紫外線光療抑制早期蕈樣肉芽腫皮損組織中BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表達

王 濤，劉躍華，鄭和義，左亞剛，方 凱

(中國醫學科學院 北京協和醫學院 北京協和醫院 皮膚科， 北京 100730)

紫外線光療抑制早期蕈樣肉芽腫皮損組織中BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表達

王 濤，劉躍華*，鄭和義，左亞剛，方 凱

(中國醫學科學院 北京協和醫學院 北京協和醫院 皮膚科， 北京 100730)

BCL-2是研究最早的與細胞凋亡相關的一類原癌基因。目前有關治療前后BCL-2蛋白表達變化的研究仍較少，探討治療前后BCL-2蛋白表達的變化是目前需要進一步研究的問題。STAT3是信號傳導和轉錄活化因子家族中與腫瘤關系最密切的基因之一，STAT3持續活化與腫瘤的發生發展和預后相關。CCL17和CCL27在淋巴細胞歸巢機制中起重要作用，與受體結合可使得T淋巴細胞向皮膚遷移，在蕈樣肉芽腫(Mycosis Fungoides,MF)發病機制起重要作用。本研究檢測BCL-2，STAT3，CCL17和CCL27早期MF經紫外線光療治療前后表達的變化。

1 材料與方法

1.1 材料：1)主要實驗試劑 BCL-2(工作液BCL-2-100，中杉金橋公司)；STAT3和CCL27(濃度分別為1∶50和1∶100,SANTA CRUZ公司)；CCL17(1∶1200，博奧森公司)。2)對象：24例早期蕈樣肉芽腫患者經PUVA或NB-UVB及PUVA治療緩解后聯合NB-UVB等3種治療前后48份皮損處石蠟包埋組織標本。整形外科整形者眼皮組織為陰性對照，以預實驗中陽性標本為陽性對照。

1.2 實驗方法：采用免疫組化染色法，按照試劑盒說明書操作，檢測BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表達。根據文獻，結果采用雙盲判定和評分。

1.3 統計學分析：采用SPSS 17.0 軟件進行數據分析，采用Pearson卡方檢驗，治療后陽性率與復發率之間比較采用Sprearmen相關性檢驗。

2 結果

2.1 BCL-2蛋白在治療前后皮損組織中的表達:治療前BCL-2在真皮浸潤的腫瘤性淋巴細胞中陽性表達共22例，10例(+)，9例(++)，3例(+++)，無表達2例；治療后BCL-2表達顯著降低，陽性僅12例，其中9例(+)，3例(++)，無表達12例(Plt;0.05)(圖1)。

2.2 CCL-17蛋白在治療前后皮損組織中的表達：治療前CCL-17在角質形成細胞中陽性表達共16例，15例(+)，1例(++)，無表達8例；治療后CCL-17表達顯著降低，陽性6例均為(+)，無表達18例(Plt;0.05)。

2.3 CCL-27蛋白在治療前后皮損組織中的表達：治療前CCL-27在角質形成細胞陽性表達共18例，16例(+)，1例(++)，1例(+++)，無表達6例；治療后CCL-27表達顯著降低，陽性7例均為(+)，無表達17例(Plt;0.05)。

2.4 STAT3蛋白在治療前后表皮和淋巴細胞中的表達：治療前STAT3在角質形成細胞中陽性表達共19例，15例(+)，3例(++)，1例(+++)，無表達5例；治療后STAT3表達顯著降低，陽性11例均為(+)，無表達13例(Plt;0.05)；治療前STAT3在活化的腫瘤性淋巴細胞表達共7例，6例(+)，1例(++)，無表達17例；治療后無顯著性降低，陽性3例均為(+)，無表達21例。(圖2)

圖1 BCL-2在腫瘤性淋巴細胞中陽性表達Fig 1 Expression of BCL-2 protein in the tumor lymphocytes (×200)

圖2 STAT3蛋白在治療前后表皮和淋巴細胞中的表達Fig 2 Expressions of STAT3 proteins in the keratinocytes and tumor lymphocytes

3 討論

本研究發現，紫外線光療后BCL-2的表達下降，說明光療可能通過抑制BCL-2的表達而減少親表皮的T細胞出現凋亡障礙的發生。有作者發現，UVA和UVB通過不同的機制引起細胞凋亡，P53和BCL-2表達平衡在紫外線誘導的細胞凋亡中起重要作用[1]。本研究中，UVB和PUVA組之間BCL-2表達陽性率有所下降，但UVB組中有兩例患者在治療后BCL-2表達反而增加，可能的原因是UVB并不直接降低BCL-2的表達，可能存在其他方面的作用。

本研究發現，紫外線光療后CCL17和CCL27表達下降。有研究認為，UVA抑制角質形成細胞中CCL17 mRNA表達和蛋白分泌存在劑量依賴關系可能是紫外線光療的作用機制[2]。有研究發現治療后CCL27正常或者正常上限以內有較低的復發率和較長時間的平均無病生存期，CCL27 含量在治療后較高者，更易復發[3]。

本研究結果顯示，在早期MF皮損中，表皮角質形成細胞可出現STAT3陽性表達，而僅部分的腫瘤性淋巴細胞出現陽性表達，但二者均隨病情分期加重而陽性率增高。皮膚經UVB照射后引起STAT3活化，可降低UVB引起的細胞凋亡反應，并出現隨時間增加而遞增的白細胞浸潤和增生[4]。

因此，紫外線光療可能通過以下機制治療早期MF：下調BCL-2、STAT3等抗凋亡蛋白的表達來降低早期MF皮損中腫瘤細胞的活性，來促進腫瘤細胞的凋亡；下調表皮角質形成細胞內活化的STAT3蛋白含量，減少了表皮內浸潤的T細胞的數量；下調趨化因子CCL17和CCL27的表達，從而抑制了T細胞向表皮內浸潤，較少了惡變的可能性。

[1] Zhou C, Yang Q, Trempe JP. Enhancement of UV-induced cytotoxicity by the adeno-associated virus replication proteins[J]. Biochim Biophys Acta, 1999,1444:371-383.

[2] Zheng X, Nakamura K, Tojo M,etal. Ultraviolet A irradiation inhibits thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) production by a human keratinocyte HaCaT cell line[J]. Eur J Dermatol, 2003,13:348-353.

[3] Goteri G, Rupoli S, Campanati A,etal. Lesional skin chemokine CTACK/CCL27 expression in mycosis fungoides and disease control by IFN-alpha and PUVA therapy[J]. Am J Transl Res, 2009,1:203-210.

[4] Ahsan H, Aziz MH, Ahmad N. Ultraviolet B exposure activates Stat3 signaling via phosphorylation at tyrosine705 in skin of SKH1 hairless mouse: a target for the management of skin cancer?[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2005,333:241-246.

2013-10-26

2013-12-13

*通信作者(correspondingauthor)： yuehualiu@263.net

1001-6325(2014)02-0249-02

R 758.69

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