合肥地區腹瀉兒童2011—2013年志賀菌、沙門菌屬菌群分布及耐藥性分析

劉紅娟，查 巍，祖 方

(安徽省兒童醫院檢驗中心，安徽合肥 230054)

急性腸道感染好發于2歲左右兒童，與成人相比較，病原菌的危害率更高。志賀菌、沙門菌屬感染引起細菌性痢疾、傷寒、副傷寒等相關性腹瀉，是全年都可發病的腸道傳染病，好發于夏秋季節，嚴重危害兒童健康，可造成電解質紊亂、營養不良，嚴重者出現休克癥狀。為了解合肥地區志賀菌、沙門菌屬以及各分離菌株對臨床常用抗菌藥物的耐藥情況，我們對2011—2013年腸道門診(時間為每年5月1日到10月31日)16 354例腹瀉患兒的糞便標本進行細菌血清型和耐藥性分析，現將菌屬鑒定結果及相應的藥敏實驗結果報道如下。

1 資料和方法

1.1 標本來源 收集2011—2013年間腸道門診腹瀉患兒糞便標本，患兒來自合肥市及附近周邊地區。

1.2 試劑 診斷血清購自寧波天潤生物藥業有限公司。六種藥敏紙片購自OXIDE公司。生化鑒定管購自杭州微生物試劑有限公司。麥康凱及M-H瓊脂平板購自生物梅里埃公司。

1.3 檢測方法 將糞便標本劃線接種于麥康凱瓊脂上，經36.5℃18～24 h孵育后挑選無色半透明的可疑菌落轉種血平板，再經36.5℃18～24 h孵育后，進行菌種生化鑒定，符合者做血清凝集試驗，同時以生理鹽水為陰性對照。

1.4 藥敏試驗 采用K-B紙片擴散法測定耐藥性。挑取孵育18～24 h后的單個菌落，用生理鹽水調制成0.5麥氏單位，接種 M-H瓊脂平板，貼藥敏紙片置36.5℃24 h，按NCCLS標準判斷。質控菌株為ATCC25922。

2 結果

2.1 沙門菌屬檢出率及菌型分布情況 2011—2013年腸道門診共有就診患兒16 354例，男女比例1.58∶1，最小的4 d，最大的13歲，沙門菌屬93株，檢出率逐年上升。具體見表1。經血清凝集試驗證實，B群沙門菌屬共51株(58.4%)，其中22株(43.1%)診斷為鼠傷寒沙門菌，其余各群分別為D群22株(23.7%)、C群16株(17.2%)、E群2株(2.2%)、A群2株(2.2%)，菌種各異。

2.2 福氏志賀菌、宋氏志賀菌檢出率及菌型分布情況 福氏志賀菌47株、宋氏志賀菌29株、未檢出鮑氏志賀菌、痢疾志賀菌。B/D1.62∶1，檢出率及菌型分布情況具體見表2。

2.3 沙門菌、志賀菌屬感染確診患者性別、年齡及分布特征169株病原菌(屬)感染者包括男性99例，女性70例，男女比例為1.41∶1。年齡最小的4 d，7～12月的嬰幼兒是主要的易感人群，占確診總數的53.3%。見表3。

2.4 沙門菌、志賀菌屬藥敏實驗結果 2011—2013年沙門菌屬對頭孢噻肟耐藥率呈逐年上升趨勢;福氏志賀菌對頭孢他啶呈逐年上升趨勢;宋氏志賀菌對復合磺胺呈逐年上升趨勢，頭孢他啶2013年增幅明顯;氯霉素三年耐藥率為0，見圖1～3。藥敏結果顯示兩種菌屬對頭孢他啶的耐藥率相對較低。2011至2013年各菌種對常用抗生素的耐藥情況并無明顯的增減趨勢。

表1 2011—2013年志賀菌屬、沙門菌屬檢出率%

表2 2011—2013年福氏志賀菌株、宋氏志賀菌株檢出數量

表3 確診患者不同年齡組感染病原菌(屬)的種類及數量

3 討論

志賀菌屬是引起細菌性痢疾的病原菌，其感染率一直高居甲、乙類法定傳染病前5位［1］。2011—2013年我院腸道門診細菌性痢疾檢出率無差異，與患兒總人數有關。但明顯低于本地區成人［2］。差異的來源主要是因為成人從事工作、社交活動范圍廣，接觸病原菌機會多有關，另外，也說明本地區嬰幼兒健康喂養、兒童保健有效。但引起嬰幼兒腹瀉的原因很多，有研究表明，輪狀病毒、致病性大腸埃希菌［3］導致的腹瀉高于由志賀菌、沙門菌屬。所以，傳統的糞便培養已不能滿足病原學變遷的要求，建議監測腸道傳染病的同時，有針對性的開展腸道病毒及其它病原學檢測，更準確地找到病因，及時治療。本次調查發現，2011—2013年沙門菌屬檢出率逐年增高，其中2013年最顯著，并且高于志賀菌屬檢出率，需要引起重視。各個地區和醫院分離的優勢菌群不同［4］，我院以B群鼠傷寒沙門菌為主，與報道一致［5］。7～12月嬰幼兒是主要的易感人群。因為此年齡段嬰幼兒來自母體的保護性抗體減少，而自身免疫系統發育尚未完善有關。沙門菌屬在自然界中分布廣泛，存在于水，多種動物和食品中，此年齡段嬰幼兒活動逐漸增多，喜好抓食等生活習慣，可能觸摸到被沙門菌屬污染的食物、玩具等，更容易引發相關性腹瀉有關。

圖1 2011-2013年福氏志賀菌對六種抗生素的耐藥率

圖2 2011-2013年福氏志賀菌屬對六種抗生素的耐藥率

圖3 2011—2013年宋氏志賀菌對六種抗生素的耐藥率

2011—2013年細菌性痢疾以福氏志賀菌感染為主，宋氏志賀菌次之，與文獻報道一致［6］。但隨著我國經濟發展，生活環境、飲食衛生條件不斷改善，流行的血清型規律發生著變化。宋氏志賀菌比福氏志賀菌抵抗力強，易耐受日常生活中使用的某些消毒劑［6］，經濟發達地區消毒劑使用頻率高，如對環境、飲水的消毒，導致宋氏志賀菌近年來檢出比例增長。北京市2007年起宋氏志賀菌逐漸成為優勢菌株［7］，歐洲發達國家宋氏志賀菌是主要的血清型且感染以兒童為主［8］。使用B/D群比值的變化能更好地反應衛生水平、傳播因素的變化，比值下降，提示衛生條件的改善［9］。從表2得出2011—2013年合肥地區兒童細菌性痢疾感染B/D比值逐年升高，盡管總檢出率為0.46%。也應加強嬰幼兒食品安全、公共衛生監管工作，保護易感人群，防止病從口入。

藥敏結果顯示，福氏志賀菌、沙門菌屬耐藥率逐年上升。志賀菌R質粒介導的多重耐藥性［10］是導致對氨芐西林、復合磺胺、氯霉素呈高度耐藥的主要原因。治療時不能作為首選藥物。宋氏志賀菌耐藥率低于福氏志賀菌，以往宋氏志賀菌引起的疾病較少，將質粒傳給它的機會也少，是造成其耐藥率低的原因之一。差別以氯霉素尤為突出，其原因須進一步探究。另外，宋氏志賀菌2012—2013年檢出率低，也是導致結果差異較大的原因。喹諾酮類雖被列為治療志賀菌的首選藥物［11］，但有專家認為對兒童的關節軟骨發育有影響，限制其在兒童中的應用。頭孢類抗生素副作用少，被臨床廣泛使用，但其耐藥率也在逐年上升。從結果看出，福氏志賀菌、宋氏志賀菌對頭孢噻肟耐藥率高，可能是志賀菌接合了產ESBLs基因，該基因對頭孢噻肟水解能力強［12］。盡管頭孢他啶耐藥率低，但三年來耐藥有逐漸增高的趨勢，須引起重視。所以，在面對抗生素選擇性強大壓力下，既要防止抗生素的濫用，也要注意某類抗生素的使用強度［13］，做好耐藥菌的檢測工作，才能減少耐藥菌株產生。

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