噴霧干燥法制備鹽酸千金藤堿微囊

張壯麗，王陸巡，趙 寧，趙志鴻，王桂芳，張小俊

(鄭州大學醫藥科學研究院，河南鄭州 450052)

鹽酸千金藤堿 (Cepharantine Hydrochloride)是由防己科千金藤屬植物地不容塊根中提取分離出的單體生物堿—千金藤堿 (Cepharanthine)，經成鹽制得的一種雙芐基異喹啉類生物堿化合物。鹽酸千金藤堿具有逆轉腫瘤多藥耐藥性、抗氧化、抗炎、抑菌、鎮痛、免疫調節、抗肺纖維化、抗腫瘤、升高白細胞等生物學活性［1-6］。鹽酸千金藤堿目前僅注射劑一種劑型，劑型單一、給藥途徑單一、患者的順應性較差。藥物微囊化后可制備成多種終端劑型，如片劑、膠囊劑等，可增加給藥途徑，提高患者順應性，從而提高其藥用價值。噴霧干燥技術是藥物微囊化的一個有效方法，具有操作簡便、可控性好、成囊率高、產品分散等特點，是最具工業化應用價值的微囊化方法［7-9］。本實驗采用噴霧干燥法，將鹽酸千金藤堿進行微囊化，為鹽酸千金藤堿的新劑型開發提供實驗依據。

1 儀器與試藥

實驗型噴霧干燥機DC-1500(上海達程實驗設備有限公司);高效液相色譜儀P680A(美國戴安公司);78-1磁力加熱攪拌器 (金壇市華峰儀器有限公司);ABS135-S(METTLER TOLEDO);顆粒圖像處理儀PIP8.1(歐美克儀器有限公司);超聲波發生器CSF-1A(上海超聲波儀器廠);DSC-60A型差示掃描量熱儀 (日本島津公司)。

鹽酸千金藤堿 (自制，純度＞98.5%);Eudragit S100(德國羅姆公司;上海云卓貿易有限公司贈送);甲醇 (色譜純，賽默飛世爾科技);蒸餾水;其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 制備方法 取處方量的Eudragit S100溶于100 mL 95%乙醇中制得4%的溶液，將鹽酸千金藤堿溶于少量甲醇中，加入上述乙醇溶液中，加入適量甘油和蓖麻油，充分溶解后進行噴霧干燥。

2.2 色譜條件 Agilent TC-C18色譜柱 (250 mm×4.6mm，5 μm)，流動相為甲醇-水-氨水(84∶16∶0.2);檢測波長283 nm;體積流量0.5 mL/min;柱溫為室溫。

2.3 溶液的制備 取鹽酸千金藤堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成約200 μg/mL的對照品溶液。取鹽酸千金藤堿微囊約0.1 g，精密稱定，于100 mL量瓶中，加甲醇適量超聲1 h使其溶解，放至室溫，加甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液;以空白微囊按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.4 方法學考察［10］

2.4.1 專屬性試驗 分別吸取“2.3”項下的對照品、供試品和陰性對照品溶液各20 μL進樣，按“2.2”項色譜條件試驗。供試品溶液色譜圖中，有與對照品溶液保留時間相同的吸收峰，陰性對照溶液無此吸收峰。表明該法陰性無干擾，專屬性強。

2.4.2 線性關系考察 精密稱取鹽酸千金藤堿對照品適量，用甲醇配成101 mg/mL貯備液，精密吸取1、5、10、20、30、40、50 μL進樣，以峰面積為縱坐標、測定量 (μg)為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為:Y=23.379X － 113.55，(r=0.9999)。結果表明:在鹽酸千金藤堿0.101～5.05 μg間與峰面積有較好的線性關系。

2.4.3 加樣回收試驗 取已知含量的鹽酸千金藤堿微囊，分別加入一定量的鹽酸千金藤堿對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液。測得低、中、高質量濃度的樣品回收率分別為99.71%、100.94%、100.92%，RSD 分 別 為 2.23%、1.99%、1.88%(n=3)。

2.4.4 精密度和重復性試驗 取同一對照品溶液，重復進樣測定6次，計算RSD為0.38%。精密稱取6份同一供試品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液進行測定，計算RSD為0.22%。表明方法的精密度和重復性良好。

2.4.5 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、6、12、24、36、48、72h時進樣測定。計算RSD為2.21%(n=6)，表明鹽酸千金藤堿溶液72 h內穩定。

2.5 包封率及載藥量的測定 包封率 (%)=微囊中實際含藥量/實際投藥總量×100%;載藥量(%)=微囊中實際含藥量/微囊總重量×100%。按“2.3”項方法處理微囊，計算微囊包封率及載藥量。

2.6 制備工藝考察

2.6.1 單因素考察 以包封率為評價指標，對Eudragit S100溶液濃度及其芯材比例進行單因素考察。當Eudragit S100的濃度分別為2%、3%、4%、5%(100mL乙醇中 Eudragit S100的質量濃度)，按“2.1”項方法所制得微囊的包封率分別為46.3%、59.8%、72.4%、65.1%。當Eudragit S100的用量為4%時所制得的微囊包封率最高，外觀較好，呈干燥粉末狀，顯微鏡下觀察有大量微囊，大小較為均勻，故選定Eudragit S100的濃度為4%。選擇芯材比1∶3、1∶4、1∶5，分別進行噴霧干燥，得到的微囊進行包封率檢測，結果分別為59.47%、73.62%、66.16%，故選擇芯材比為1∶4。

2.6.2 正交試驗［11-12］在預實驗的基礎上，選擇進風口溫度 (A)、進液速度 (B)、噴霧壓強 (C)進行考察，各因素均確定為三個水平，以包封率為考察指標，選用L9(34)正交表安排試驗。因素水平見表1;結果及方差分析見表2、表3。

表1 正交試驗因素水平Tab.1 Factors and levels

表2 正交試驗結果Tab.2 Results of orthogonal design

表3 方差分析Tab.3 Results of variance analysis

方差分析結果顯示，各因素影響微囊包封率的順序是A＞B＞C，即進風口溫度＞進樣速度＞噴霧壓強，其中A、B二因素影響顯著。最佳工藝條件為A2B2C2，即進風口溫度140℃，進樣速度6 mL/min，噴霧壓強0.2 MPa。

2.7 驗證試驗 按正交試驗結果選定的最優噴霧干燥工藝進行3批驗證試驗。結果見表4。

表4 驗證試驗結果Tab.4 Results of verification test

由驗證試驗結果可知，3批樣品的產率、載藥量和包封率重復性較好，表明該處方和工藝可行，重現性良好。

2.8 形態及粒徑分布 肉眼觀測到的微囊為白色或乳白色粉末，呈疏松狀，流動性較好。顯微鏡下觀察，微囊外觀圓整、表面光滑，無黏連，測得平均粒徑為23.97 μm。見圖1。

圖1 微囊顯微鏡圖片 (400×)Fig.1 Micrograph of microcapsules(400×)

2.9 差示掃描量熱 (DSC)分析［13-14］分別取鹽酸千金藤堿、空白微囊、鹽酸千金藤堿與空白微囊物理混合物、鹽酸千金藤堿微囊適量，均以空Al2O3為參比，在加熱速率為10℃/min，加熱范圍為20～250℃，氮氣體積流量40 mL/min的條件下，分別測得各樣品的DSC曲線，以確定藥物在微囊中的分散狀態。結果見圖2。

圖2 DSC圖譜Fig.2 Differential Scanning Calorimetry(DSC)curves

3 討論

3.1 鹽酸千金藤堿味苦，原有劑型單一，給藥途徑單一，微囊化后不但可以掩味，而且可制備成多種終端劑型，豐富其給藥途徑，提高患者的順應性，方便臨床使用。

3.2 本實驗采用噴霧干燥法制備鹽酸千金藤堿微囊，以正交試驗法優選制備工藝，以微囊的收率、載藥量、包封率為指標，進行驗證試驗，證實了工藝穩定可行;對所得微囊進行了形態、粒徑和DSC考察，結果表明，優化的工藝適合鹽酸千金藤堿微囊的制備，為日后鹽酸千金藤堿新劑型的開發提供了實驗參考。

3.3 噴霧干燥法制備微囊，對工藝參數的考察十分重要。因本實驗中采用的噴霧干燥機其出風口溫度自動與進風口溫度匹配，因此，未考察出風口溫度。

3.4 由DSC圖譜可看出，鹽酸千金藤堿、Eudragit S100自身的特征峰在微囊中均消失，產生了微囊新特征峰，說明鹽酸千金藤堿與Eudragit S100不是簡單的物理混合，而是以新的相互結合的狀態存在，從而形成了微囊。

3.5 制備工藝中加入蓖麻油和甘油可起到良好的增塑作用，有效地減少黏壁和靜電吸附現象。

3.6 前期對鹽酸千金藤堿的溶解性考察發現，甲醇對鹽酸千金藤堿的溶解性好于乙醇，因此，在制備方法中，鹽酸千金藤堿先用少量甲醇溶解，再加入Eudragit S100的乙醇溶液中。

3.7 正交試驗的預實驗發現，包封率和產率基本呈現正相關的關系，載藥量范圍波動不大，因此，正交試驗中采用包封率為主要考察指標。為了更為全面地考察優選工藝的重現性，在驗證試驗中分別考察了產率、載藥量和包封率。

［1］彭有梅，王 寧，王亞峰，等.鹽酸千金藤堿逆轉K562/ADR細胞多藥耐藥性及其機制［J］.藥學學報，2012，47(5):594-599.

［2］馬 方，張 艷，王 寧，等.鹽酸千金藤堿對急性脂肪肝小鼠脂代謝及過氧化的影響［J］.中華中醫藥雜志，2011，26(6):1429-1432.

［3］王 曉，鄭立運，趙志鴻，等.鹽酸千金藤堿抗乙型肝炎病毒的體外實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2010，21(12):3109-3111.

［4］王曉麗，鄭立運，張 艷，等.鹽酸千金藤堿對急性肝損傷小鼠保護作用的研究［J］.中華中醫藥雜志，2009，24(10):1384-1387.

［5］吳冬梅，崔 英.鹽酸千金藤堿對鼻咽癌SUNE-1細胞生長抑制的觀察［J］.中華腫瘤防治雜志，2009，16(9):649-652.

［6］夏 薇，馬 方，江金花，等.鹽酸千金藤堿對環磷酰胺所致小鼠白細胞減少的治療作用［J］.鄭州大學學報:醫學版，2007，42(3):494-496.

［7］房信勝，王建華，穆象山，等.丹參素微囊的噴霧干燥法制備及其體外釋藥的研究［J］.中草藥，2009，40(11):1732-1735.

［8］沈 嵐，徐德生，馮 怡.噴霧干燥技術制備微囊的研究進展［J］.中成藥，2005，27(2):207-209.

［9］蔡鑫君，程巧鴛，趙 寧，等.噴霧干燥法制備川芎嗪殼聚糖微球的研究［J］.中草藥，2008，39(5):679-681.

［10］董娟妮，閆高穎，楊 洋，等.HPLC法同時測定樂脈膠囊中9種成分［J］.中成藥，2013，35(12):2644-2649.

［11］蔣益萍，張巧艷，張 宏，等.正交試驗優選五味子木脂素類成分的提取工藝［J］.中成藥，2013，35(11):2390-2394.

［12］楊振亞，盧丹逸，馬志國.正交試驗法優選沙蓯蓉提取工藝［J］. 中成藥，2014，36(1):177-179.

［13］呂慧俠，周建平，戴影秋，等.海藻酸鈣掩味微囊的制備［J］.中國藥科大學學報，2007，38(2):125-128.

［14］王 瑋，金鄰豫，白 穎，等.不同方法制備殼聚糖微囊形成機理初探［J］.河南大學學報:醫學版，2010，29(4):253-257.