度較小時，觸殺效果不是很明顯，3、1 g/L濃度的紫莖澤蘭提取物噴藥48 h后，煙青蟲校正死亡率僅有16.96%、11.86%。同時，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的觸殺作用較慢，噴藥12 h后，4個濃度處理的煙青蟲死亡數(shù)都較少，但隨著處理時間的延長其觸殺作用持續(xù)增強，噴藥24 h和48 h后，各處理的煙青蟲死亡數(shù)增多，10、6 g/L濃度噴藥48 h后，煙青蟲校正死亡率分別達到55.91%、40.66%，各濃度處理之間差異達到極顯著水平。

2.2紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的胃毒作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲具有較強的胃毒作用（表2），即使1 g/L濃度處理，48 h后對煙青蟲也有明顯的胃毒作用，校正死亡率達21.43%。當(dāng)紫莖澤蘭提取物濃度大于6 g/L時，其校正死亡率可達60%以上；而且從處理煙青蟲后不同時間的校正死亡率還可以看出，隨著時間的延長，各濃度處理的校正死亡率都呈明顯上升趨勢，48 h后，10、6、3、1 g/L濃度的紫莖澤蘭提取物處理的校正死亡率分別比24 h時增加了24.29%~41.23%。

2.3紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的選擇性忌避作用

紫莖澤蘭提取物對煙青蟲具有一定的選擇性忌避作用，其作用隨濃度的增大而增強（圖1）。48 h后，10、6、3、1 g/L濃度處理煙青蟲忌避率分別為53.33%、36.67%、6.67%、3.33%，各處理間差異達極顯著水平。同時，低濃度處理（1、3 g/L）對煙青蟲的忌避率隨著時間的延長呈逐漸下降的趨勢，高濃度處理（6、10 g/L）對煙青蟲的忌避率隨著時間的延長逐漸呈上升趨勢。由此可見，紫莖澤蘭提取物中含有對煙青蟲有驅(qū)避作用的物質(zhì)，在濃度大于6 g/L時，對其忌避效果較好。

3結(jié)論與討論

目前研究表明，植物源殺蟲劑對昆蟲的防治作用方式主要有觸殺作用、胃毒作用、忌避作用等[6]。本試驗結(jié)果表明，紫莖澤蘭提取物對煙青蟲的生物活性以胃毒作用效果最好，其次是選擇性忌避作用，在觸殺作用方面，雖然有一定的效果，但需要的濃度較大，時間較長。

目前大多數(shù)植物源農(nóng)藥研究還停留在粗提物和復(fù)配階段，對進一步的有效活性成分分析及殺蟲作用毒理研究較少。試驗中發(fā)現(xiàn)紫莖澤蘭提取物防治煙青蟲具有較好的效果，因此應(yīng)對其提取物中的活性物質(zhì)進行分離純化，以明確其有效成分及結(jié)構(gòu)，使其成為一種植物源殺蟲劑而被開發(fā)利用，為紫莖澤蘭綜合防治利用和煙草優(yōu)質(zhì)無害化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

4參考文獻

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[2] 候太平，劉世貴.有毒植物紫莖澤蘭研究進展[J].國外畜牧學(xué)：草原與牧草，1998（4）：8.

[3] 李小平，胡學(xué)難，羅興毅.紫莖澤蘭提取液防治柑桔全爪螨田間藥效試驗[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1995（1）：48-49.

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[7] 商顯坤，韋德衛(wèi)，周興華，等.廣西4種外來入侵植物提取物對煙蚜的生物活性[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，39（6）：763-766.

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