電針環(huán)跳、委中穴對兔腰椎間盤突出癥的影響

封迎帥 ，劉百祥 ，張 亮 ，易受鄉(xiāng)，陽大為

（1.湖南省人民醫(yī)院中醫(yī)科針灸室，湖南 長沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410007）

電針環(huán)跳、委中穴對兔腰椎間盤突出癥的影響

封迎帥1，劉百祥1，張 亮2，易受鄉(xiāng)2，陽大為1

（1.湖南省人民醫(yī)院中醫(yī)科針灸室，湖南 長沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410007）

目的觀察電針環(huán)跳、委中穴對腰椎間盤突出癥(lumbar intervertebral disc protrusion，LIDP)家兔步態(tài)功能、髓核組織中腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)含量的影響。方法將40只健康新西蘭兔隨機分為4組，即空白組、LIDP模型組、電針穴位組和電針非穴對照組。自制的LIDP家兔病理模型造模器造家兔LIDP病理模型，采用Siegal法記錄步態(tài)功能，酶聯(lián)免疫吸附法測定髓核組織中TNF-α、IL-6含量。結(jié)果電針穴位組可改善家兔的步態(tài)功能，降低LIDP家兔髓核組織中TNF-α、IL-6的含量，與LIDP模型組、電針非穴對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論通過降低髓核組織中TNF-α、IL-6等炎癥因子含量減輕炎癥反應(yīng)可能是電針環(huán)跳、委中穴治療LIDP的作用機制之一。

腰椎間盤突出癥；電針；環(huán)跳穴；委中穴；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6；家兔

腰椎間盤突出癥 (lumbar intervertebral disc protrusion，LIDP)是臨床常見病、多發(fā)病，研究認(rèn)為電針療法可以改善或緩解腰椎間盤突出癥患者的腰腿疼痛、活動受限等癥狀，療效確切[1-2]，但是其具體的作用機制尚不明確。因此，本實驗在以前的研究基礎(chǔ)上選用環(huán)跳、委中穴，觀察電針環(huán)跳、委中穴對家兔實驗性LIDP的療效，從LIDP家兔的步態(tài)功能、髓核組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）表達的變化來探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 新西蘭健康家兔40只，由湖南省人民醫(yī)院臨床研究所實驗動物中心提供，合格證號：43006700002403，體質(zhì)量 1.5～2.1 kg，雌雄各半，每只分籠單獨圈養(yǎng)于湖南省人民醫(yī)院臨床研究所實驗動物中心第2實驗室。

1.1.2 主要儀器 蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn)的華佗牌針灸針(0.30×25 mm)，G6805-2電針儀。

1.1.3 主要試劑 TNF-α （批號：1404E11175）和IL-6（批號：1404G11056）的酶聯(lián)免疫試劑盒，均購自武漢新啟迪生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與造模 40只家兔完全隨機分為A：空白組，B：LIDP 模型組，C：電針穴位組，D：電針非穴對照組，每組各10只。除A組外其他3組家兔參照沈為棟研究的方法[3]將上頜竇穿刺針（直徑為1.6 mm）改成自制LIDP家兔病理模型造模器，建立實驗性LIDP家兔病理模型，造模后的家兔經(jīng)抽樣腰椎間盤CT檢測后判定造模成功。

1.2.2 穴位定位 穴位定位參照李忠仁主編的《實驗針灸學(xué)》常用動物穴位定位法，選取家兔患側(cè)環(huán)跳、委中穴。環(huán)跳：家兔股骨大轉(zhuǎn)子最高點與骶管裂孔連線的中外1/3交點處，環(huán)跳對照點設(shè)在環(huán)跳穴上2 cm（非穴位點）；委中：膝關(guān)節(jié)正后方凹陷，委中對照點設(shè)在委中穴內(nèi)側(cè)旁0.5 cm（非穴位點）。

1.2.3 治療方法 造模成功后，于第2天A、B組家兔每天固定于兔臺上20 min，不做任何處理，C、D組家兔定穴剪毛后消毒，用1寸的針灸針對準(zhǔn)消毒后的環(huán)跳、委中穴或非穴對照點處直刺1 cm左右，針刺后同側(cè)的環(huán)跳穴（環(huán)跳對照點）和委中穴（委中對照點）分別接在G6805-2型電針治療儀的一組輸出線上，選用疏密波，強度以后肢出現(xiàn)輕微顫抖為準(zhǔn)，電針時間為20 min，1次/d，連續(xù)處理10 d。第12天(即最后1次處理24 h后)所有家兔取材后進行各項指標(biāo)檢測。

1.2.4 標(biāo)本采集與處理 所有家兔用20%烏拉坦(4 mL/kg)麻醉后取材，耳緣靜脈注射空氣（40 mL）處死，取腰6～7椎間盤的髓核組織，用0.9%氯化鈉溶液沖洗殘留物后分析天平稱質(zhì)量，加入0.9%氯化鈉溶液 （2 mL/400 mg），用玻璃勻漿器研磨40～50次后制成髓核組織勻漿，在4℃下4 000 r/min離心10 min，取上清液，置于-20℃低溫保存，待測。

1.2.5 觀察指標(biāo) 肢體步態(tài)功能參照Siegal[4]報道的神經(jīng)功能標(biāo)準(zhǔn)對家兔進行步態(tài)評分即：0分：患肢全癱，無自主活動；1分：患肢半癱，有肌肉收縮及輕微關(guān)節(jié)運動；2分：患肢運動力量差，關(guān)節(jié)運動遲緩，行走不穩(wěn)定；3分：患肢僅有趾間關(guān)節(jié)運動障礙；4分：恢復(fù)正常運動。

1.2.6 檢測指標(biāo) 所有樣本均送到長沙新誠生物科技有限公司檢測，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法分別測定髓核組織中TNF-α、IL-6含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組家兔步態(tài)功能的比較

除了A組外其他的各組LIDP家兔造模后 （電針前）的步態(tài)積分值顯著低于造模前（P<0.01）；C組電針后的步態(tài)積分值均顯著高于電針前 （P<0.01），其他各組電針前、后的步態(tài)積分值比較均無統(tǒng)計學(xué)意義；C組的步態(tài)積分值的差值顯著高于A、B與D組（P<0.01），提示電針環(huán)跳、委中穴后LIDP家兔的步態(tài)功能明顯改善。見表1。

表1 各組家兔步態(tài)評分值的比較 （n=10，±s）

表1 各組家兔步態(tài)評分值的比較 （n=10，±s）

注：自身造模前后比較▲▲P<0.01；自身電針前后比較★★P<0.01；差值與C組比較##P<0.01。

組別A B C D造模前3.92±0.16 3.90±0.18 3.93±0.16 3.93±0.16造模后（電針前）3.61±0.11 1.95±0.44▲▲1.87±0.32▲▲1.91±0.20▲▲電針后3.97±0.07 2.20±0.43 3.75±0.54★★2.28±0.27差值（電針后-電針前）0.36±0.10##0.25±0.08##1.88±0.26 0.37±0.13##

2.2 各組家兔髓核組織中TNF-α、IL-6含量的比較

B、D組TNF-α和IL-6含量顯著高于A 組(P<0.01)，C組TNF-α和IL-6含量顯著低于B組與D組(P<0.01)；D組TNF-α和IL-6含量與B組比較無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05)，提示電針環(huán)跳、委中穴后對LIDP家兔髓核組織中TNF-α和IL-6表達有明顯抑制作用。見表2。

表2 各組家兔髓核組織中TNF-α、IL-6含量的比較（n=10，±s，pg/mL）

表2 各組家兔髓核組織中TNF-α、IL-6含量的比較（n=10，±s，pg/mL）

注：與A組比較**P<0.01；與B組比較△△P<0.01；與D組比較##P<0.01。

組別A B C D TNF-a 3.80±1.17 9.33±1.39**4.91±1.27△△##8.81±1.51**IL-6 7.31±1.68 22.87±6.71**8.87±1.25△△##16.06±5.15**

3 討論

在中醫(yī)學(xué)中沒有腰椎間盤突出癥這一病名，而是把LIDP歸屬于中醫(yī)的“腰腿痛”、“痹證”、“痿證”等范疇，認(rèn)為其發(fā)病主要與外力損傷，瘀血內(nèi)阻，或風(fēng)寒濕邪侵襲，或肝腎虧虛，腎氣不足等相關(guān)。研究認(rèn)為針灸可以改善LIDP局部血液循環(huán)和組織代謝，消除或減輕神經(jīng)根炎癥及水腫，從而減輕疼痛的作用[5]。環(huán)跳屬于足少陽膽經(jīng)穴位，也是足少陽膽經(jīng)與足太陽膀胱經(jīng)的交會穴；委中屬于足太陽膀胱經(jīng)的合穴，膀胱經(jīng)自腰背而來的兩條支脈，皆下行會于委中穴，根據(jù) “經(jīng)脈所過，主治所宜”的中醫(yī)治療原則，說明環(huán)跳、委中穴是治療LIDP的常用經(jīng)典穴位。

隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)LIDP患者腰腿疼痛的產(chǎn)生不僅僅是由機械壓迫引起的，其可能與突出椎間盤組織中的生物化學(xué)物質(zhì)如細(xì)胞因子TNFα、IL-6、IL-1α等對其產(chǎn)生的病理生理過程也有密切關(guān)系[6-7]。研究認(rèn)為TNF-α可能是LIDP患者神經(jīng)根性疼痛中重要的炎性介質(zhì)之一，一方面TNF-α能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶而損傷神經(jīng)，直接使神經(jīng)組織出現(xiàn)充血、水腫和血管擴張；另一方面它可刺激其它細(xì)胞產(chǎn)生致病物質(zhì)，加重突出椎間盤組織的局部炎性反應(yīng)[8-10]。細(xì)胞因子IL-6是LIDP中的重要的炎癥介質(zhì)，能誘導(dǎo)痛覺過敏，也是重要的炎癥促進劑，可以促進LIDP的炎癥過程[11]；同時IL-6是一種重要免疫因子，能促進突出椎間盤組織誘發(fā)免疫反應(yīng)，刺激腰椎間盤突出的局部神經(jīng)組織產(chǎn)生疼痛[12]。總之，細(xì)胞因子具有多種生物學(xué)功能，特別是TNF-α和IL-6作為重要的炎癥介質(zhì)在LIDP的病理過程中發(fā)揮重要作用[13-14]。

本研究通過觀察電針環(huán)跳、委中穴對LIDP家兔的療效，證實髓核組織局部的炎癥因子與LIDP的病情密切相關(guān)，這與國內(nèi)外文獻報道一致。電針非穴點并不能降低實驗性LIDP家兔髓核組織中TNF-α和IL-6含量，而只有作用于腧穴才能明顯降低其髓核組織中TNF-α和IL-6含量，說明電針環(huán)跳、委中穴對實驗性LIDP家兔有效，且對髓核組織局部的炎性因子的改善具有腧穴特異性，這亦可能是電針環(huán)跳、委中穴治療LIDP的機制之一，也進一步從分子水平揭示電針環(huán)跳、委中穴對實驗性LIDP家兔的炎性免疫機制。至于電針環(huán)跳、委中穴對LIDP的髓核組織局部的炎性免疫機制是如何調(diào)節(jié)的還有待進一步深入研究。

[1]楊宗保，易受鄉(xiāng)，封迎帥，等.電針環(huán)跳穴對腰椎間盤突出癥家兔髓核組織PGE-2、PLA-2和IL-1α的影響 [J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(3)：576-578.

[2]楊宗保，封迎帥，易受鄉(xiāng)，等.電針環(huán)跳穴對腰椎間盤突出癥坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(1)：202-204.

[3]沈為棟.腰椎間盤突出癥動物模型的建立及其病理機制的實驗與臨床研究[D].長沙：中南大學(xué)，2004：8-17.

[4]Siegal T，Siegal TZ，Shapira Y，et al.Indomethacin and dexamethasone trement in Experimental neoplasticspinalcordcompression[J].Neurosurgery，1988，22：328-329.

[5]胡追成，沈麗華，吳耀持.電針治療腰椎間盤突出癥療效觀察[J].上海針灸雜志，2010，29(11)：722-724.

[6]丁國良，李秀英，呂沐昕，等.IL-1、IL-6在腰椎間突出盤中的表達及臨床研究[J].重慶醫(yī)學(xué).2014，43(15)：1 919-1 922.

[7]姚 羽，張 烽.江大鼠髓核自身免疫反應(yīng)的研究[J].江蘇醫(yī)藥，2009，35(8)：931-933.

[8]朱 干，張盛強，黃 彪，等.腰椎間盤突出癥患者疼痛程度與TNF水平相關(guān)性研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，17(4)：8-9.

[9]Carrino JA，Lurie JD，Tosteson AN，et al.Lumbar spine：reliability of MR imaging findings[J].Radiology，2009，250(1)：161-170.

[10]Onda A， Yabuki S， Kikuchi S， et al.Effects of lidocaine on blood flow and endoneurial fluid pressure inarat model of herniated nucleus pulposus[J].Spine，2001，26(20)：2 186-2 192.

[11]Ma C，Greenquist KW，Lamotte RH.Inflammatory mediators enhancethe excitability of chronically compressed dorsal root ganglion neurons[J].Neurophysiol，2006，95(4)：2 098-2 107.

[12]Satoh K，Konno S，Nishiyama K，et al.Presence and distribution of antigen-antibody complexes in the herniated nucleus pulposus[J].Spine，1999，24(19)：1 980-1 984.

[13]Fayad F，Lefevre-Colau MM，Rannou F，et al.Relation of inflammatory modic changes to intradiscal steroid injection outcome in chronic low back pain[J].Eur Spine J，2007，16(7)：925-931.

[14]舒劍臣，唐小穗.P物質(zhì)、白介素6與腰椎間盤突出癥所致腰腿痛的相關(guān)性研究[J].中國骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2013，28(9)：825-827.

（本文編輯 匡靜之）

Effect of Electroacupuncture at Huantiao and Weizhong Point on Rabbits with Lumbar Interver Tebral Disc Protrusion

FENG Yingshuai1,LIU Baixiang1,ZHANG Liang2,YI Shouxiang2,YANG Dawei1
(1.Department of Chinese Acupuncture,Hunan Provincial People's Hospital,Changsha,Hunan 410005,China;2.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China)

ObjectiveTo observe the effects of electroacupuncture at Huantiao and Weizhong point on the walking function,tumor necrosis factor-α (TNF-α)and interleukin-6(IL-6)in rabbits with lumbar intervertebral disc protrusion(LIDP).MethodsForty healthy New Zealand rabbits were randomly divided into the blank,LIDP model,electroacupuncture at point and electroacupuncture at non-point groups.The LIDP pathologic models were induced by the self-manufactured instrument,the walking functions of the rabbits were recorded by Siegal method,the contents of TNF-α and IL-6 were measured by ELISA method. Results The walking function of rabbits in electroacupuncture at Huantiao and Weizhong points group were improved,the contents of TNF-α and IL-6 in nucleipulpous significantly decreased.Compared with modeland non-point control groups,the electroacupuncture group had significant differences(P<0.01).ConclusionOne ofthe mechanisms of electroacupuncture at Huantiao and Weizhong point for LIDP treatment could be by decreasing the TNF-α and IL-6.

lumbar intervertebral disc protrusion;electroacupuncture;Huantiao point;Weizhong point;tumor necrosis factor-α;interleukin-6;rabbits

R246.2

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.11.016.053.04

2013－10－09

湖南省中醫(yī)藥管理局資助項目（201378）。

封迎帥，女，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師，研究方向為針灸臨床和治病機制研究。