抗凝全血不同保存環境對血細胞形態及檢測結果的影響

王勇敢，郭 萍，劉滿春

近年來，血細胞分析儀在我國廣泛應用于臨床，由于其具有檢測快速、準確的優點，明顯降低了血常規檢測中由于各種人為因素引起的誤差，最大限度地提高了血常規檢測的工作效率及準確率。雖然門診患者從采集血液標本到送檢并最終能即刻進行測定，但大部分醫院對于住院患者的血檢標本送檢不是很及時。目前，對即刻測定、常溫下放置幾小時和冷藏保存幾小時的血常規測定是否存在結果差異，反映患者的實際狀況是否準確等問題越來越受到關注，對此筆者觀察探討靜脈血樣本在不同的保存環境下對血常規檢測結果的影響，現報告如下。

1 資料與方法

1．1 儀器及試劑 BC－5800血液分析儀及其配套試劑、配套質量控制物，海爾FYL－YS－98L冰箱，乙二胺四乙酸（EDTA）K2抗凝劑真空采血管、采血針。

1．2 方法 隨機抽取某體系部隊門診健康體檢人員30名，男18名，女12名。按儀器保養要求對儀器進行全面維護并用質量控制物進行質量控制，其結果均在質量控制范圍內。標本采集與處理：在室溫使用2 ml EDTA K2抗凝真空采血管采集靜脈血，采集2份／人，立即測定后分別儲存于25℃室溫和 4 ℃冰箱內，分別于 1、2、4、6、8、12、24、48、72 h 進行測定并進行手工推片鏡檢，以立即測定結果為對照組（低溫保存標本，測定前均恢復至室溫測定）。

1．3 檢測指標 本儀器檢測報告中紅細胞（RBC），血紅蛋白含量（HGB），血小板（PLT），白細胞（WBC）計數及分類，中性粒細胞（Neu%）、淋巴細胞（Lym%）、單核細胞（Mon%）、嗜酸細胞（Eos%）、嗜堿性細胞（Bas%）為儀器直接測出，以上9項結果為本文討論的重點。

1．4 統計學處理 使用SPSS 18．0統計軟件進行處理。分別采用t和χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果與討論

2．1 血常規各項指標測定結果 對照組（0 h）數據與常溫數據組、低溫數據組比較：RBC對照組數據分別與常溫24、48、72 h 比較，差異有統計學意義（P＜0．01）；LYM%對照組數據分別與常溫24、48、72 h及低溫72 h比較，差異有統計學意義（P＜0．01）；NETU%對照組數據與常溫 72 h 比較，差異有統計學意義 （P＜0．01）； 其余數據組對比差異無統計學意義 （P＞0．05）。對比數據結果差異均在允許范圍，但隨著時間的推移低溫組數據較常溫數據更為接近即刻數據。見表1。

2．2 對WBC總數及形態分類的影響 不同保存方式72 h內WBC總數變化不明顯，是因計數時采用溶血劑完全溶解RBC和PLT，WBC膜僅部分溶解，胞質大部分溢出，整個細胞體積縮小，僅留下核和部分顆粒［1］。所以只要標本的細胞核和顆粒不發生明顯變性，則對縮小后的細胞體積影響不大。而對于WBC形態分類，無論何種保存方式，結果均會發生很小的變化；特別是常溫下，隨著時間的推移細胞形態改變越大。但對白細胞DIFF散點圖研究見圖1～4。

表1 不同時間和溫度血常規各項指標測定結果（±s）

表1 不同時間和溫度血常規各項指標測定結果（±s）

注：與 0 h 比較，△P＜0．05

保存時間 WBC（×109／L） NETU% LYM% MONO% EO% BASO% RBC（×1012／L） HGB（g／L） PLT（×109／L）0 h 5．43±1．16 55．38±3．30 34．15±1．82 7．85±1．07 2．15±1．41 0．48±0．25 5．03±0．11 148±9．42 211±44．23常溫 1 h 5．64±1．15 55．63±3．21 34．75±2．22 7．13±0．81 2．13±0．99 0．38±0．21 4．92±0．10 147±10．49 209±40．00常溫 2 h 5．59±1．21 55．68±3．38 34．40±2．41 7．20±0．99 2．20±1．22 0．53±0．26 4．90±0．11 147±9．72 207±47．56常溫 4 h 5．58±1．19 54．98±3．96 34．80±2．08 7．30±1．35 2．33±0．83 0．60±0．42 4．89±0．15 145±10．49 222±53．20常溫 6 h 5．77±1．32 55．70±3．47 34．08±2．46 7．48±1．17 2．28±0．87 0．48±0．28 4．92±0．10 146±9．42 219±47．70常溫 8 h 5．62±1．19 55．73±2．98 34．30±1．87 7．25±1．11 2．13±0．97 0．60±0．18 4．82±0．19 145±10．66 217±47．17常溫 12 h 5．66±1．16 58．03±2．29 31．95±0．87 7．35±0．72 2．13±1．08 0．55±0．26 4．94±0．09 147±9．60 209±47．88常溫 24 h 5．72±1．29 59．13±2．94 30．80±1．55△ 7．50±1．10 2．18±1．03 0．40±0．18 4．87±0．07△ 146±8．70 197±40．07常溫 48 h 5．67±1．25 59．80±2．59 30．23±1．59△ 7．68±0．90 1．75±0．90 0．55±0．17 4．82±0．05△ 145±8．64 195±43．34常溫 72 h 5．58±1．27 60．88±2．75△ 29．45±1．68△ 7．33±0．95 1．88±0．99 0．48±0．22 4．79±0．09△ 145±10．08 190±42．40低溫 1 h 5．46±1．19 55．58±3．30 33．70±1．44 7．70±0．91 2．53±1．72 0．50±0．20 5．01±0．09 148±8．96 209±43．92低溫 2 h 5．44±1．14 55．75±3．05 34．25±1．66 7．35±1．06 2．05±1．07 0．60±0．08 4．97±0．07 146±8．02 207±42．71低溫 4 h 5．45±1．13 56．00±3．19 34．00±1．82 7．25±0．87 2．18±1．01 0．58±0．22 4．95±0．08 147±8．89 206±42．02低溫 6 h 5．44±1．17 55．80±2．86 34．50±1．76 7．25±0．66 1．78±0．56 0．68±0．15 4．94±0．11 147±9．42 203±41．69低溫 8 h 5．49±1．21 55．60±3．50 34．13±2．19 7．45±0．66 2．10±0．97 0．73±0．15 4．94±0．12 147±8．58 202±42．79低溫 12 h 5．48±1．18 55．15±3．85 34．20±1．75 7．55±0．66 2．48±1．67 0．63±0．15 4．97±0．09 147±9．06 198±45．90低溫 24 h 5．51±1．20 57．20±3．45 32．50±1．31 7．45±0．75 2．33±1．63 0．53±0．15 4．92±0．05 146±8．35 193±46．43低溫 48 h 5．56±1．22 57．68±2．65 31．78±1．50 7．85±0．75 2．03±0．52 0．68±0．13 4．90±0．07 146±8．35 191±46．58低溫 72 h 5．53±1．21 58．25±2．89 31．33±0．69△ 7．50±1．22 2．30±1．21 0．63±0．05 4．88±0．09 146±9．33 184±45．71

圖1 室溫保存12 h，DIFF散點圖

圖2 室溫保存24 h，DIFF散點圖

圖3 低溫保存24 h，DIFF散點圖

圖4 低溫保存48 h，DIFF散點圖

2．3 對PLT計數的影響 從實驗數據來看：標本室溫保存4 h，PLT出現一個上升趨勢，但隨后12 h，PLT總數即出現明顯下降。然而低溫環境下，PLT的穩定性不及室溫保存。可能由于PLT離開機體內環境后由于滲透壓、溫度、抗凝劑及試管壁等影響，形態結構快速發生改變。隨著保存時間延長，一些標本出現巨大PLT和PLT聚集，還有一些PLT破壞，最終引起PLT總數減少［2］。但本文PLT減少仍在允許范圍內。

2．4 對HGB及RBC計數的影響 室溫和低溫保存標本HGB的影響很小。不過隨著時間的推移，在手工鏡檢中，室溫標本比低溫較早出現紅細胞皺縮成呈棘形或影形（對照組RBC與常溫24、48、72 h計數存在差異的原因）。

根據全國臨床檢驗操作規程［3］，用血球分析儀計數血細胞時，采集血液后在室溫中貯存不應超過4 h。但是筆者認為，還是要即刻抽血，即刻檢測才能真實反映患者機體中真實情況。特別對于需要手工鏡檢的患者，不能低溫保存標本［3］，更是要求檢測時間越早越好。如因不可抗拒的因素不能及時檢測，應根據臨床需要及時分類處理、保存。周云仙等［4，5］建議標本保存時間超過1 d后，應根據實際保存情況注明：“標本放置幾天，可能對檢測結果有影響”。

［1］劉成玉，羅春麗．臨床檢驗基礎［M］．北京：人民衛生出版社，2012．97－100．

［2］李勝發，程大林．血小板可逆聚集在全血細胞分析中的影響［J］．臨床檢驗雜志，2003，3（01）：34．

［3］葉應嫵，王毓三．全國臨床檢驗操作規程［M］．南京：東南大學出版社，2006．142．

［4］周云仙，楊大千，李雪芬，等．全血標本冰箱長時間保存對血細胞計數及白細胞分類結果的影響［J］．檢驗醫學，2005，5（3）：195－197．

［5］李建芬．臨床檢驗中不合格血液標本的原因分析［J］．中國當代醫藥，2012，19（27）：88．