脂氧素A4對顱腦損傷伴失血性休克心肌損傷保護作用的實驗研究

王 麗，張煥麗，王華偉，李 瑞

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）病情兇險、并發癥多見，是臨床上常見的危重癥之一，救治難度大，預后較差，而過度炎癥反應是引起機體二次損傷的重要原因［1，2］。在 TBIS 進展過程中，心肌的損傷對患者的預后起著非常重要的作用。因此，如何抑制過度炎癥反應，減輕心肌的損傷，對改善患者預后具有重要的意義。脂氧素A4（LXA4）是一種內源性脂類介質，被稱為是炎癥反應的“剎車信號”，其通過抑制中性粒細胞的趨化、黏附和炎性介質的釋放而發揮廣泛的抗炎作用［3，4］。

本研究對TBIS大鼠進行術前LXA4干預，對大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及肌酸激酶同工酶（CK-MB）進行檢測，對心肌梗死面積及炎性細胞浸潤進行觀察，旨在探討LXA4對TBIS大鼠心肌損傷的保護作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組 清潔級雄性Wistar大鼠36只（山東大學醫學院實驗動物中心），體重220～250 g。隨機分成假手術組（C組）、TBIS模型組和LXA4干預組（C組），每組12只。

LXA4干預組于術前6 h及2 h尾靜脈注射LXA4（脂氧素A4，Lipoxin A4methyl ester， 美國Cayman公司生產，溶于10%乙醇），給予量為0.1 mg/kg體重。C組及TBIS組尾靜脈注射等量生理鹽水及10%乙醇溶液。

1.2 動物模型制備 大鼠實驗前禁食12 h，不禁水。采用自由落體復制顱腦外傷合并失血性休克模型［1］。假手術組僅開顱窗后骨蠟封閉骨窗，不予打擊及放血。

1.3 標本留取及指標測定

1.3.1 丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及CK-MB測定 在各組模型制成120 min后快速從頸動脈采血2 ml，37℃水浴30 min，離心15 min（3500 r/min），取上清，-70℃保存。丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。CK-MB試劑盒購自上海申能-德賽有限公司。測定步驟完全按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 心肌梗死面積計算 參照文獻［5］，在各組模型制成120 min后，將左冠狀動脈前降支結扎，頸靜脈注射0.5%伊文藍1.5 ml，取心臟，區分左心室缺血區（非藍染區）和非缺血區（藍染區），吸干水分，稱重。將缺血區心肌剪下并進行TTC染色后，用生理鹽水沖洗，梗死區呈灰白色，非梗死區呈深紅色，分別剪下，吸干水分，稱重。缺血面積=缺血區質量/左心室總重量×100%，梗死面積=梗死區質量/缺血區質量×100%。

1.3.3 心肌組織炎性細胞觀察 取心肌組織，先用生理鹽水清洗，用10% 甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片及HE染色，在光鏡下觀察中性粒細胞的浸潤情況。

1.4 統計學處理 采用SPSS 12.0統計軟件包進行分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 血清MDA、SOD及CK水平變化 與C組比較，TBIS組血清MDA、CK-MB水平及心肌梗死面積明顯升高（P<0.01），而SOD水平明顯下降（P<0.01）；LXA4治療組血清 MDA、CK-MB 水平及心肌梗死面積較TBIS組明顯下降（P<0.01），而SOD水平明顯升高（P<0.01）。見表1。

表1 血清 MDA、SOD 及 CK-MB 水平變化（±s，n＝12）

表1 血清 MDA、SOD 及 CK-MB 水平變化（±s，n＝12）

注：與C組比較，*P<0.01；與TBIS組比較，#P<0.01

組別 MDA（nmol/mg pro） SOD（U/mg pro） CK-MB（U/L）C 組 3.34±0.82 29.55±7.43 379.2±28.6 TBIS 組 6.71±1.59* 14.91±5.31* 1185.3±106.9 LXA4治療組 4.39±0.94*# 22.47±4.92*# 837.8±93.1

2.2 LXA4組與TBIS組心肌缺血情況比較 LXA與TBIS組比較，缺血面積及梗死面積均明顯降低（P<0.05）。見表2。

表2 各組大鼠心肌缺血情況比較（±s，n＝12）

表2 各組大鼠心肌缺血情況比較（±s，n＝12）

注：#P<0.05

組別 缺血面積 梗死面積TBIS 組 41.2±3.9 57.2±5.3 LXA4治療組 35.1±3.6# 51.1±4.8#

2.3 心肌組織炎性細胞浸潤比較 C組大鼠無炎性細胞浸潤，TBIS組心肌缺血區與壞死區可見大量中性粒細胞浸潤并出現聚集。LXA4組中性粒細胞浸潤較TBIS組明顯減輕。

3 討 論

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）病情兇險、并發癥多見，是臨床上常見的危重癥之一，救治難度大，預后較差。在TBIS進展過程中，心肌的損傷對患者的預后起著非常重要的作用。因此，如何抑制過度炎癥反應，減輕因過度炎癥反應所引起的機體二次損傷，減輕心肌損傷，對改善患者預后具有重要的意義。

脂氧素LXA4是LX最主要的家族成員之一，在促炎性介質前列素E2和白三烯之后產生，屬于二十烷家族中一類花生四烯酸酯加氧酶代謝產物，是目前所知體內重要的內源性促炎癥消退介質。一方面，LXA4通過促進巨噬細胞對凋亡的中性粒細胞的吞噬，及時清除中性粒細胞，促進炎癥消退另一方面，LXA4通過拮抗白三烯、抑制白細胞游走、黏附分子及趨化因子受體表達，抑制炎癥反應的進一步惡化［3，4］。

本研究應用LXA4對TBIS大鼠進行干預，結果顯示，LXA4治療組血清CK-MB水平及心肌梗死面積較TBIS組明顯下降（P<0.01）；病理組織切片顯示，TBIS組大鼠心肌缺血區與壞死區可見大量中性粒細胞浸潤并出現聚集，而LXA4組中性粒細胞浸潤較TBIS組明顯減輕。表明應用LXA4對TBIS干預能夠減輕模型大鼠的心肌損傷。

創傷后機體會發生氧應激損傷，由此引起多種炎性介質的釋放，會進一步加劇休克進程。丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）能較好反映機體內氧自由基水平和機體對氧自由基的清除能力。本研究結果顯示，TBIS組與LXA4治療組血清MDA的水平均高于C組，SOD活性均低于C組。說明在TBIS早期，機體產生了大量氧自由基。而SOD水平的降低使得機體對氧自由基的清除能力下降，并可進一步造成機體的氧化與抗氧化平衡體系被打破，導致心肌組織中氧自由基的蓄積，加劇心肌組織的損傷。與TBIS組比較LXA4治療組血清MDA活性降低，SOD活性升高。說明LXA4干預，能明顯降低機體氧自由基的產生，有效增強機體的抗氧化水平。

總之，LXA4干預可有效降低TBIS大鼠的脂質過氧化水平，增強清除氧自由基的能力，減輕炎癥反應，對TBIS所致心肌損傷具有保護作用。

［1］許會彬，王 青，王化芬，等.大鼠顱腦損傷伴休克所致小腸過氧化損傷及ω-3多不飽和脂肪酸的保護作用［J］.中華實驗外科雜志，2011，28（9）：1584.

［2］李 暉，楊永銳，楊曉冬，等.慢性乙型肝炎患者血漿脂氧素A4水平與疾病臨床分度的關系研究［J］.昆明醫科大學學報，2014，35（02）:80-82.

［3］陶緣發，李宏賓，王廣志，等.脂氧素受體激動劑BML-111減輕大鼠機械通氣肺損傷［J］. 臨床麻醉學雜志，2014，30（03）：279-282.

［4］王學瑩，關為群.脂氧素A4與炎癥性疾病［J］.國際口腔醫學雜志，2013，40（03）：334-338.

［5］李 進，袁世熒，豐新民，等.舒芬太尼延遲預處理對兔心肌缺血再灌注損傷的影響［J］. 中華麻醉學雜志，2009，19（8）:692-695.