豆瓣綠組織培養配方篩選研究

湯楷+鄭運歡+黃茜莉+郭英鐸

摘要以豆瓣綠葉柄基部、葉片為外植體，采用組培快繁技術，研究了6-BA及各種添加物對豆瓣綠的植株誘導、不定芽分化及生根培養的影響。結果表明：豆瓣綠的組織培養應選取葉柄基部為宜，誘導適宜培養基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；芽繼代增殖適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。

關鍵詞豆瓣綠；外植體；組織培養

中圖分類號Q813.1+2文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0171-02

豆瓣綠（Peperomia obtusifolia）又名豆瓣如意、四瓣金釵、椒草、翡翠椒草，屬胡椒科（Piperaceae）豆瓣綠屬（Peperomia），原產于西印度群島、巴拿馬、巴西和阿根廷等南美洲北部[1-2]。豆瓣綠是小型一年生或多年生常綠簇生草本植物，一般作為盆栽裝飾用，適用于室內觀賞[3-4]。藥用可以止咳祛痰，祛風除濕，外用可治跌打損傷、骨折。目前，豆瓣綠多用扦插和分株的方法進行繁殖，但這些方法苗體整齊度較差，增殖系數低，無法滿足規模化生產的需要。國內目前正開始逐步重視對胡椒科植物的組織培養工作并取得了一定的成績，但大部分還處于初步探索的階段，有關胡椒科植物組織培養的報道不多[5-7]。筆者于2010年開始對胡椒科豆瓣綠屬進行初步研究，本試驗以葉柄基部、葉片為外植體，對豆瓣綠的組培快繁技術進行初步研究，以滿足生產需要。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試材料：生長健壯、無病蟲危害的豆瓣綠植株。供試培養基：以MS（誘導培養和繼代培養）和花寶1號（繼代培養）作為基本培養基，試驗使用的培養基成分見表1。

1.2試驗方法

1.2.1外植體的處理。以葉柄基部、葉片為外植體，將葉片、葉柄用75%的酒精擦拭數遍，葉片切成1 cm2的方塊，切取葉柄基部約0.5 cm2的小段，再用10% NaClO2溶液消毒15 min，最后用無菌水沖洗5～8遍。

1.2.2芽誘導培養。以MS培養基為基礎培養基。將處理好的不同外植體分別接種于1#、2#培養基中。每種培養基15瓶，每瓶接1個外植體。接種1周后置于培養溫度為（25±2）℃、光照時間為 12 h/d、光照強度為800～1 000 lx的培養室中培養。分別在接種后15、30、45 d觀察生長狀況并進行記錄。

1.2.3繼代培養。在無菌條件下，將誘導出來的細小芽點分切成小塊，分別接入2#、3#培養基中進行繼代培養，每瓶培養基接3～4團并均勻擺放。培養環境條件同上。

1.2.4生根培養。取健壯的叢生苗，將其切成單苗，轉入4#、5#中進行生根培養，每瓶接種20株。接種后置于培養溫度為（25±2）℃、光照時間為12 h/d、光照強度為2 000～3 000 lx的培養室中培養。

1.2.5出瓶。接種后置于光照強度為5 000～6 000 lx的大棚中煉苗。經過煉苗，當根數達到4~5條、植株健壯時即可出瓶[8-9]。出瓶時，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。

2結果與分析

2.1不定芽的誘導

將不同外植體分別接入1#、2#培養基，結果見表2。從表2中可以看出接種15 d后，以葉柄基部為外植體在1#、2#培養基中已有部分膨大，而以葉片為外植體在1#、2#培養基中均無明顯變化或輕微褐化；接種30 d后，以葉柄基部為外植體1#、2#培養基中均已出現細小芽點，而以葉片為外植體1#、2#培養基中均還未出芽且褐化較為嚴重；接種45 d后，培養基1#、2#中的以葉柄基部為外植體的均能長出細小芽點，其中以2#培養基的芽點較多，而以葉片為外植體的則已全部褐化死亡，可見葉柄基部為豆瓣綠組織培養較好的外植體。

2.2繼代培養

接種35 d后觀察，2#、3#培養基中的細小芽點均已分化成苗（表3）。其中以3#為最多，但苗體較小、較弱，出現此種現象可能是由于增殖過于旺盛，經過多次分瓶后植株可以復壯。有時在經過多次繼代增殖后，少部分幼苗會有根系長出，出現此種現象可能與品種特性有關（圖1a）。

2.3生根培養

將無根苗打散接種于3#、4#培養基中，接種60 d后進行調查，其生根及生長狀況見表4。

由表4可知，4#及5#培養基都是適宜的生根壯苗培養基。但5#培養基中只使用的天然營養添加物而無需使用植物激素，成本較低，且植株生長狀況都比4#培養基好，因此5#培養基為適宜的生根培養基配方（圖1b）。

2.4出瓶

經過煉苗，當根數達到4~5條、植株健壯時即可出瓶。出瓶時，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。經過此方法，可使試管苗成活率達到100%。

3結論

試驗選用豆瓣綠的葉柄基部和葉片作為外植體，通過對比發現豆瓣綠的組織培養材料應選取葉柄基部為宜，且芽誘導階段適宜培養基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；在繼代增殖階段，其適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根壯苗階段適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。試驗結果表明，在繼代增殖階段和生根壯苗階段均采用天然營養添加物而不添加植物激素，既節約了生產成本，又縮短了成苗時間，為豆瓣綠的快速繁殖提供了新的途徑。

4參考文獻

[1] 蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，24（4）：43.

[2] 蘇平.豆瓣綠無病毒苗的培育及無土栽培[J].中國林副特產，2002，14（1）：46.

[3] 徐蘇，王明偉，李娜.草胡椒屬藥用植物研究進展[J].中草藥，2005，36（12）：1893-1896.

[4] 李文安，王玲.雙色豆瓣綠的快速繁殖[J].植物生理學通訊，1988，25（6）：43.

[5] 蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖[J].江蘇林業科技，1990，15（1）：14-15.

[6] 蔣雄輝，陳春滿，何蜜麗，等.荷葉椒草的組織培養和再生[J].植物生理學通訊，2008，44（3）：518.

[7] 李鳳蘭，劉榮梅，胡國富，等.五彩椒（Capsicumannuum L.）的組織培養研究[J].東北農業大學學報，2008，39（11）：62-65.

[8] 馬燕，程金水.豆瓣綠組織培養輻射誘變效果的初步研究[J].北京林業大學學報，1987，16（3）：325-331.

[9] 張瑞麟，范敏.西瓜皮椒草的組織培養及快速繁殖[J].植物生理學通訊，2002，38（1）：45.

摘要以豆瓣綠葉柄基部、葉片為外植體，采用組培快繁技術，研究了6-BA及各種添加物對豆瓣綠的植株誘導、不定芽分化及生根培養的影響。結果表明：豆瓣綠的組織培養應選取葉柄基部為宜，誘導適宜培養基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；芽繼代增殖適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。

關鍵詞豆瓣綠；外植體；組織培養

中圖分類號Q813.1+2文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0171-02

豆瓣綠（Peperomia obtusifolia）又名豆瓣如意、四瓣金釵、椒草、翡翠椒草，屬胡椒科（Piperaceae）豆瓣綠屬（Peperomia），原產于西印度群島、巴拿馬、巴西和阿根廷等南美洲北部[1-2]。豆瓣綠是小型一年生或多年生常綠簇生草本植物，一般作為盆栽裝飾用，適用于室內觀賞[3-4]。藥用可以止咳祛痰，祛風除濕，外用可治跌打損傷、骨折。目前，豆瓣綠多用扦插和分株的方法進行繁殖，但這些方法苗體整齊度較差，增殖系數低，無法滿足規模化生產的需要。國內目前正開始逐步重視對胡椒科植物的組織培養工作并取得了一定的成績，但大部分還處于初步探索的階段，有關胡椒科植物組織培養的報道不多[5-7]。筆者于2010年開始對胡椒科豆瓣綠屬進行初步研究，本試驗以葉柄基部、葉片為外植體，對豆瓣綠的組培快繁技術進行初步研究，以滿足生產需要。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試材料：生長健壯、無病蟲危害的豆瓣綠植株。供試培養基：以MS（誘導培養和繼代培養）和花寶1號（繼代培養）作為基本培養基，試驗使用的培養基成分見表1。

1.2試驗方法

1.2.1外植體的處理。以葉柄基部、葉片為外植體，將葉片、葉柄用75%的酒精擦拭數遍，葉片切成1 cm2的方塊，切取葉柄基部約0.5 cm2的小段，再用10% NaClO2溶液消毒15 min，最后用無菌水沖洗5～8遍。

1.2.2芽誘導培養。以MS培養基為基礎培養基。將處理好的不同外植體分別接種于1#、2#培養基中。每種培養基15瓶，每瓶接1個外植體。接種1周后置于培養溫度為（25±2）℃、光照時間為 12 h/d、光照強度為800～1 000 lx的培養室中培養。分別在接種后15、30、45 d觀察生長狀況并進行記錄。

1.2.3繼代培養。在無菌條件下，將誘導出來的細小芽點分切成小塊，分別接入2#、3#培養基中進行繼代培養，每瓶培養基接3～4團并均勻擺放。培養環境條件同上。

1.2.4生根培養。取健壯的叢生苗，將其切成單苗，轉入4#、5#中進行生根培養，每瓶接種20株。接種后置于培養溫度為（25±2）℃、光照時間為12 h/d、光照強度為2 000～3 000 lx的培養室中培養。

1.2.5出瓶。接種后置于光照強度為5 000～6 000 lx的大棚中煉苗。經過煉苗，當根數達到4~5條、植株健壯時即可出瓶[8-9]。出瓶時，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。

2結果與分析

2.1不定芽的誘導

將不同外植體分別接入1#、2#培養基，結果見表2。從表2中可以看出接種15 d后，以葉柄基部為外植體在1#、2#培養基中已有部分膨大，而以葉片為外植體在1#、2#培養基中均無明顯變化或輕微褐化；接種30 d后，以葉柄基部為外植體1#、2#培養基中均已出現細小芽點，而以葉片為外植體1#、2#培養基中均還未出芽且褐化較為嚴重；接種45 d后，培養基1#、2#中的以葉柄基部為外植體的均能長出細小芽點，其中以2#培養基的芽點較多，而以葉片為外植體的則已全部褐化死亡，可見葉柄基部為豆瓣綠組織培養較好的外植體。

2.2繼代培養

接種35 d后觀察，2#、3#培養基中的細小芽點均已分化成苗（表3）。其中以3#為最多，但苗體較小、較弱，出現此種現象可能是由于增殖過于旺盛，經過多次分瓶后植株可以復壯。有時在經過多次繼代增殖后，少部分幼苗會有根系長出，出現此種現象可能與品種特性有關（圖1a）。

2.3生根培養

將無根苗打散接種于3#、4#培養基中，接種60 d后進行調查，其生根及生長狀況見表4。

由表4可知，4#及5#培養基都是適宜的生根壯苗培養基。但5#培養基中只使用的天然營養添加物而無需使用植物激素，成本較低，且植株生長狀況都比4#培養基好，因此5#培養基為適宜的生根培養基配方（圖1b）。

2.4出瓶

經過煉苗，當根數達到4~5條、植株健壯時即可出瓶。出瓶時，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。經過此方法，可使試管苗成活率達到100%。

3結論

試驗選用豆瓣綠的葉柄基部和葉片作為外植體，通過對比發現豆瓣綠的組織培養材料應選取葉柄基部為宜，且芽誘導階段適宜培養基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；在繼代增殖階段，其適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根壯苗階段適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。試驗結果表明，在繼代增殖階段和生根壯苗階段均采用天然營養添加物而不添加植物激素，既節約了生產成本，又縮短了成苗時間，為豆瓣綠的快速繁殖提供了新的途徑。

4參考文獻

[1] 蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，24（4）：43.

[2] 蘇平.豆瓣綠無病毒苗的培育及無土栽培[J].中國林副特產，2002，14（1）：46.

[3] 徐蘇，王明偉，李娜.草胡椒屬藥用植物研究進展[J].中草藥，2005，36（12）：1893-1896.

[4] 李文安，王玲.雙色豆瓣綠的快速繁殖[J].植物生理學通訊，1988，25（6）：43.

[5] 蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖[J].江蘇林業科技，1990，15（1）：14-15.

[6] 蔣雄輝，陳春滿，何蜜麗，等.荷葉椒草的組織培養和再生[J].植物生理學通訊，2008，44（3）：518.

[7] 李鳳蘭，劉榮梅，胡國富，等.五彩椒（Capsicumannuum L.）的組織培養研究[J].東北農業大學學報，2008，39（11）：62-65.

[8] 馬燕，程金水.豆瓣綠組織培養輻射誘變效果的初步研究[J].北京林業大學學報，1987，16（3）：325-331.

[9] 張瑞麟，范敏.西瓜皮椒草的組織培養及快速繁殖[J].植物生理學通訊，2002，38（1）：45.

摘要以豆瓣綠葉柄基部、葉片為外植體，采用組培快繁技術，研究了6-BA及各種添加物對豆瓣綠的植株誘導、不定芽分化及生根培養的影響。結果表明：豆瓣綠的組織培養應選取葉柄基部為宜，誘導適宜培養基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；芽繼代增殖適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。

關鍵詞豆瓣綠；外植體；組織培養

中圖分類號Q813.1+2文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2014）11-0171-02

豆瓣綠（Peperomia obtusifolia）又名豆瓣如意、四瓣金釵、椒草、翡翠椒草，屬胡椒科（Piperaceae）豆瓣綠屬（Peperomia），原產于西印度群島、巴拿馬、巴西和阿根廷等南美洲北部[1-2]。豆瓣綠是小型一年生或多年生常綠簇生草本植物，一般作為盆栽裝飾用，適用于室內觀賞[3-4]。藥用可以止咳祛痰，祛風除濕，外用可治跌打損傷、骨折。目前，豆瓣綠多用扦插和分株的方法進行繁殖，但這些方法苗體整齊度較差，增殖系數低，無法滿足規模化生產的需要。國內目前正開始逐步重視對胡椒科植物的組織培養工作并取得了一定的成績，但大部分還處于初步探索的階段，有關胡椒科植物組織培養的報道不多[5-7]。筆者于2010年開始對胡椒科豆瓣綠屬進行初步研究，本試驗以葉柄基部、葉片為外植體，對豆瓣綠的組培快繁技術進行初步研究，以滿足生產需要。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試材料：生長健壯、無病蟲危害的豆瓣綠植株。供試培養基：以MS（誘導培養和繼代培養）和花寶1號（繼代培養）作為基本培養基，試驗使用的培養基成分見表1。

1.2試驗方法

1.2.1外植體的處理。以葉柄基部、葉片為外植體，將葉片、葉柄用75%的酒精擦拭數遍，葉片切成1 cm2的方塊，切取葉柄基部約0.5 cm2的小段，再用10% NaClO2溶液消毒15 min，最后用無菌水沖洗5～8遍。

1.2.2芽誘導培養。以MS培養基為基礎培養基。將處理好的不同外植體分別接種于1#、2#培養基中。每種培養基15瓶，每瓶接1個外植體。接種1周后置于培養溫度為（25±2）℃、光照時間為 12 h/d、光照強度為800～1 000 lx的培養室中培養。分別在接種后15、30、45 d觀察生長狀況并進行記錄。

1.2.3繼代培養。在無菌條件下，將誘導出來的細小芽點分切成小塊，分別接入2#、3#培養基中進行繼代培養，每瓶培養基接3～4團并均勻擺放。培養環境條件同上。

1.2.4生根培養。取健壯的叢生苗，將其切成單苗，轉入4#、5#中進行生根培養，每瓶接種20株。接種后置于培養溫度為（25±2）℃、光照時間為12 h/d、光照強度為2 000～3 000 lx的培養室中培養。

1.2.5出瓶。接種后置于光照強度為5 000～6 000 lx的大棚中煉苗。經過煉苗，當根數達到4~5條、植株健壯時即可出瓶[8-9]。出瓶時，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。

2結果與分析

2.1不定芽的誘導

將不同外植體分別接入1#、2#培養基，結果見表2。從表2中可以看出接種15 d后，以葉柄基部為外植體在1#、2#培養基中已有部分膨大，而以葉片為外植體在1#、2#培養基中均無明顯變化或輕微褐化；接種30 d后，以葉柄基部為外植體1#、2#培養基中均已出現細小芽點，而以葉片為外植體1#、2#培養基中均還未出芽且褐化較為嚴重；接種45 d后，培養基1#、2#中的以葉柄基部為外植體的均能長出細小芽點，其中以2#培養基的芽點較多，而以葉片為外植體的則已全部褐化死亡，可見葉柄基部為豆瓣綠組織培養較好的外植體。

2.2繼代培養

接種35 d后觀察，2#、3#培養基中的細小芽點均已分化成苗（表3）。其中以3#為最多，但苗體較小、較弱，出現此種現象可能是由于增殖過于旺盛，經過多次分瓶后植株可以復壯。有時在經過多次繼代增殖后，少部分幼苗會有根系長出，出現此種現象可能與品種特性有關（圖1a）。

2.3生根培養

將無根苗打散接種于3#、4#培養基中，接種60 d后進行調查，其生根及生長狀況見表4。

由表4可知，4#及5#培養基都是適宜的生根壯苗培養基。但5#培養基中只使用的天然營養添加物而無需使用植物激素，成本較低，且植株生長狀況都比4#培養基好，因此5#培養基為適宜的生根培養基配方（圖1b）。

2.4出瓶

經過煉苗，當根數達到4~5條、植株健壯時即可出瓶。出瓶時，用鑷子取出小苗，并用流水洗去培養基，移栽至已滅菌的水苔中并澆透水。經過此方法，可使試管苗成活率達到100%。

3結論

試驗選用豆瓣綠的葉柄基部和葉片作為外植體，通過對比發現豆瓣綠的組織培養材料應選取葉柄基部為宜，且芽誘導階段適宜培養基配方為：MS+6-BA 3.0 mg/L；在繼代增殖階段，其適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉25 g/L+馬鈴薯25 g/L+活性炭1 g/L；生根壯苗階段適宜培養基配方為：花寶1號30 g/L+香蕉50 g/L+馬鈴薯50 g/L+活性炭1 g/L。試驗結果表明，在繼代增殖階段和生根壯苗階段均采用天然營養添加物而不添加植物激素，既節約了生產成本，又縮短了成苗時間，為豆瓣綠的快速繁殖提供了新的途徑。

4參考文獻

[1] 蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，24（4）：43.

[2] 蘇平.豆瓣綠無病毒苗的培育及無土栽培[J].中國林副特產，2002，14（1）：46.

[3] 徐蘇，王明偉，李娜.草胡椒屬藥用植物研究進展[J].中草藥，2005，36（12）：1893-1896.

[4] 李文安，王玲.雙色豆瓣綠的快速繁殖[J].植物生理學通訊，1988，25（6）：43.

[5] 蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖[J].江蘇林業科技，1990，15（1）：14-15.

[6] 蔣雄輝，陳春滿，何蜜麗，等.荷葉椒草的組織培養和再生[J].植物生理學通訊，2008，44（3）：518.

[7] 李鳳蘭，劉榮梅，胡國富，等.五彩椒（Capsicumannuum L.）的組織培養研究[J].東北農業大學學報，2008，39（11）：62-65.

[8] 馬燕，程金水.豆瓣綠組織培養輻射誘變效果的初步研究[J].北京林業大學學報，1987，16（3）：325-331.

[9] 張瑞麟，范敏.西瓜皮椒草的組織培養及快速繁殖[J].植物生理學通訊，2002，38（1）：45.