早期心肌缺血死后診斷的法醫學應用研究

龔 超

（江蘇省鹽城市公安局亭湖分局刑事科學技術室，江蘇鹽城 224000）

0 引言

本實驗中，將法醫病理檢案中獲取的心臟組織標本作為研究對象，采取IHC檢測技術對心臟組織表達中的7項指標進行檢驗，研究和分析了上述7項指標在不同死亡案例中的陽性表達差異、特異性及診斷價值，旨在為EMI引發的猝死案例提供有效、準確的法醫病理學依據。

1 材料與方法

1.1 材料來源

本實驗中抽取的心臟組織樣本均來自于2011-2013年江蘇省鹽城市尸檢案例，共28例；其中男18例，女10例；年齡35-49歲；宣布死亡時間到尸檢時間為12-72h；其中10例因顱腦外傷死亡，死亡時間距腦部受傷時間間隔在2h內，不存在心臟病病史，尸檢解剖時證實心臟組織正常，記該組案例為正常對照組；其余18例中，9例因EMI猝死，尸檢解剖發現案例冠狀動脈及周邊分支粥樣硬化Ⅲ級或Ⅲ級以上，觀察發現陳舊性或急性心肌梗死能導致其死亡，記為明確心肌梗死組；其余9例為非梗死性案例，其中4例為機械性窒息死，2例為電擊死，3例為煤氣中毒死，且解剖發現冠狀動脈存在輕度病變（Ⅰ級）或無病變。

1.2 儀器及藥劑

主要儀器：石蠟切片機、展片儀、電子天平、電熱恒溫培養箱、電動顯微鏡、臺式離心機、200型多功能酶標儀、DYY-8C型電泳儀等；主要藥劑：BCA試劑盒、RIPA裂解液、TEMED、丙烯酰胺、兔抗H-FABP多克隆抗體、兔抗ADAMTS.1多克隆抗體等。

1.3 心臟組織取樣及標本制作

對上述選取案例的心臟組織進行取樣，采取濃度為10%的福爾馬林對取樣后的心臟標本進行固定處理，固定處理時間維持在10-20d之間；組織取材部位主要位于案例心臟組織左心室前臂以及室間間隔前2/3部位，對取樣后的組織標本給予常規脫水、透明等處理，再進行石蠟包埋。

1.4 實驗方法

對3組蠟塊給予5um組織切片處理，隨后采取二步免疫組織檢測法進行分析，實驗中將0.01M PBS（磷酸鹽緩沖液）作為一抗陰性對照，二抗使用二步檢測試劑盒（PVPV-6001/PV-6002）進行檢驗。隨后借助Image圖像分析系統對屬于ADAMTS-1的Western blot顯影條帶進行光密度掃描，，以各組目的蛋白條帶光密度值對內參蛋白光密度值計算相對比值，以對照組比值為100%，其余各組與之相比，再次計算比值為統計值；而三組切片中Actin（HHF35）、H-FABP檢測指標免疫組織染色結果采取Image-Pro Plus圖像分析系統進行定量分析，每個標本切片均隨機挑選10個高倍視野，記錄視野中陽性信號面積、總面積，對10個視野中的各項數據進行記錄，取其平均值，計算缺失面積（缺失面積為總面積和陽性信號面積之差）。

對于 CLU、Fn、C5b-9、HIF-1α 和 ADAMTS-15 項檢測指標免疫組織染色陽性表達同樣采取上述圖像分析系統進行測量，獲取各項指標的陽性表達平均光密度值，方法同上。

1.5 IHC 檢測結果判斷

3組IHC切片均由兩名檢驗豐富、資歷高的法醫學病理家進行讀片，并判斷結果；若2人結果不一致，則再請一名相同資歷的專家進行讀片，最終確定結果。

1.6 統計學方法

采取統計學軟件SPSS19.0進行分析和處理，計數資料采取率（%）表示，組間率對比采取x2檢驗；以P＜0.05為有顯著性差異和統計學意義。

2 結果

分析發現，正常對照組心肌細胞H-FABP、HHF35均呈現一致的陽性表達；明確心肌梗死組在心肌細胞HFABP、HHF35缺染陽性表達率明顯高于正常對照組和其他案例死亡組（P＜0.05）；明確心肌梗死組在 CLU、Fn、C5b-9、HIF-1α和 ADAMTS-1五項心臟組織檢測指標的陽性率明顯高于正常對照組，對比差異有統計學意義（P＜0.05）。其中其他案例組中，部分案例存在上述五項中某項指標陽性表達，但與正常對照組對比無明顯差異（P＞0.05）（見表 1）。

表1 三組中心臟組織I H C檢測7項指標陽性表達情況對比（%）

3 討論

在法醫學實踐中，因心肌梗死（EMI）而引發心肌缺血癥狀，該類癥狀發生6h內的猝死案例較多，而在缺血死后的常規檢查中，可發現死亡案例體內的冠狀動脈及周邊分支呈現輕重程度不一的粥樣硬化，但因為缺血因素引發的心肌病理形態學改變卻很難鑒定，因而對于EMI死后的法醫診斷常采取IHC相關指標檢測，該項檢測技術判斷準確率較高。

本文研究發現，通過對不同死亡病例取樣心臟組織標本的7項診斷標準進行檢測分析，發現H-FABP和HHF35兩項指標在EMI猝死后的診斷特異性較低，而CLU、Fn、C5b-9、HIF-1α和ADAMTS-15項檢測指標對于EMI猝死后的法醫學診斷有著很明顯的特異性，較正常組和其他案例組而言有著非常明顯的差異，這說明在法醫學實踐中，可將多心臟組織的診斷指標聯合檢測，尤其是上述五項檢測指標，這對提升心肌梗死（EMI）死后診斷率的準確率有著積極的意義。

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