ALDH1在乳腺UDH、ADH、IDC中的表達及意義

郭鈺+++衛建平

[摘要] 目的 探討ALDH1在乳腺普通導管增生、非典型導管上皮增生以及浸潤性導管癌中表達及其臨床意義。方法 采用免疫組織化學方法對30例正常乳腺及90例乳腺導管疾病患者的ALDH1的表達進行測定。結果 ALDH1在正常、乳腺普通導管增生、不典型導管上皮增生以及浸潤性導管癌中的陽性表達率為：0%、23.3%、23.3%、60%。結論 乳腺浸潤性導管癌患者的ALDH1的陽性率明顯高于正常乳腺及其它乳腺導管疾病，提示ALDH1的陽性表達與乳腺增生至乳腺癌變的演進，且與疾病的預后有一定的關系。

[關鍵詞] 乳腺腫瘤；ALDH1；免疫組織化學

[中圖分類號] R4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）04（c）-0011-03

乳腺導管疾病是全世界女性最常見的腫瘤之一，我國女性關于乳腺導管疾病的發病率近年來也一直呈現上升趨勢[1-2]。乳腺癌作為乳腺常見的惡性腫瘤，嚴重影響了婦女的身心健康甚至危及生命，其中浸潤性導管癌是最常見的類型。乙醛脫氫酶1（Aldehyde Dehydrogenase class 1，ALDH1）最早是通過對人類肝臟對酒精的解毒作用發現的，至2007年研究者[3]才首次通過對乳腺癌實體組織的研究，發現高表達ALDH1具有腫瘤干細胞特性，即具有較高的成瘤率，且預后較差，總體生存率也較低，但因其對于乳腺導管病變的作用機制目前尚未完全闡明，所以探討ALDH1在乳腺導管病變進展中的意義就具有重要的理論和現實意義。為探討ALDH1在乳腺普通導管增生、非典型導管上皮增生以及浸潤性導管癌中表達及其臨床意義，該研究選取 2007年1月—2008 年12月各類乳腺疾病石蠟切片共120例為研究對象，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經山西醫科大學附屬長治市人民醫院倫理委員會批準且患者本人知情同意，選取在山西醫科大學附屬長治市人民醫院病理科就診的各類乳腺疾病石蠟切片共120例，所有患者均為女性，年齡18～83歲，平均年齡（53±3.2）歲，術前均未接受化療、放療及其他輔助治療。標本均由 10%中性甲醛固定，石蠟包埋，HE染色。每例乳腺病變的病理診斷均經過2名高年資病理醫生的復查，診斷準確無誤，按照WHO2012年乳腺病理分類，其中普通型導管增生（Usual ductal hyperplasia，UDH）、非典型導管上皮增生（Atypical ductal epithelial hyperplasia，ADH）以及浸潤性導管癌（Infiltrative ductal carcinoma，IDC）石蠟切片均30例。

1.2 試劑及方法

兔抗人ALDH1單克隆抗體（EP1933Y，美國abcam公司，北京中杉金橋生物技術有限公司代購），實驗濃度 1：200；SP超敏檢測試劑盒；DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術開發有限公司）；檸檬酸組織抗原修復液（福州邁新生物技術開發有限公司）；PBS緩沖液（福州邁新生物技術開發有限公司）；3%H2O2。

將120例烤好的石蠟組織切片常規脫蠟至水；高壓鍋檸檬酸抗原修復液熱修復后，待水溫自然降至室溫，PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；3%過氧化氫（阻斷劑）室溫濕盒孵育10 min，PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；10%正常山羊血清室溫濕盒封閉10 min；加入一抗ALDH1 4℃過夜，PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；加入二抗室溫濕盒10 min；PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；DAB顯色適當時間（鏡下掌握）。 PBS返藍；蘇木素復染2 min；乙醇由低向高梯度脫水、二甲苯透明；中性樹膠封片。

1.3 結果判斷

ALDH1陽性顆粒主要分布于細胞漿，按照許良中等[4]的方法，采用陽性染色強度及陽性細胞所占百分比共同進行判斷。每張切片在400倍視野下隨機選擇10個視野，將切片中平均陽性細胞比例及染色深淺分別計0～3分，染色強度以多數細胞為準：無著色，0分；淡黃色，1分；黃或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分。切片中無陽性細胞，0分；陽性細胞<25%，1分；26%～50%，2分；51%～75% ，3分；>75%，4分。兩項指標的總積分將結果分為4級，0～3分為（-）；4～5分為（+）；6～7分為（++）；8分以上為（+++）；其中0～3分視為陰性表達，（+）（+++）視為陽性表達。

1.4 統計方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行分析，計數數據采用χ2檢驗或者Fish′s精確檢驗。

2 結果

2.1 ALDH1在乳腺UDH、ADH、IDC的表達情況

120例患者ALDH1在正常乳腺、UDH、ADH、IDC的陽性率分別為：0%、23.3%、23.3%、60%。以正常乳腺中ALDH1的表達為最低，IDC為最高。見表1。

2.2 ALDH1與預后的關系

對收入調查的30例IDC患者進行五年生存率統計分析，無病生存率分別為83.3%和38.9%（Log Rank檢驗=4.010，P=0.045）見表2。如圖1，可以看出陰性組和陽性組生存曲線位置不同，陰性組生存率明顯高于陽性組，陽性組的患者，復發轉移的概率及死亡率均有所增高，P<0.05，差異有統計學意義。

表2 ALDH1與預后的關系[n（%）]

圖1 乳腺癌患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

人們通過對實體腫瘤的研究，發現有少數腫瘤細胞具有強大的自我更新能力、體內成瘤能力及多向分化的能力，由于這種特性，便將其稱為“腫瘤干細胞（Cancer Stem Cells， CSCs）”[5]。疾病的產生、演進及耐藥性的產生是由于具有干細胞特點的細胞所致，這些細胞的出現與患者較差的結局具有相關性[6]。通過對乳腺癌干細胞的研究，ALDH1現已被證實是乳腺癌干細胞的標志物[7-9]。ALDH1是細胞內乙醛氧化脫氫酶，是體內涉及維甲酸合成、乙醛代謝、氧化應激反應等重要生物代謝作用的關鍵酶。它在干細胞分化早期氧化視黃醇形成視黃酸[10]。正常乳腺上皮細胞群能夠在高水平ALDH1能形成乳腺球。ALDH1陽表達患者的預后差，其總體生存率較低，發生轉移的可能性是陰性表達者的1.76倍[10]。經研究發現在多種人類惡性腫瘤的惡變過程中ALDH1表達異常。在該次實驗中檢測了90例乳腺導管病變及30例正常乳腺組織中ALDH1的表達情況，在IDC組中，ALDH1陽性表達率最高，為60%，明顯高于其它分組，ALDH1陽性患者的五年無病生存率較陰性患者過低，差異有統計學意義，可以暫時認為在乳腺導管病變的惡變過程及預后中ALDH1均具有重要作用。

許多化療藥是通過誘導腫瘤細胞凋亡起作用的，腫瘤干細胞標志物ALDH1，使針對腫瘤干細胞的靶向治療也成為可能，為根治乳腺癌帶來了希望，相信在不久的將來，以ALDH1為治療靶點的靶向治療，能夠減少腫瘤的發生及轉移，提高患者生存率。

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（收稿日期：2014-01-20）