β-catenin和Ki67在涎腺腺泡細胞癌中的表達及意義

張麗慧，吳蘭雁，姚 甜，趙 業，鄭亞鴿

(1陜西省西安醫學院口腔系，西安 710021;2四川大學華西口腔醫院病理科;3中國解放軍第四一一醫院;4山西大同市第三人民醫院口腔科;5成都市雙流縣婦幼保健院;*通訊作者，E-mail:lanyan777@gmail.com)

腺泡細胞癌(acinic cell carcinoma，AciCC)是一相對少見的涎腺上皮源性腫瘤，大約占所有涎腺腫瘤的2%－9%，所有涎腺惡性腫瘤的10%－17%［1，2］。通常發生在腮腺，兒童也可發生。由于AciCC組織學類型及細胞形態復雜多樣，與其他涎腺腫瘤組織形態存在交叉重疊，所以對該瘤的病理診斷、鑒別診斷及預后的判定尚存在一定困難。β－連環蛋白(β-catenin)不僅在細胞黏附中發揮作用，還是一種多功能蛋白，在信號傳導、細胞的增殖、分化等方面起到重要的作用。β-catenin可以在細胞骨架中連接E-cadherin和α-catenin組成E-cadherin-catenin復合物來調節并維持細胞間的黏附。β-catenin的減少或丟失可能會破壞E-cadherin-catenin復合體的穩定性和完整性，導致腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移［3］。Ki67與細胞周期密切相關。本研究通過檢測β-catenin和Ki67在46例AciCC中的表達情況，旨在探討與該瘤預后相關的客觀指標，為臨床預后評估提供有價值的參考資料。

1 材料和方法

1.1 標本和試劑

收集四川大學華西口腔醫院1988－2011年間的46例AciCC石蠟標本，10例腮腺腫瘤瘤旁正常組織做為對照。

鼠抗人β-catenin單克隆抗體，鼠抗人Ki67單克隆抗體，聚合物輔助劑，辣根酶標記羊抗兔/小鼠IgG多聚體，DAB試劑盒，以上試劑均為北京中杉金橋生物技術有限公司生產。

1.2 試驗方法

采用免疫組化染色(PV二步法)。

按照試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司，PV二步法)中提供的說明書進行，抗體為即用型，抗原修復用高壓鍋抗原熱修復，修復液為枸櫞酸鈉(0.1 mol/L，pH6.0)。染色過程中以 PBS 代替一抗設為空白對照，腮腺多形性腺瘤及腺泡細胞癌瘤旁正常涎腺組織作為正常對照。β-catenin以扁桃體為陽性對照，Ki67以乳腺癌為陽性對照。

1.3 統計學分析

實驗結果采用SPSS17.0統計軟件進行統計學分析處理。計數資料采用χ2檢驗、Fisher確切概率法比較，檢驗水準α=0.05。

1.4 結果判定

根據 Maruyama［4］的判定方法:β-catenin 的細胞膜陽性率＞70%為正常表達，否則為異常表達;如果胞質或細胞核陽性率＞10%，也同樣為異常表達。

Ki67表達定位于細胞核，呈棕黃色。在高倍鏡下(×400)隨機選取10個視野，每個視野計數100個細胞，共計1 000個細胞，記錄其中的陽性染色細胞數，測定 Ki67標記指數(Ki67 label index，LI)，LI=(陽性細胞數/計數的細胞總數)×100%。

圖1 β-catenin在瘤旁正常腺體和AciCC復發病例中的表達 (IHC，×400)Figure 1 Expression ofβ-catenin in adjacent normal gland and recurrent cases of AciCC (IHC，×400)

圖2 Ki67在瘤旁正常腺體和AciCC復發病例中的表達 (IHC，×400)Figure 2 Abnormal expression of Ki67 in adjacent normal gland and recurrent cases of AciCC (IHC，×400)

2 結果

2.1 β-catenin的免疫組化檢測結果

在瘤旁正常組織的β-catenin蛋白主要定位于腺泡細胞、導管上皮細胞的細胞膜。在細胞質有時也會有少量的表達(圖1，見第549頁)。在46例AciCC中，14例正常表達，32例異常表達，β-catenin主要異位表達在細胞質(圖1，見第549頁)。統計學分析表明，β-catenin的異常表達在復發組高于無復發組(P＜0.05)。β-catenin的表達與腫瘤直徑、組織類型、浸潤包膜、浸潤周圍組織等各臨床病理參數無相關性(P＞0.05，見表1)。β-catenin的表達與AciCC的分型無相關性(見表2)。在不同生物學行為中β-catenin的表達與AciCC的復發與否相關，與淋巴結轉移與否無相關性(見表3)。

表1 β-catenin表達、Ki67表達與AciCC臨床病理參數Table 1 Correlation between the expression ofβ-catenin，Ki67 and the clinicopathologic parameters of AciCC

表2 β-catenin表達與AciCC組織學類型Table 2 Correlation between the expression ofβ-catenin and histological types

表3 β-catenin表達與AciCC的復發和轉移Table 3 Correlation between the expression ofβ-catenin and recurrence and metastasis

2.2 Ki67的免疫組化檢測結果

在正常涎腺組織中未見Ki67陽性信號(圖2，見第549頁)。在 AciCC中，34例 Ki67標記指數＜10%，12例LI≥10%。經統計學比較，Ki67標記指數≥10%組與Ki67標記指數＜10%組比較，復發率較高 (P＜0.01)，淋巴結轉移率較高(P＜0.01，見表4)，說明與其有顯著相關性。Ki67的表達與腫瘤直徑、浸潤包膜、浸潤周圍組織無相關性(P＞0.05，見表1)。Ki67在各組織學類型中的表達與AciCC的分型無相關性(見表5)。

3 討論

3.1 β-catenin在腺泡細胞癌的表達及意義

β-catenin是一種多功能蛋白，在信號傳導、細胞黏附、細胞的增殖、分化等方面起到重要的作用。氨基端、羧基端及arm區域為它的三個主要結構域。氨基端，有GSK－3β和酪氨酸蛋白激酶的磷酸化位點，此位點的磷酸化可使β-catenin翻譯后保持穩定;羧基端，負責激活靶基因的轉錄;而結構緊密的arm區域，可防止蛋白水解，并且是 β-catenin與其配體相互作用的基礎［5］。

β-catenin在細胞骨架中連接E－鈣黏蛋白和α－catenin組成E－cadherin－catenin復合體來調節并維持細胞間黏附。β-catenin或其他分子的減少或丟失可能會破壞E－cadherin－catenin復合體的穩定性和完整性，導致腫瘤細胞的增殖，侵襲和轉移［3］。β-catenin復合體降解障礙可能是導致腫瘤發生的關鍵環節［6］。Chetana等［7］報道 β-catenin 表達的減少或異常在惡性涎腺腫瘤較多見，主要在細胞質表達，在良性涎腺腫瘤中表達程度較弱。Renata等［8］報道在發生于涎腺的基底細胞腺瘤中檢測到β-catenin的核異常表達。Furuse等［9］檢測到在涎腺上皮肌上皮癌中肌上皮細胞有β-catenin的異常核表達。在多形性腺瘤，腺樣囊性癌和多形性低度惡性腺瘤中沒有核表達異常，但在細胞膜和細胞質中有異常表達。Chetana等［7］報道在腺樣囊性癌中有60%的β-catenin異常表達，然而Shibuya等［10］研究顯示在腺樣囊性癌中β-catenin有100%的異常表達。Namba等［11］觀察到β-catenin在涎腺腫瘤(18例多形性腺瘤，7例透明細胞瘤，4例Warthin瘤，4例腺樣囊性癌，7例乳頭狀腺癌)中表達較低，在腺樣囊性癌微囊型的腔面細胞表達陽性，在Warthin瘤中腫瘤細胞膜陽性表達。Liu等［12］研究發現在成釉細胞瘤的濾泡型和叢狀型中可以觀察到β-catenin的核定位。袁健等［13］在研究β-catenin在口腔鱗癌中的表達情況時發現，在60例口腔鱗癌中有70%β-catenin異位表達，并且其異位表達與有無淋巴結轉移有關。

Li等［14－16］觀察到 β-catenin 的異常表達與腫瘤的轉移和預后有關。Amsha等［17］發現β-catenin的異常表達與臨床組織學分型及預后無顯著相關性。

據我們所知，β-catenin與涎腺腺泡細胞癌的相關研究尚未見文獻報道。

本組資料，β-catenin的異位表達主要位于細胞質，而且復發組的異常表達高于無復發組(P＜0.05)。

表4 Ki67在不同生物學行為的AciCC中的表達Table 4 Expression of Ki67 in different biological behavior of AciCC

表5 Ki67表達與AciCC組織學類型Table 5 Correlation between the expression of Ki67 and histological types

3.2 Ki67在腺泡細胞癌的表達及意義

Ki67與細胞周期密切相關，除了不存在于靜止的G0期外，在細胞周期的G1后期、S1、S2、M期都可出現，在G2和M期達到峰值 ，隨后迅速下降。故可利用Ki67指數檢測腫瘤及非腫瘤疾病的增殖細胞的活性［18］。

Ki67指數的檢測在預測許多惡性腫瘤的預后方面都有著重要價值。Luukkaa等［19］在研究涎腺癌時發現Ki67抗原的表達與患者的生存率顯著相關。Danyel等［20］研究發現Ki67在多形性腺瘤中均無表達，在黏液表皮樣癌中分化較差的表達顯著高于分化較好的。Nordgard等［21］發現Ki67的表達可以很好地預測腺樣囊性癌的短期生存率。

與Ki67相關的涎腺AciCC研究中仍缺少有隨訪信息的大宗病例相關研究。Ki67指數的檢測在預測AciCC預后方面是否有意義，什么樣的Ki67指數具有預后意義尚存在爭議。Danyel等［20］研究發現，Ki67在1例AciCC中表達陰性，但此例患者死亡。Murakami等［22］研究發現1例AciCC中Ki67 LI＞20%，但遺憾的是沒有此患者的隨訪信息。Martino等［23］研究發現在 AciCC中，Ki67表達指數高于15%時，患者易復發。劉婷姣等［24］觀察到 Ki67指數＞5%時，病人預后不好。孫妍［25］研究發現Ki67在復發和轉移組表達指數＞25%，在轉移組中，Ki67表達指數＞50%。Katherine等［26］研究發現Ki67表達指數＞10%時，病人預后較差。在我們的研究中當Ki67標記指數≥10%時，病人更容易復發和淋巴結轉移。

本研究結果發現β-catenin異常表達的腺泡細胞癌患者復發率較高，ki67的標記指數≥10%時，患者易復發，淋巴結轉移率也較高，提示β-catenin和Ki67免疫組織化學染色可以作為預測涎腺AciCC預后的輔助工具。

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