18種植物乙醇提取物對(duì)二斑葉螨的殺螨活性

邢燕燕+韓俊艷+劉廣純

摘要：采用室內(nèi)玻片浸漬法和葉片浸漬法對(duì)18種植物乙醇提取物進(jìn)行了二斑葉螨雌成螨和卵的觸殺活性測(cè)定。結(jié)果表明，紫茉莉、臭椿、雞爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜對(duì)雌成螨的生物活性較高，在10 mg/mL時(shí)，其72 h校正死亡率均為100%。根據(jù)初篩結(jié)果對(duì)這6種植物提取物進(jìn)行雌成螨和卵的毒力測(cè)定，都表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒力，其中對(duì)雌成螨的LC50依次為4.078、4.686、4.358、5.535、3.679、7.378 mg/mL，對(duì)卵的LC50在11.176～60.651 mg/mL之間。

關(guān)鍵詞：植物提取物；二斑葉螨；觸殺活性；校正死亡率；毒力

中圖分類號(hào)：S482.3+9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2014）08-0121-03

二斑葉螨（Tetranychus urticae）是一種危害嚴(yán)重的農(nóng)林業(yè)害蟲，在我國各地普遍存在。由于繁殖能力強(qiáng)、世代周期短，二斑葉螨在適宜的條件下種群可迅速擴(kuò)大，危害植物達(dá)150余種，嚴(yán)重影響其產(chǎn)量及品質(zhì)。對(duì)二斑葉螨的控制目前主要依賴于化學(xué)農(nóng)藥，但二斑葉螨的生物特性決定了它比其他害蟲更易對(duì)化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性^[1]。而且化學(xué)殺螨劑在殺滅害螨的同時(shí)，還會(huì)非選擇性的殺滅天敵及其他有益生物，破壞生態(tài)平衡，并會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生一定的負(fù)面影響。植物體內(nèi)含有一些黃酮類、生物堿類、苦楝素類、香豆素類等次生代謝物質(zhì)，這些次生代謝物質(zhì)與害蟲長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化來防御病蟲害對(duì)其自身的侵害，且這些殺蟲物質(zhì)是自然界中本來存在的物質(zhì)，對(duì)環(huán)境污染輕，對(duì)人畜健康安全；對(duì)害蟲作用較為緩慢，主要用于抑制害蟲種群增長(zhǎng)，符合IPM理論和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略。植物源殺螨劑的開發(fā)研制成為殺螨劑研究的一個(gè)熱點(diǎn)。筆者采集了15科18種植物，利用其乙醇提取物對(duì)二斑葉螨雌成螨和卵進(jìn)行室內(nèi)觸殺活性測(cè)定，為篩選植物源殺螨活性物質(zhì)進(jìn)而研制殺螨劑提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)所用植物材料均采于沈陽大學(xué)及其周邊綠地，共15科18種（表1）。將采集的植物材料洗凈、陰干，置于中草藥粉粹機(jī)中粉碎，過80目篩，密封，放入4 ℃醫(yī)用冷藏柜中備用。

二斑葉螨來自遼寧省城市有害生物治理與生態(tài)安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。飼養(yǎng)條件：智能人工氣候箱，溫度（25±1） ℃、相對(duì)濕度60%～65%，光照為16 h ∶8 h（L ∶D）。以雌成螨為試驗(yàn)用蟲。

1.2 方法

1.2.1 植物提取物的制備

取粉碎的植物材料各20 g置于錐形瓶中，以1 ∶10的比例加入無水乙醇，室溫下浸泡提取3次，每次3～5 d，抽濾，合并浸提液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得各植物材料提取物，計(jì)算提取率，并將各植物提取物配制成10 mg/mL的供試藥液，備用。

1.2.2 對(duì)二斑葉螨雌成螨的室內(nèi)觸殺活性測(cè)定

采用聯(lián)合國糧農(nóng)組織推薦的玻片浸漬法^[2]并稍加改進(jìn)：將雙面膠粘在載玻片的一端，用零號(hào)毛筆輕輕挑取體色相同、活潑的雌成螨，將其背部貼在雙面膠上，在解剖鏡下剔除受傷或粘得不合格的螨，最終使每個(gè)載玻片上有30頭雌成螨。將粘有雌成螨的載玻片的一端浸入供試藥液或空白對(duì)照溶液（1%吐溫80蒸餾水溶液和少量無水乙醇）中，使螨體完全浸入藥液，輕輕振蕩5 s，取出后迅速用吸水紙吸去螨體周圍多余藥液，然后將載玻片放在與上述飼養(yǎng)條件一致的智能人工氣候箱中培養(yǎng)。每隔24 h鏡檢1次，用毛筆輕觸螨體，螨足不動(dòng)者視為死亡，每處理重復(fù)3次。計(jì)算各試驗(yàn)組的校正死亡率。

1.2.3 對(duì)二斑葉螨卵的室內(nèi)觸殺活性測(cè)定

參照聯(lián)合國糧農(nóng)組織推薦的葉片浸漬法^[2]并有所改進(jìn)：將新鮮、生長(zhǎng)旺盛的葉片放在有一定厚度濕棉花的培養(yǎng)皿中，用零號(hào)毛筆分別向每張豆葉上挑取健康活潑的雌成螨10頭，為防害螨逃逸，用濕棉球和濕棉條將葉柄及葉片周邊圍好。將培養(yǎng)皿放在溫度為（25±1） ℃，相對(duì)濕度60%～65%的智能人工氣候箱中任其產(chǎn)卵4 h，在解剖鏡下剔除雌成螨和多余的卵，最終確保每張葉片上有30粒卵。將帶卵葉片浸入事先配制好的供試溶液及空白對(duì)照溶液中，輕輕晃動(dòng)5 s，取出晾干，放置在培養(yǎng)皿中，重新用濕棉條圍好，在與上述條件一致的人工氣候箱中培養(yǎng)。每天在棉花上加水保濕，每隔24 h在解剖鏡下觀察卵的孵化情況，記錄7 d，7 d內(nèi)未孵化的卵視為死亡，每處理重復(fù)3次。計(jì)算各試驗(yàn)組及對(duì)照組卵的孵化率。

1.2.4 6種植物提取物對(duì)二斑葉螨雌成螨和卵的毒力測(cè)定

將殺螨活性較好的植物提取物在初試的基礎(chǔ)上分別配制成12.8、6.4、3.2、1.6、0.8 mg/mL 5個(gè)質(zhì)量濃度不同的溶液，采用玻片浸漬法和葉片浸漬法對(duì)二斑葉螨的雌成螨和卵進(jìn)行毒力測(cè)定，確定6種植物提取物的殺螨毒力。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)根據(jù)Abbott公式^[3]計(jì)算校正死亡率，用Tukey test 進(jìn)行方差分析，按Probit分析法^[4]進(jìn)行線性回歸，計(jì)算毒力回歸方程、致死中濃度（LC50）及95%置信區(qū)間等。

2 結(jié)果與分析

2.1 18種植物乙醇提取物對(duì)二斑葉螨雌成螨和卵的觸殺活性

利用相似相容原理，采用冷浸法對(duì)18種植物材料在無水乙醇中進(jìn)行浸提。由表2可知，各植物材料提取率各不相同，其中牛膝菊的提取率最低，僅為5.1%，蘆薈的提取率最高，為29.75%，這主要與植物材料本身的性質(zhì)有關(guān)。通過對(duì)二斑葉螨雌成螨的觸殺結(jié)果可知，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，18種植物提取物對(duì)害螨的觸殺活性逐漸增強(qiáng)，處理24 h后蘆薈、臭椿、雞爪槭對(duì)害螨的校正死亡率超過了80%，處理72 h后紫茉莉、臭椿、雞爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜對(duì)雌成螨都表現(xiàn)出較強(qiáng)的觸殺活性，校正死亡率均達(dá)到了100%。對(duì)卵孵化率測(cè)定結(jié)果顯示，除紫蘇、紅蓼外，其他植物材料均對(duì)害螨的卵有一定的觸殺活性，只是對(duì)卵的觸殺活性沒有對(duì)雌成螨的觸殺活性強(qiáng)。

3 結(jié)論與討論

用乙醇浸提的18種植物提取物對(duì)二斑葉螨雌成螨和卵的觸殺結(jié)果表明，雞爪槭、臭椿、藜、紫茉莉、紫花地丁和牛膝菊這6種植物提取物對(duì)二斑葉螨的雌成螨和卵均具有較強(qiáng)的觸殺活性，其中臭椿提取物對(duì)二斑葉螨卵的觸殺活性最強(qiáng)，卵的孵化率僅為51.11%。雞爪槭、牛膝菊等6種植物提取物對(duì)二斑葉螨的毒力測(cè)定結(jié)果表明：6種植物提取物對(duì)二斑葉螨雌成螨均有較強(qiáng)的觸殺活性。臭椿提取物對(duì)二斑葉螨卵的毒力最高，其LC50為11.176 mg/mL。

植物源殺螨劑是環(huán)境友好型農(nóng)藥的發(fā)展方向，也是目前農(nóng)藥研制的熱點(diǎn)，韓俊艷等利用石油醚、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑對(duì)中草藥北細(xì)辛進(jìn)行浸提，并測(cè)定其對(duì)二斑葉螨雌成螨和卵的觸殺活性，發(fā)現(xiàn)北細(xì)辛甲醇提取物對(duì)害螨雌成螨和卵具有較好的觸殺作用^[5]。殺螨植物中的殺螨活性物質(zhì)一般可以直接利用，也可以將這些殺螨活性物質(zhì)作為殺螨先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行修飾合成，為進(jìn)一步研制此類農(nóng)藥新品種奠定基礎(chǔ)。在我國，鄒懷波等曾把中草藥姜黃中的活性成分姜黃素進(jìn)行修飾改造成姜黃素縮二，發(fā)現(xiàn)其對(duì)二斑葉螨觸殺效果較好^[6]。但是，目前對(duì)殺螨植物中活性成分分離鑒定的研究仍較少，大都集中在對(duì)殺螨植物的篩選與生物活性測(cè)定上。近年來，對(duì)臭椿皮提取物的研究較多，表明其氯仿提取物對(duì)人宮頸癌細(xì)胞、骨肉瘤細(xì)胞SAOS等有細(xì)胞毒作用^[7]；其水提取物腹腔注射對(duì)小鼠肉瘤S180和肝癌H22移植性腫瘤有較強(qiáng)的抑制作用^[8]；其醇提取物在抗病毒^[9-11]、抗炎^[12]、抑菌^[13]等方面有較好的抑制作用；此外，臭椿提取物在觸殺光肩星天牛^[14]、驅(qū)避米象、赤擬谷盜^[15]等儲(chǔ)糧害蟲方面也有較好的防治效果。目前還未有關(guān)于臭椿殺螨活性物質(zhì)的相關(guān)報(bào)道。因此，有必要進(jìn)一步開發(fā)植物資源，并進(jìn)行生物活性測(cè)定及殺螨活性物質(zhì)化學(xué)成分的分離、活性跟蹤及鑒定，為植物源殺螨劑的研制提供技術(shù)數(shù)據(jù)。

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