烘烤期煙葉霉爛病的病原鑒定

曾婷英，顧鋼，張紹升

1福建農林大學植物保護學院，福州市倉山區上下店路15號 350002；2福建省煙草專賣局煙草農業科學研究所，福州市北環中路133號 350003

烘烤期煙葉霉爛病的病原鑒定

曾婷英1，顧鋼2，張紹升1

1福建農林大學植物保護學院，福州市倉山區上下店路15號 350002；2福建省煙草專賣局煙草農業科學研究所，福州市北環中路133號 350003

為明確烘烤期煙葉霉爛病病因和發病條件，進行了病原菌分離培養、病原菌形態特征觀察、生長溫度試驗、致病性測定及病害發生條件觀察。結果表明：病原菌為米根霉（Rhizopus oryzae），煙葉變黃期烤房溫度達36～40℃，相對濕度75%～85%的條件下有利病菌的生長和侵染。首次確認烘烤期煙葉霉爛是由病原菌引起的一種新的侵染性病害，該病害命名為煙葉霉爛?。╰obacco leaf mildew and rot）。

烘烤期；煙葉霉爛；米根霉

烤壞煙葉是煙葉烘烤中經常出現的問題，在有些煙區烤壞煙葉約占烤煙產量6.3%～14.2%,對煙農和煙葉生產造成重大損失[1]?？緣臒熑~的基本類型有黑螞皮煙葉、烤紅煙葉、烤青煙葉、青痕煙葉、掛灰煙葉、黑糟煙葉、洇筋煙片煙葉、烤爛煙葉[2-3]。前7類烤壞煙葉的原因一般歸于煙葉品質、采收技術、編煙和烤房裝煙密度不當，烘烤期溫度和濕度控制不當等；烤爛煙葉被認為是由于烘烤變黃期溫度過低而濕度過高，腐爛細菌或真菌易滋生和侵染所致[3]。云南省報道紅花大金元煙葉在烘烤過程中發生葉柄霉變,認為煙葉葉柄霉變是感染霉菌引起的[4]。盡管以上報道認為煙葉烘烤期霉爛與病原菌侵染有關，但是，迄今為止未見有關煙葉烘烤期霉爛的病原菌鑒定的報道。近幾年在福建省部分烤煙生產區調查也發現了煙葉在烘烤變黃階段發生霉變爛葉現象，霉變破爛的煙葉基本喪失利用價值，個別烤房烘烤期煙葉霉變率達50%以上，給煙農帶來嚴重損失。為此，本研究進行了烘烤期煙葉霉爛的病原鑒定研究和霉變條件觀察，以期為該病原菌防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

樣本取自福建省政和縣楊源鄉密集式烤房烘烤期間霉變煙葉?？緹熎贩N：紅花大金元。

1.2 癥狀和侵染觀察

肉眼觀察霉變煙葉癥狀，利用體視顯微鏡觀察霉層在煙葉上的分布和為害特征。用解剖針從霉變煙葉上挑取霉狀物通過光學顯微鏡觀察鑒定。開烤后定期觀察烤房內煙草霉變過程和記錄溫度濕度的變化。

1.3 致病性測定

采用磨擦接種法將煙葉葉柄上的霉狀物接種于正常成熟的紅花大金元煙葉的葉柄摘口上，于30 ℃下保濕培養，觀察葉柄霉變情況。

1.4 病原菌的分離培養

取霉變煙葉，在病健交界處剪?。?～5）mm×（2～3） mm的病組織，先置于70%乙醇中浸3～5 s，接著移入0.1%升汞液中浸3～5 min，再經滅菌水中漂洗3遍，把組織移到馬鈴薯蔗糖瓊脂（PSA）平板上，每皿放4～5塊， 于25 ℃的恒溫箱中倒置培養，24 h后進行病原菌純化。

1.5 病原菌的形態學鑒定

用解剖針挑取病煙葉上的霉層和培養基上培養的霉層，置于載玻片的乳酚油中，制成臨時玻片標本，于光學顯微鏡下觀察病原菌形態特征，根據參考文獻[5]進行病原菌種類鑒定。

1.6 病原菌生長溫度測試

用打孔器打取直徑為6mm病原菌菌餅，接種于PSA平板中央，分別置于10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、27 ℃、30 ℃、32 ℃、36 ℃、39 ℃、41 ℃、43 ℃、45 ℃的溫度下恒溫培養，于24 h后觀察菌落生長情況，每處理重復3次。

2 結果與分析

2.1 癥狀

煙葉上烤后24 h之內（變黃排濕前期）葉柄開始發霉（圖1，A），煙葉變黃前期和中期是霉變期,透過烤房玻璃門可以看到煙葉葉柄和葉片上發生大量霉層 (圖1，B)。霉變從葉柄開始發生（圖1，C）,逐漸向葉片主脈、側脈及葉片擴展,導致葉片大面積腐爛（圖1，D），病組織表面布滿灰白色霉層（圖1，E）。在體視顯微鏡下，可以看到霉菌的菌絲和孢子囊。霉變煙葉外觀色澤淡暗、變黑，發出霉味，煙葉的韌性和彈性降低。

2.2 病害發生條件

溫度和濕度是烘烤期發生煙葉霉爛的重要條件。通過烘烤期煙葉霉變過程的觀察，病害在煙葉變黃排濕前期，烤房干球溫度32～33 ℃、相對濕度85%～92%病害開始發生，在煙柄上陸續出現灰白色霉層；煙葉烘烤變黃中期，烤房溫度維持在35～38 ℃，相對濕度在75%～85%，最適宜米根霉的生長和侵染，病害迅速擴展蔓延。煙葉變黃后期烤房干球溫度38～39 ℃、相對濕度74%～80%，病害發展速度減緩?？痉績认聦訜煱l病較輕，中層煙葉發病較重，上層煙葉霉變最嚴重。不同層煙葉發病程度差異主要與濕度有較大關系。在烘烤期的低溫調濕變黃階段，低層煙葉升溫排濕較快較早、葉際濕度較低，而上層煙葉濕度較大且持續時間較長，這是導致上層煙葉發病嚴重的重要原因。

圖1 烘烤期煙葉霉爛病癥狀Fig. 1 Symptoms of tobacco mildew disease during flue-curing

2.3 病原菌種類鑒定

在PSA培養基上菌落疏松，菌絲初期灰白色后轉變成灰黑色，孢囊梗產生于菌絲上。孢囊梗直立或稍彎曲，束生，每束2～4株、較少單株或5株。孢囊?；啃纬少橘虢z，匍匐絲在基質上擴展蔓延并且產生新的孢囊梗束，孢囊梗壁光滑或稍粗糙，褐色，長1019(210～2800）μm、直徑14(9～20) μm，頂部膨大形成囊軸和孢子囊（圖2，A-B）。孢子囊球形或近球形（圖2，C），囊軸橢圓形或近球形，淡褐色、直徑103（60～150）μm，囊托鍥形（圖2，D）。孢囊梗束基部形成假根，假根發達，指狀分枝或根狀，褐色（圖2，E）。孢囊孢子橢圓形或近球形，黃灰色，直徑6（4～10 ）μm（圖2，F）。菌絲表生，菌絲成熟后產生大量孢囊梗和孢子囊。孢子囊形成初期呈白色（圖2，G），成熟后黑色（圖2，H），直徑158（100～220）μm。

根據病原菌的形態特征，該病菌鑒定為米根霉（Rhizopus oryzaeWent et Geerl.）。

致病性測定結果,接種后煙柄在30 ℃下保濕培養3 d后即可產生霉層。通過病原鑒定和致病性測定，確定烘烤期煙葉霉爛是由根霉菌引起的一種新的侵染性病害，命名為煙葉霉爛?。╰obacco leaf mildew rot）

圖2 米根霉的形態特征Fig. 2 .Morphological characters of Rhizopus oryzae

2.4 病原菌生長溫度測定

試驗結果表明，該菌在15～43 ℃均可生長，27℃以下或41℃以上菌絲生長明顯減緩，在29～39℃菌落形成生長良好，菌絲生長旺盛，氣生菌絲多，32～39℃菌絲生長最旺盛，并且形成大量孢子囊。10℃以下或45 ℃以上菌絲停止生長 （表1、圖3）。

米根霉（Rhizopus oryzae）生長溫度測定結果證實，32～39 ℃最適宜該菌的生長和繁殖。這一結果與烤房烘烤期煙葉霉爛的發生條件高度吻合。米根霉是一種高溫菌，在環境中普遍分布，通過氣流傳播。病菌分布于烤房內外的環境中，煙葉田間生長期和采收后入烤之前的儲放期均可帶菌。煙葉葉柄有豐富的營養和適宜的濕度，適合根霉菌孢子的生長和定殖，入烤房前由于溫度的限制，病菌無法大量繁殖。開烤后溫度和濕度一旦適合病原菌的生長和侵染，病害就會爆發為害。

表1 溫度對米根霉菌落生長的影響Tab. 1 Effect of temperature on the growth of Rhizopus oryzae colony

圖3 不同溫度培養的米根霉菌落Fig. 3 Colonies of Rhizopus oryzae cultured at various temperature levels

3 討論

研究結果首次證實烘烤期煙葉霉爛是由米根霉（Rhizopus oryzaeWent et Geerl.）引起的一種侵染性病害，該病害與其他烤壞煙葉最大的區別是由生物因子引起，可以通過對病原菌的防控而實現病害預防。據報道在田間采收前煙葉或編好的煙葉噴施百菌清、多菌靈或甲霜靈錳鋅，對紅花大金元煙葉烘烤期葉柄發霉有一定防治效果[4]，這一結果也證實病原菌侵染是烘烤期煙葉霉變的主要病因。但是,采用這一防治措施是否會造成農藥殘留尚需進一步研究。

煙葉霉變主要集中于倉儲期的煙葉霉變研究，有報道由根霉 (Rhizopussp.) 引起的倉儲期煙葉霉爛[6-7]。一般認為在烤房烘烤的高溫條件下對侵染性病害具有抑制作用。本研究結果證實烘烤期煙葉霉變的病菌具有嗜高溫的特性，在32～39℃條件下病菌生長最旺盛。煙葉變黃期溫度32～39 ℃ 和相對濕度在75%～85%的條件正適宜病菌大量繁殖和侵染，病害發生期短而擴散速度快，在短時間內能造成大量損失。

本文僅對紅花大金元煙葉烘烤期霉爛的病原進行了鑒定和發病條件研究，下一步需要進行更廣泛的調查研究。確定不同煙草品種對病害的抗性，探明病原菌的侵染來源，掌握病害發生規律，開展藥劑篩選和無公害防治技術研究。

4 結論

根據研究結果確認，福建省發生的烘烤期煙葉霉爛是一種新的侵染性病害。該病害的病原菌鑒定為米根霉（Rhizopus oryzaeWent et Geerl.）。適宜發病的溫度為32～40℃，相對濕度為75%～85%，煙草烘烤變黃期是病害的發生期。根據病害癥狀特點，將此病害命名為煙葉霉爛?。╰obacco leaf mildew rot）。

[1]謝已書. 烤壞煙原因分析及解決的技術措施[J]. 貴州農業科學, 2000,28(增刊):62-63.

[2]楊勝華,楊通華,代先強,等. 煙葉烤壞原因及對策[J].現代農業科技, 2012,(13):73-74.

[3]云南省煙草農業科學研究所. 烤煙密集型自動化烤房及烘烤工藝技術［M］. 北京:科學出版社,2012:523-525.

[4]蘇加恩，楊程，米建華，等.紅花大金元煙葉烘烤過程中葉柄發霉藥劑防效試驗[J]. 中國煙草學報,2010,16(3):64-66.

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[6]黃福新，周新華,朱桂寧,等.廣西煙倉霉變發生狀況調查及主要霉變因素探討[J].廣西農業科學，2007,38（4）:411-414.

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Identification of tobacco mildew pathogen which causes leaf rot during flue-curing

ZENG Tingying1, GU Gang2, ZHANG Shaosheng1
1 College of Plant Protection, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China;2 Fujian Institute of Tobacco Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China

Causes and disease-inducing conditions were investigated through pathogen isolation and culture, morphological identification,growth temperature and pathogenicity test. Results showed that the pathogen wasRhizopus oryzaewhose suitable growth and infection conditions being 36～40 ℃ and relative humidity 75%～85% during yellowing period. Leaf mildew and rot during flue-curing is then confirmed as a new infectious disease induced by pathogen named tobacco mildew disease.

flue-curing ; mildew and rot;Rhizopus oryzae

10.3969/j.issn.1004-5708.2014.04.013

S432 文獻標志碼：A 文章編號：1004-5708（2014）04-0065-04

中國煙草總公司福建省公司科技項目2012[043]號

曾婷英（1989—）,碩士研究生, 主要研究方向:植物病理學,Tel:0591-83789187,Email 523908869@qq.com

張紹升(1951—),教授,主要研究方向:植物病理學,Tel：0591-83789187, Email: shaoshengzhang@126.com

2013-07-11