天麻素氯化鈉注射液的質量標準研究

劉劍+閆建坤

[摘要] 目的 建立天麻素氯化鈉注射液的質量標準。 方法 采用紫外-可見分光光度法測定處方中天麻素的含量。 結果 由紫外掃描可知天麻素在220 nm波長處有最大吸收，而氯化鈉及其他輔料在220 nm處幾乎無吸收，不干擾本試驗。 結論 采用紫外-可見分光光度法，方法操作簡單，準確可靠，重復性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質量控制方法。

[關鍵詞] 天麻素氯化鈉注射液；質量標準；紫外-可見分光光度法

[中圖分類號] R927.11 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）10（c）-0008-04

天麻素注射液[1-5]主要成分為名貴藥材天麻[6-9]的有效單體天麻素，具有鎮靜，抗驚厥，抗癲癇，鎮痛，增加腦血流量，改善椎-基底動脈、小腦前下動脈、小腦后下動脈、密路動脈及內耳供血不足，保護神經細胞，促進心肌細胞能量代謝的功能，臨床上被廣泛應用于眩暈[10-15]（梅尼埃病、藥毒性眩暈、前庭神經元炎、椎-基底動脈供血不足等）、神經痛（三叉神經痛、坐骨神經痛、枕大神經痛等）、頭痛（神經衰弱及神經衰弱綜合征、血管性頭痛、緊張性頭痛、腦外傷綜合征、偏頭痛等）及癲癇的輔助治療。本試驗采用紫外-可見分光光度法對制劑中所含的天麻素進行含量測定。

1 儀器與試藥

UV-754紫外分光光度計（上海電子光學技術研究所）；天麻素氯化鈉注射液供試品由內蒙古自治區紅十字會包頭朝聚眼科醫院制劑室生產：規格100 ml，天麻素0.2 g與氯化鈉0.9 g（批號為110106、110107、110108）；對照品天麻素由中國藥品生物制品鑒定所提供：規格20 mg，批號110807-201104。

2 方法與結果

2.1 性狀

取本品目檢，結果3批樣品性狀均為無色澄明液體。

2.2 鑒別

①本品為以氯化鈉為溶劑的注射液，參照氯化鈉注射液項下的鑒別操作如下：取本品適量，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀復生成。取處方中除氯化鈉外的樣品適量，同法操作，溶液澄清無沉淀。取本品適量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，即發生氯氣，能使用水濕潤的碘化鉀淀粉試紙顯藍色。3批樣品均呈正反應。取處方中除氯化鈉外的樣品適量，同法操作，無氣體產生。

②參照天麻素的質量標準，取本品適量（相當于天麻素10 mg），加熱揮至快干，加硫酸2 ml，溶液呈櫻桃紅色。取氯化鈉溶液及輔料適量，同法操作，結果可見3批樣品的鑒別1及鑒別2均呈正反應（表1）。

③天麻素注射液采用紅外鑒別，考慮到本品為注射劑，紅外鑒別易受輔料的干擾，而天麻素的分子結構中有特殊的紫外發色團-苯環，故考慮將其特征紫外吸收作為一項鑒別，具體操作如下：取含量測定項下的溶液，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄ⅣA）測定3批樣品及對照品的最大吸收波長。3批樣品均為λmax1=220 nm，λmax2=269 nm，在220、269 nm波長處有最大吸收（表1）。

2.3 檢查

參照中國藥典2010年版二部的有關規定，對本品進行pH值、溶液的澄清度與顏色、可見異物、不溶性微粒、裝量、細菌內毒素、無菌等項目的檢查。

2.3.1 pH值

取本品，依法測定pH值（中國藥典2010年版二部附錄Ⅵ H），結果3批樣品pH值為5.7、5.8、5.7。本品pH值均在5.0～6.0范圍內，考慮到人體的耐受性和生產的可控性，將本品的pH值定為：5.0～7.0。

2.3.2 不溶性微粒

取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅸ C），結果3批樣品不溶性微粒檢查均符合規定。

2.3.3 可見異物

取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅸ H），結果3批樣品可見異物檢查均符合規定。

2.3.4 裝量

取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ F），結果3批樣品裝量檢查均符合規定。

2.3.5 重金屬

取本品20 ml，加醋酸鹽緩沖液（pH值3.5）2 ml與水使成25 ml，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅷ H第一法），結果三批樣品重金屬檢查均<10/1000萬。

2.3.6 細菌內毒素

2.3.6.1 限值確定 參考中國藥典2010年版二部氯化鈉注射液質量標準中對細菌內毒素的限值規定為0.5 EU/ml，因此本品的限值定為0.5 EU/ml。

2.3.6.2 干擾試驗 取供試品，用上述兩個廠家的鱟試劑進行干擾試驗（照中國藥典2010年版二部附錄ⅪE項下方法進行），結果天麻素氯化鈉注射液對鱟試劑的凝集反應無增強或抑制作用，不干擾測定。

2.3.6.3 供試品細菌內毒素檢查 供試品溶液的制備：取本品，照細菌內毒素檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ E）進行測定，3批樣品細菌內毒素均<0.5 EU/ml，訂入質量標準。

2.3.7 無菌

取本品，照薄膜過濾法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ H），結果3批樣品無菌檢查均符合規定。

2.4 含量測定

參考國家藥品標準天麻素注射液（WS1-XG-023-2001）和中國藥典2010年版二部“氯化鈉注射液”，對本品中的天麻素和氯化鈉進行含量測定。

2.4.1 天麻素含量測定方法

照天麻素注射液（WS1-XG-023-2001），用紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A）測定。

2.4.1.1 檢測波長的選擇 取天麻素原料適量，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至16 μg/ml，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A）測定。由紫外掃描圖可知，本品在220 nm與269 nm波長處有最大吸收波長。參照天麻素注射液（WS1-XG-023-2001），將本試驗的檢測波長定為220 nm。

2.4.1.2 氯化鈉及其他輔料的干擾 取處方中除天麻素外的等比例的輔料適量，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A）測定。由紫外掃描圖可知，氯化鈉及其他輔料在220 nm處幾乎無吸收，不干擾本試驗。

2.4.1.3 線性關系試驗 取天麻素對照品16.2 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1、2、4、5、8 ml，分置100 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，取上述5種溶液照分光光度法（中國藥典2005年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，以其吸收度（A）為縱坐標，其濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程A=1868.2C+1049.9，結果表明r為0.9998，天麻素在3.24～25.92 μg/ml濃度范圍內與吸收度呈良好的線性關系。

2.4.1.4 穩定性試驗 取本品適量（約相當于天麻素200 mg），置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。于室溫下放置8 h，分別于0、1、2、4、6、8h測定，取供試品溶液照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，考察樣品含量穩定性，結果表明8 h內測定方法穩定。

2.4.1.5 精密度試驗 取110106批樣品適量（約相當于天麻素200 mg），置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，連續測定6次，結果表明本法精密度良好，天麻素的RSD為0.16%。

2.4.1.6 回收率試驗 精密稱取天麻素約為12、16、19 mg（每組稱取3個平行樣），分置100 ml量瓶中，按處方量加入輔料，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，各精密移取2 ml分置25 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取經105℃減壓干燥3 h的天麻素對照品適量，按同法制成每毫升中含16 μg的溶液，作為對照品溶液，取供試品溶液及對照品溶液，照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，結果表明本品天麻素含量測定回收率良好（表2）。

2.4.1.7 含量測定 精密量取本品20 ml，置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即制得供試品溶液。另精密稱取經105℃減壓干燥3 h的天麻素對照品適量，加0.9%的氯化鈉溶液制得每毫升中含16 μg的溶液，作為對照品溶液，取上述兩種溶液照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，計算本品中天麻素的含量，結果3批樣品天麻素含量為101.47%、100.26%、102.01%。以上數據表明，3批樣品天麻素含量均在90.0%～110.0%范圍內，訂入質量標準。

2.4.2 氯化鈉

取本品，照中國藥典2010年版“氯化鈉注射液”含量測定方法對本品的氯化鈉進行含量測定。

2.4.2.1 測定方法 精密量取本品10 ml，置100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。每毫升的硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當于5.844 mg的氯化鈉。

2.4.2.2 天麻素及輔料的干擾試驗 取處方中除氯化鈉外的其他組分10 ml，加水40 ml溶解并稀釋至刻度，2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。所耗硝酸銀滴定液的量為0.01 ml，表明天麻素及輔料在此試驗中幾乎無干擾。

2.4.2.3 線性關系試驗 取氯化鈉約1.4023 g，置100 ml的潔凈量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1、2、4、5、8 ml，置不同的100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取上述溶液10 ml，置不同的100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。扣除空白，以滴定體積為縱坐標，氯化鈉濃度為橫坐標，進行線性回歸，結果r為0.9999，表明氯化鈉在70.4～105.6 mg范圍內與滴定體積呈良好的線性關系。

2.4.2.4 重復性試驗 取本品（批號：110106），照上述方法重復測定6次含量，結果表明，本法重復性較好，氯化鈉的RSD=0.10%。

2.4.2.5 回收率試驗 取氯化鈉為72、90、108 mg（每組稱取3個平行樣），分置100 ml錐形瓶中，按處方量加入天麻素及輔料，加水20 ml溶解，再加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。扣除空白，計算回收率。結果可見氯化鈉回收率良好（表3）。

2.4.2.6 樣品測定 精密量取本品10 ml，置100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定，計算氯化鈉的含量。每毫升硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當于5.844 mg的氯化鈉。結果3批樣品氯化鈉含量為101.25%、102.00%、100.41%，表明3批樣品氯化鈉含量均在90.0%～110.0%范圍內，訂入質量標準。

3 討論

參照“天麻素注射液”國家標準（WS1-XG-023-2001）中含量測定項，對天麻素的含量測定方法進行設計并經方法學驗證可行；參照中國藥典2010年版氯化鈉注射液標準，對本品的氯化鈉進行含量測定方法設計，并經方法學驗證可行，方法操作簡單，準確可靠，重復性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質量控制方法。

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[15] 韓增燦，曹秀蘭.天麻素注射液治療眩暈癥76例療效觀察[J].右江醫學，2001，29（5）：444.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）

3 討論

參照“天麻素注射液”國家標準（WS1-XG-023-2001）中含量測定項，對天麻素的含量測定方法進行設計并經方法學驗證可行；參照中國藥典2010年版氯化鈉注射液標準，對本品的氯化鈉進行含量測定方法設計，并經方法學驗證可行，方法操作簡單，準確可靠，重復性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質量控制方法。

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[15] 韓增燦，曹秀蘭.天麻素注射液治療眩暈癥76例療效觀察[J].右江醫學，2001，29（5）：444.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）

3 討論

參照“天麻素注射液”國家標準（WS1-XG-023-2001）中含量測定項，對天麻素的含量測定方法進行設計并經方法學驗證可行；參照中國藥典2010年版氯化鈉注射液標準，對本品的氯化鈉進行含量測定方法設計，并經方法學驗證可行，方法操作簡單，準確可靠，重復性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質量控制方法。

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（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）