樹蘭的組織培養研究

王澤祺+李聆睿+張佳燕+杜瑤瑤+杜碧云+崔永一+夏國華

摘要：以樹蘭莖段為外植體，研究不同植物生長調節物質對其愈傷組織誘導、不定芽增殖及生根培養的影響。結果表明，莖段可同時誘導出愈傷組織、不定芽。愈傷組織誘導以NAA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.4 mg/L 效果最好，愈傷組織誘導率達24.44%；以NAA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.2 mg/L對不定芽的誘導效果最好；生根培養以1/2MS+NAA 1.0 mg/L+活性炭1.0 g/L+蔗糖25 g/L培養基最佳，生根率達93.06%。

關鍵詞：樹蘭；組織培養；莖段；不定芽

中圖分類號：S682.310.4+3；Q943.1 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0045-03

全球約有1 000多種樹蘭屬（Epidendrum）植物。樹蘭屬植物原產自厄瓜多爾，觀賞價值很高，具有花色繁多、花期長等特點，可作為園林地被植物或室內盆栽植物^[1-2]。目前國內關于樹蘭的繁殖技術還不成熟，一定程度上制約了樹蘭產業的發展。采用組織培養技術可以大大縮短樹蘭的培育時間^[3-11]。目前關于樹蘭組織培養的研究報道較多^[12-25]。筆者采用正交試驗研究樹蘭組織培養技術，快速生產樹蘭優良種苗，旨在為促進樹蘭產業化發展提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

樹蘭無菌苗莖段由浙江農林大學林學基礎試驗教學中心提供。

1.2 方法

1.2.1 不定芽、愈傷組織誘導 以1/2MS為基本培養基，采用正交試驗研究NAA、IBA、6-BA對樹蘭莖段不定芽及愈傷組織誘導的影響。NAA濃度分別設置為：0.5、1.0、1.5 mg/L；IBA濃度分別設置為：0.1、0.2、0.3 mg/L；6-BA濃度分別設置為：0.2、0.4、1.0 mg/L。將無菌苗莖段切成長約1.0 cm的小段接入誘導培養基中進行培養，每處理接種3瓶，每瓶接種10個莖段，60 d后觀測不定芽、愈傷組織的誘導情況，統計愈傷組織誘導率、不定芽誘導率。計算公式如下：愈傷組織誘導率=出愈苗數/接種數×100%；不定芽誘導率=出芽苗數/接種數×100%。

1.2.2 不定芽的增殖培養 以1/2MS為基本培養基，采用正交試驗方法研究NAA、IBA、6-BA對樹蘭莖段不定芽增殖的影響。NAA濃度分別設置為：0.1、0.2、0.5 mg/L；IBA濃度分別設置為：0.05、0.1、0.15 mg/L；6-BA濃度分別設置為：1、1.5、2 mg/L。將不定芽切成長1.0 cm的小段接入增殖培養基中進行培養，每處理接種3瓶，每瓶接種10個不定芽，60 d 后觀測不定芽的增殖情況，統計不定芽增殖率。計算公式如下：不定芽增殖率=不定芽數/接種數×100%。

1.2.3 生根培養 以1/2MS為基本培養基，研究NAA對樹蘭莖段不定芽生根的影響，NAA濃度分別設置為：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L。每處理都添加1.0 g/L的活性炭，分割增殖培養得到的不定芽，隨后接入生根培養基中，每處理接種3瓶，每瓶接種10個不定芽，培養60 d后統計生根數，計算生根率。計算公式如下：生根率=生根苗數/接種數×100%。

培養基均加入7 g/L瓊脂粉、25 g/L蔗糖，pH值5.8。培養基裝瓶后在121 ℃、0.14 MPa高溫高壓下滅菌20 min。接種材料后，在25 μmol/（m2·s）的光照下培養，每天光照時間13 h，培養溫度25 ℃左右，50～60 d 后結束試驗。

1.3 數據處理

采用PASW Statistics 18.0軟件進行Duncan多重比較。

2 結果與分析

2.1 愈傷組織、不定芽的誘導培養

取長約1.0 cm的樹蘭莖段平放接種在誘導培養基上，30 d 后部分莖段的兩端隆起，顏色由深變淺，出現愈傷組織，60 d后愈傷組織膨大，數量增加，呈淺綠色。由表1可知，不同濃度的NAA、IBA、6-BA組合對樹蘭莖段愈傷組織的誘導效果差異顯著，以NAA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.4 mg/L誘導效果最好，愈傷組織誘導率達到24.44%。 NAA濃度對樹蘭莖段愈傷組織誘導影響最大，IBA、6-BA對愈傷組織誘導影響相差不大，相比NAA影響略小。

不定芽不僅能誘導出愈傷組織，也會誘導出不定芽（圖1、圖2），各處理的不定芽誘導率都比較高，且差距不大，最低達65.56%，以NAA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.2 mg/L 對不定芽的誘導效果最好（表2）。6-BA濃度對樹蘭莖段不定芽誘導率的影響最大，其次是IBA濃度，NAA濃度對不定芽誘導率的影響最小。

2.4 試管苗移栽

樹蘭為附生蘭，選擇松樹皮作為移栽基質。組培苗在塑料大棚中進行煉苗，先密封放置2～3 d，再開蓋1/3放置2～3 d，最后將蓋子全部打開再放置2～3 d，整個過程用遮陽網作遮陰處理。隨后將幼苗從瓶中取出并沖洗干凈，在干燥的環境下放置12 h，然后進行移栽。先用熱水浸泡松樹皮，然后取出。移栽時在塑料花盆底下鋪較大的樹皮，上層用較細小的樹皮，樹蘭移栽后澆透水，接下來3 d停止澆水，防止爛根，后期根據樹皮的潮濕程度確定是否澆水，30 d后有新芽生長可確定成活，移栽成活率達90%以上（圖5）。

3 結論與討論

本研究表明，樹蘭部分莖段不僅誘導出了愈傷組織，同時大部分莖段還誘導出不定芽，愈傷組織誘導率最高達24.44%，不定芽誘導率最高達80%，這可能是由于樹蘭大部分誘導出不定芽，故影響了愈傷組織誘導率。NAA、IBA濃度較高不利于不定芽增殖。本試驗愈傷組織誘導率均不高，最高僅有24.44%，不定芽增殖的效率相比誘導愈傷組織更高，說明樹蘭莖段在一定條件下誘導不定芽比誘導愈傷組織更容易實現，對于快速繁殖來說，直接誘導不定芽更有意義。通過莖段誘導不定芽，對其進行增殖培養，為大量繁殖獲取不定芽提供了途徑，相對于先誘導原球莖再通過原球莖分化獲取不定芽的方法，本方法優化了獲取不定芽的效率及數量，大大提高了生產效率^[26-27]。不定芽生命力較強，誘導方便，增殖效率高，速度快，培養方便，只須誘導生根即可移栽成活，故取不定芽作為增殖材料對批量化生產樹蘭有重要意義。移栽時根據樹蘭特性，參考其他學者的研究成果，選擇透氣性好的樹皮作為基質，雖然移栽成活率較高，但是生長緩慢，冬季不易越冬，后期的栽培管理技術還有待進一步研究。

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