苯丁酸鈉對體外人肺腺癌細胞A549的影響

朱 瑩，張燦珍

(1.鄭州大學附屬鄭州中心醫院腫瘤科，河南 鄭州450007;2.云南省腫瘤醫院干療科，云南昆明650118)

苯丁酸鈉(sodium phenylbutyrate，PB)是一種廣譜的誘導分化新藥，在體外對多種實體腫瘤細胞均有抑制其腫瘤細胞生長的作用［1－3］。為探討PB對肺腺癌的作用，作者初步觀察了苯丁酸鈉對體外人肺腺癌細胞A549生長的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 人肺腺癌細胞A549的細胞株由云南省腫瘤研究所保存;RPMI-1640培養基、胎牛血清購自美國Gibco公司，MTT、PB分別購自美國Amresco公司、美國Alexis公司;流式細胞儀購自美國Beckman Coulter公司。人肺腺癌細胞A549用體積分數10%胎牛血清的RPMI-1640培養基，于37℃、體積分數5%CO2的培養箱中培養。

1.2 MTT法檢測細胞生長情況 將調整濃度后的人肺腺癌細胞A549的細胞懸液接種到96孔板上，待細胞完全貼壁，分組，每組4孔，重復3次。加培養基至空白孔中設為空白對照組;在空白孔中只培養細胞設為對照組;實驗組:培養細胞，并分別加入 4 000 μg·mL－1、2 000 μg·mL－1、1 000 μg·mL－1、500 μg·mL－1、250 μg·mL－1的 PB。分別作用 48、72、96 h 后每孔加入 20 μL 5 mg·mL－1的 MTT，終止培養后上酶標儀測定吸光度值(A值)，計算出抑制率，其中抑制率=(1－實驗組A值/對照組A值)×100%。

1.3 流式細胞術檢測細胞周期和凋亡的改變 搜集不同實驗組的人肺腺癌細胞 A549，用0.01 mol·L－1的PBS洗滌，離心，制成細胞懸液，加入5 μL雞血紅細胞;破膜、避光染色等處理后用流式細胞儀分析計算各周期細胞的百分率及細胞凋亡率。

1.4 統計學處理 采用SPSS 11.5進行數據分析，計量數據采用±s表示，比較用單因素方差分析，兩兩比較用SNK-q檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 MTT法檢測PB對肺癌細胞A549的增殖的抑制作用 見表1。

表1 PB作用后人肺腺癌細胞A549增殖抑制率比較 %

2.2 流式細胞術分析PB對人肺癌細胞A549的細胞周期和凋亡率的影響 見表2、3。

表2 PB作用48 h后人肺腺癌細胞A549的細胞周期和凋亡率的變化 %

表3 PB作用72 h后人肺腺癌細胞A549的細胞周期和凋亡率的變化 %

3 討論

本研究發現，PB在體外濃度低至250 μg·mL－1已對人肺腺癌細胞 A549產生明顯抑制作用，500 μg·mL－1PB在體外作用于人肺腺癌細胞A549 72 h以后，G0/G1期細胞明顯增加，而相應S期細胞減少，這提示PB對人肺腺癌細胞A549增殖的抑制作用可能原因是:腫瘤細胞周期的分布遭到改變，細胞向S期轉化受阻，從而致使多數腫瘤細胞停滯于G0/G1期，細胞內DNA合成和有絲分裂減少，促進腫瘤細胞的分化。PB通過活化腫瘤細胞內Bax和Bak等促凋亡蛋白，抑制p21、ras蛋白的異戊烯化及膽固醇的合成，誘導腫瘤細胞凋亡［4－7］。本研究發現，PB在體外能誘導人肺腺癌細胞A549的凋亡，凋亡率達9.3%，提示PB在體外抑制肺癌細胞的機制之一是誘導細胞凋亡。

以上研究結果表明，PB在體外對人肺腺癌細胞A549有明顯的增殖抑制作用，且能誘導其凋亡，這提示PB可用于肺癌的臨床治療，值得進一步研究。

［1］朱瑩，張燦珍，朱巖，等.苯丁酸鈉體外對YTMLC-90細胞生長的影響［J］.鄭州大學學報:醫學版，2010，45(3):493 －495.

［2］劉向光，黎禪玲，簡曉紅.苯丁酸鈉對SHG-44膠質細胞瘤株的抗腫瘤作用機制研究［J］.腫瘤藥學，2011，1(6):493 －496.

［3］Yu W，Wang J，Jin J，et al.Heat shock protein 90 inhibition results in altered downstream signaling of mutant KIT and exerts synergistic effects on Kasumi-1 cells when combining with histone deacetylase inhibitor［J］.Leuk Res，2011，35(9):1212 －1218.

［4］劉奇，陳德興，趙吉生.苯丁酸鈉對胃癌細胞株SGC-7901的增殖抑制作用［J］.中國老年學雜志，2012，32(22)4960 －4961.

［5］王迎春，楊旭，金青梅.苯丁酸鈉對人肝癌HepG2.2.15細胞凋亡及乙型肝炎病毒指標的影響［J］.臨床腫瘤學雜志，2013，18(11)，970 －973.

［6］羅曉華，許雅娟，崔金全，等.苯丁酸鈉對宮頸癌Hela細胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表達的影響［J］.中國婦幼保健，2011，26(4):604 －607.

［7］Kim H，Kim SN，Park YS，et al.HDAC inhibitors downregulate MRP2 expression in multidrug resistant cancer cells:implication for chemosensitization［J］.Int J Oncol，2011，38(3):807 － 812.