覆盆子活性部位化學成分的分離與鑒定△

劉文琴，龔嘉華，王燕霞，練波，黃麗萍，謝一輝

(江西中醫藥大學，江西 南昌 330006)

國家自然科學基金(30960496)

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謝一輝，教授，碩士生導師，研究方向：中藥活性成分分析，E-mail：243619851@qq.com；

黃麗萍，教授，碩士生導師，研究方向：中藥藥理學，E-mail：jxnchlp@163.com

覆盆子活性部位化學成分的分離與鑒定△

劉文琴，龔嘉華，王燕霞，練波，黃麗萍*，謝一輝*

(江西中醫藥大學，江西 南昌 330006)

目的分離鑒定覆盆子活性部位的化學成分。方法利用各種色譜技術進行分離，根據化合物的光譜數據(IR，MS，1H-NMR，13C-NMR)和物理化學方法鑒定其結構。結果分離并鑒定了6個化合物，分別為β-谷甾醇(1)，十六烷酸(2)，棕櫚油酸(3)，β-谷甾醇棕櫚油酸酯(4)，薔薇酸(5)，山柰酚(6)。結論其中棕櫚油酸和β-谷甾醇棕櫚油酸酯為首次從覆盆子中得到。

覆盆子；化學成分

覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子RubuschingiiHu的干燥果實，性溫，味酸、甘，歸肝、腎、膀胱經。具有益腎固精縮尿，養肝明目的功能，用于遺精滑精，遺尿尿頻，陽痿早泄，目暗昏花[1]。許多抗衰老古方中均含有覆盆子[2]。近年來有關藥理研究表明覆盆子具有抗誘變[3]、提高免疫[4]、延緩衰老、改善學習記憶能力等作用。本課題組在前期進行的藥效實驗表明，覆盆子具有較強的改善腎陽虛型衰老動物學習記憶的作用，其中三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的活性較強。為了進一步探索覆盆子的活性成分，本課題從三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位分離出8個化合物，鑒定了其中6個化合物，分別為β-谷甾醇(β-sitosterol，1)，十六烷酸(Sixteen Carbinate，2)，棕櫚油酸(Gaidic acid，3)，β-谷甾醇棕櫚油酸酯(β-Sitosterol gaidic acid ester，4)，薔薇酸(Euscaphic acid，5)，山柰酚(Kaempferol，6)。藥效實驗證實，3～6為覆盆子防治老年癡呆的活性成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

INOVA-500型核磁共振儀(內標TMS)，VGZAB-HS型質譜儀，X4型顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司)，IR紅外，DU-650紫外可見光譜儀(美國貝克曼公司)。

1.2 試藥

硅膠(青島海洋化工廠)，聚酰胺(浙江臺州路橋四甲生化塑料廠)，SephadexLH-20凝膠(Pharmacia公司)，其他試劑均為分析純。覆盆子藥材購于樟樹，經江西中醫藥大學劉慶華老師鑒定為懸鉤子屬植物華東覆盆子RubuschingiiHu的果實。

2 提取與分離

覆盆子藥材粉碎后，用80%乙醇滲漉，直至藥液基本無色，回收乙醇得浸膏。浸膏用水混懸，分別用三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。

2.1 三氯甲烷部分的分離與精制

取三氯甲烷部分上硅膠柱，三氯甲烷-甲酸乙酯梯度洗脫。用紫外檢測器監測流出峰，每個峰為1個流分，共收集洗脫液40個流分。濃縮各流分，用TLC比較，合并相似組分。流分18～22回收溶劑后重結晶得化合物1。流分6～17回收溶劑后，再用硅膠柱細分，三氯甲烷-甲酸乙酯梯度洗脫得化合物2。流分23～26回收溶劑后，再用硅膠柱細分，甲苯-甲酸乙酯梯度洗脫，分別得化合物3、化合物4。

2.2 乙酸乙酯部分的分離與精制

取乙酸乙酯部分上硅膠柱，分別用三氯甲烷-甲酸乙酯梯度和甲酸乙酯-丙酮梯度洗脫。用紫外檢測器監測流出峰，每個峰為1個流分，共收集洗脫液30份。濃縮各流分，用TLC比較，合并相似組分。流分17～27回收溶劑后，再用C18柱細分，甲醇-水梯度洗脫，流分3～4回收溶劑后得化合物5，流分6～8再過SephadexLH-20凝膠柱20%甲醇-水洗脫得化合物6。

3 結構鑒定

化合物1：白色針狀結晶(乙酸乙酯)，mp 136～138 ℃，Liebermann-Burchard 反應顯綠色，Molish反應陰性，表示有甾類化合物。將化合物與已知對照品混合，測熔點不下降，經已知對照品共薄層，在3種溶劑系統下展開，Rf值一致。13C-NMR所得數據與文獻[5-6]中報道β-谷甾醇基本一致。所以化合物1鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物2：白色粉末(三氯甲烷)，mp 68～70 ℃。易溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇。從1H-NMR可看出，1個活潑氫δ 11.95，1個甲基δ 0.84，14個亞甲基1.22和δ 2.16。13C-NMR顯示16個碳信號，δ 179.803為羧基，δ 14.143為甲基，其他碳信號依次為34.046，31.966，29.732，29.721，29.706，29.693，29.628，29.267，29.397，29.277，29.105，24.727，22.728。將其13C-NMR的數據與文獻報道的十六烷酸數據一致[7]。因此化合物2為十六烷酸(Exadecanioc acid)。

化合物3：白色無定型粉末(三氯甲烷)，mp 45～47 ℃?？扇苡谝颐选⑷燃淄椤⒁宜嵋阴?，微溶于甲醇。從1H-NMR可以看出，3個活潑氫，1個甲基，12個亞甲基。將其13C-NMR的數據跟十六烷酸比較，除顯示有雙鍵外，其他基本一致。IR 1 660 cm-1顯示有烯烴雙鍵峰，IR 650 cm-1顯示有烯氫。將該物質的碳譜數據與油酸(十八碳-順-9-烯酸)的碳譜數據比較，除少了2個碳信號外，其他信號皆一致。綜上所述，推斷化合物3為棕櫚油酸(Gadic acid)，為首次從覆盆子中得到。

化合物4：為白色無定型粉末(三氯甲烷)，mp 52～54 ℃。易溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇，乙酸乙酯，不溶于丙酮。Liebermann-Burchard反應顯陽性，Molish反應陰性，表示有甾類化合物。IR 1 738 cm-1處顯示有酯基，推斷該物質為酯類。碳譜數據顯示有45個碳原子，分別為179.87，34.17，29.88，29.47，29.58，29.66，29.66，32.15，130.23，129.94，32.15，29.82，29.88，29.82，24.79，14.34，140.9，121.97，72.10，56.99，56.28，50.35，46.06，42.54，42.37，40.00，37.46，36.72，36.37，34.26，32.13，29.92，29.88，29.82，28.47，26.30，24.79，24.79，22.91，21.31，19.61，19.26，19.00，14.34，12.08。該化合物碳譜信息為β-谷甾醇和棕櫚油酸碳譜信息的疊加。所以推斷化合物4為β-谷甾醇與棕櫚油酸所成的酯，即β-谷甾醇棕櫚油酸酯(β-Sitosterol gaidic acid ester)，為首次從覆盆子中得到。該化合物的結構如圖1所示。

圖1 β-谷甾醇棕櫚油酸酯化學結構

化合物5：為黃色粉末(甲醇)，mp 275～277 ℃?？扇苡诩状?，鹽酸鎂粉反應陽性，示為黃酮類化合物：三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性，示有酚羥基存在。該物質在甲醇溶液中的紫外最大吸收波長λmax為：209，254(帶II)，373(帶I)。根據帶I波長位置，提示可能為黃酮醇類物質。加入診斷劑AlCl3/HCl后帶I紅移56 nm提示有3位和5位羥基。將化合物與已知對照品混合，測熔點不下降，經已知對照品共薄層，在3種溶劑系統下展開，Rf值一致。1H-NMR和13C-NMR所得數據與文獻報道的山柰酚數據基本一致[8]。所以推斷化合物5為山柰酚(KaemPefrol)。

化合物6：為白色無定型粉末(甲醇)，mp 268～270 ℃。可溶于吡啶、三氯甲烷-甲醇、丙酮。在預制硅膠G板上點樣展開，30%硫酸加熱后顯紅色。1H-NMR、13C-NMR數據與文獻報道的薔薇酸一致[9-10]，數據如下：41.75，65.49，78.74，38.18，48.15，17.99，32.91，39.98，47.02，38.06，23.47，127.39，139.34，42.27，28.63，26.311，47.66，53.98，72.08，41.57，26.33，37.88，28.83，22.261，16.831，16.66，24.02，180.04，26.47，16.02。故推斷化合物6為薔薇酸(Euscaphic acid)。

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IsolationandIdentificationofChemicalConstituentsfromtheActiveSiteofRubuschingiiHu

LIUWenqin，GONGJiahua，WANGYanxia，LIANBo，HUANGLiping*，XIEYihui*

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang33004，China)

Objective：To isolate and identify the active chemical constituents ofRubuschingiiHu.MethodsVarious chromatographic techniques were used to isolate the chemical constituents，and their structures were identified by IR，MS，1HNMR，13CNMR，physical and chemical method.ResultsSix compouds were islolated fromR.chingiiand their structures were identified asβ-sitosterol(1)，Sixteen carbinate(2)，Gaidic acid(3)，β-Sitosterol gaidic acid ester(4)，Euscaphic acid(5)，Kaempferol(6).ConclusionCompound3and6were isolated fromR.chingiifor the first time。

Raspherry；RubuschingiiHu；Chemical constituents

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.006

2013-11-02)