河南農村肥胖成年人酪酪肽基因rs2880416位點多態性分析*

王 娟，衛 紅，趙景志，李琳琳，尹 磊，張功員#，劉衛剛，暴 磊

1)鄭州大學公共衛生學院流行病學教研室 鄭州 450001 2)河南司法警官職業學院法醫學教研室 鄭州 450001 3)河南省軍區直屬醫院體檢中心 鄭州 450003 4)河北工程大學附屬醫院統計室邯鄲 056002

肥胖是一種由多因素引起的慢性代謝性疾病，已成為全球性的公共衛生問題[1-2]。人群中肥胖患病率較高[3-5]，并且常與高血壓、糖尿病、高脂血癥等疾病危險因子在同一個體中聚集，導致心腦血管疾病的發生或加重。近年來，遺傳因素在肥胖發病機制中的作用備受關注。研究[6-8]發現食欲調節激素酪酪肽(peptide YY，PYY)與肥胖發生密切相關，PYY可通過與其受體結合，抑制促進食欲的神經元神經肽Y的分泌，從而抑制食欲，降低食物攝入，影響肥胖的發生發展。目前，關于PYY及其受體基因多態性與肥胖關系的研究在國外僅有個別報道[9-11]。在基于病例對照試驗原理的單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNP)與疾病關聯的研究中，SNP位點的選擇主要有參考文獻法和標簽SNP法，標簽SNP法用于較新的基因，并與其他基因存在較好的連鎖不平衡，具有提高工作效率的優點[12]。作者采用標簽SNP法，通過人類基因組計劃獲取中國人群PYY基因的SNP信息，并采用Haploview 4.2軟件按照基因頻率大于0.10，r2大于0.8的條件選擇了rs2880416位點。為了解我國農村成年人肥胖與PYY基因rs2880416位點多態性的相關性，作者進行了以下研究。

1 對象與方法

1.1 研究對象 根據《中國成人超重和肥胖癥預防控制指南(試行)》制定的超重、肥胖及腹型肥胖標準[13]，體重指數(BMI)為 18.5 ～ kg/m2為正常，24.0～kg/m2為超重，≥28 kg/m2為肥胖。抽取河南省某農村地區18歲以上符合條件的410名肥胖病例，同時選取生活在同一地區按性別、年齡匹配的非肥胖者410人作對照。

1.2 問卷調查和體格檢查 自行設計調查問卷，在研究對象知情同意的情況下，由統一培訓的調查員入戶調查并填寫調查表。調查內容包括年齡、性別、文化程度、職業、家庭月人均收入、婚姻狀況、體育鍛煉等情況。體育鍛煉強度分級:重度(包括登山、負重跑或快跑、騎快車等劇烈運動)，中度(包括慢跑、秧歌、跳舞、健身操、游泳、網球等運動)，輕度(包括散步、氣功、伸展運動等)，無(包括看電視、看書、吃飯等)。體格檢查包括測量身高、體重等，計算BMI、腰圍(WC)和腰圍身高比(WHTR)。

1.3 血液生化指標測定 由統一人員抽取每例研究對象10 mL血液，其中5 mL抗凝血用于提取人白細胞基因組DNA，－80℃分裝保存;另外5 mL用于生化指標的測定，包括空腹血糖(FPG)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。

1.4 PYY基因rs2880416位點多態性檢測 取1.5 mL EDTA-K2抗凝血液，采用血液DNA小量提取試劑盒(上海萊楓生物科技有限公司)提取DNA，進行PCR。采用 Primer 5.0軟件設計 PCR引物。rs2880416位點上游引物序列為5'-GAGGAGAAG GAGCAGAAGGA-3'，下游為 5'-CGTTTTACTTTGAAT GACTACTTGC-3'，產物大小354 bp，引物由金唯智生物科技(北京)有限公司合成。PCR反應體系15 μL，主要包括基因組 DNA 1.0 μL，上下游引物各0.25 μL，2 × Taq PCR PlusMaster Mix 7.5 μL，加離子水6 μL。PCR反應條件:94℃預變性5 min;94℃變性30 s，60 ℃退火40 s，72 ℃延伸 30 s，30 個循環;72℃延伸8 min;產物于4℃保存。PCR產物經常規限制性內切酶FspBI(Fermentas公司)酶切，酶切產物經40 g/L瓊脂糖凝膠電泳，判定結果。酶切后產生135和219 bp片段者為GG純合型，產生135、219、61和158 bp 4條片段者為 CG雜合型，產生135、61和158 bp 3條片段者為CC純合型。

1.5 統計學處理 采用SAS 9.1進行數據處理與分析。肥胖和非肥胖組各指標的比較采用兩獨立樣本的t檢驗或 χ2檢驗;采用 Haploview軟件進行Hardy-Weinberg平衡性檢驗，兩組 PYY基因rs2880416位點基因型頻率和等位基因頻率的比較采用χ2檢驗;應用logistic回歸模型對混雜因素進行調整后，分析不同突變模型下rs2880416位點多態性與肥胖的關系;檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 研究對象的基本特征 見表1。

表1 兩組一般資料的比較

續表1

2.2 PYY基因rs2880416位點多態性分析 肥胖和非肥胖組PYY基因rs2880416位點基因型頻率分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡(χ2=1.626、4.017，P=0.444、0.132)，提示樣本具有一定的人群代表性。兩組等位基因和基因型頻率分布差異均有統計學意義(表2)，肥胖組C等位基因頻率高于非肥胖組(P ＜0.001)。

2.3 PYY基因rs2880416位點多態性與河南農村成年人肥胖發病的關系 以體育鍛煉為調整因素，以肥胖為因變量(0=非肥胖，1=肥胖)，以頻率較低的等位基因C為突變基因，分別采用顯性模型、隱性模型及相加模型[14]對rs2880416位點多態性與肥胖的關系進行logistic回歸分析，結果見表3。從表3可以看出，無論哪種模型條件下，等位基因C均與河南農村成年人肥胖的發病有關。

2.4 肥胖組不同基因型攜帶者肥胖臨床特征的比較 肥胖組中rs2880416位點不同基因型攜帶者BMI、WC、WHTR的差異均無統計學意義，見表4。

表2 兩組PYY基因rs2880416位點基因型頻率和等位基因頻率分布的比較

表3 rs2880416位點基因型與肥胖的關聯性分析

表4 肥胖組不同基因型攜帶者肥胖臨床特征的比較

3 討論

多項研究表明，消化道遠端黏膜L細胞可分泌食欲調節激素PYY，PYY可調節食物攝入，與肥胖關系密切。Ma等[15]對83名極度肥胖的Pima印第安人進行基因測序，共選定14個SNP位點，并通過病例對照分析發現PYY及其受體Y2R基因的多態性均與肥胖顯著相關。作者選取了PPY基因rs2880416位點，探討了該位點與河南農村成年人肥胖易感性的關系，目前，國內外對該位點與肥胖關系的研究較少。

此次研究對象均為河南省某地區18歲以上的農村成年人，按照BMI分成肥胖組與非肥胖組，一般資料分析結果顯示，肥胖組BMI、WTHR、血糖、TC、TG等指標均高于非肥胖組，而HDL-C低于非肥胖組。總研究人群中PYY基因rs2880416位點表現出3種基因型，GG、CG和CC;肥胖和非肥胖組基因型頻率和等位基因頻率分布差異均有統計學意義，肥胖組C等位基因頻率為34.3%，顯著高于非肥胖組的18.4%，提示等位基因C可能為河南省農村成年人肥胖的危險因素。作者進一步采用logistic回歸分析法對PYY基因rs2880416位點多態性與肥胖的關系進行了分析，在調整體育鍛煉情況的基礎上，在顯性模型、隱性模型和相加模型中，C等位基因均增加了河南省農村成年人肥胖的患病風險。該研究中，肥胖組不同基因型攜帶者BMI、WC、WHTR的差異均無統計學意義，這可能與樣本量不大有關。

綜上所述，該研究結果提示，PYY基因rs2880416位點C等位基因可能是河南省農村成年人肥胖發生的危險因素。由于樣本含量的局限性，仍需對較大樣本及不同人群進行研究，對該推論加以驗證。事實上肥胖的發生是由多種基因共同作用所致。相關研究[10]表明，機體通過下丘腦的神經肽和黑皮質素兩大系統使得Y2R受體發揮重要的生理學作用，維持機體的代謝平衡;同時環境因素也起著至關重要的作用。因此，從多因素多角度進行分析能夠更全面地解釋肥胖的發生機制，為制定肥胖防治措施提供科學依據。

[1]孫獻周，郭影，申明慧，等.河南農村居民肥胖患病率與糖尿病、高血壓和血脂異常的關系[J].鄭州大學學報:醫學版，2010，45(3):488

[2]Wu Y.Overweight and obesity in China[J].BMJ，2006，333(7564):362

[3]Dietz WH，Robinson TN.Overweight children and adolescents[J].N Engl J Med，2005，352(20):2100

[4]趙軼雯，趙松濤，楊興華，等.健康體檢人群體重指數與血壓、血脂及血糖關系的研究[J].解放軍醫學雜志，2013，38(9):781

[5]姚宇航，鐘磊，劉宇赤，等.吉林省成年人超重和肥胖的流行病學特征及影響因素調查[J].吉林大學學報:醫學版，2013，39(5):1051

[6]Hung CC，Pirie F，Luan J，et al.Studies of the peptide YY and neuropeptide Y2 receptor genes in relation to human obesity and obesity-related traits[J].Diabetes，2004，53(9):2461

[7]Neary MT，Batterham RL.Gut hormones:implications for the treatment of obesity[J].Pharmacol Ther，2009，124(1):44

[8]Duca FA，Sakar Y，Covasa M.The modulatory role of high fat feeding on gastrointestinal signals in obesity[J].J Nutr Biochem，2013，24(10):1663

[9]Papadimitriou MA，Krzemien AA，Hahn PM，et al.Peptide YY(3-36)-induced inhibition of food intake in female monkeys[J].Brain Res，2007，1175:60

[10]Sileno AP，Brandt GC，Spann BM，et al.Lower mean weight after 14 days intravenous administration peptide YY3-36(PYY3-36)in rabbits[J].Int J Obes(Lond)，2006，30(1):68

[11]Rahardjo GL，Huang XF，Tan YY，et al.Decreased plasma peptide YY accompanied by elevated peptide YY and Y2 receptor binding densities in the medulla oblongata of dietinduced obese mice[J].Endocrinology，2007，148(10):4704

[12]陳客宏，曾靈，顧瑋，等.利用生物信息學技術挑選TLR2基因標簽單核苷酸多態性位點[J].基礎醫學與臨床，2010，30(3):242

[13]陳春明，孔靈芝，中華人民共和國衛生部疾病控制司.中國成人超重和肥胖癥預防控制指南[M].北京:人民衛生出版社，2006.

[14]胡曉抒，郭志榮，沈沖，等.抗原肽處理相關運載體637A/G多態與代謝綜合征的關聯性研究[J].中華流行病學雜志，2007，28(3):286

[15]Ma L，Tataranni PA，Hanson RL，et al.Variations in peptide YY and Y2 receptor genes are associated with severe obesity in Pima Indian men[J].Diabetes，2005，54(5):1598