鹽酸氨溴索緩釋混懸劑在犬體內的生物等效性研究

尹飛，劉宏飛，師雙雙，潘衛三（1.遼寧省腫瘤醫院藥學部，沈陽110042；2.沈陽藥科大學藥學院，沈陽110016；.江蘇大學藥學院，江蘇鎮江 21201）

鹽酸氨溴索（Ambroxol hydrochloride，AH）作為呼吸系統祛痰藥的首選藥物已被廣泛研究，并已有多種劑型上市。但尚未有AH液體緩釋制劑的研究，如能將其制備成液體緩釋制劑，將會增加其適用人群（嬰幼兒、老年患者），提高患者服用的順應性（易于服用、便于分劑量等）[1-2]。筆者自制了AH緩釋混懸劑，采用高效液相色譜（HPLC）法作為檢測方法，對AH緩釋混懸劑在犬體內的藥動學特征及與市售AH緩釋膠囊的生物等效性進行了研究，為其臨床研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

HPLC儀，包括LC-10A型輸液泵、SPD-10A型紫外檢測器（日本島津公司）；TG328B電光分析天平（上海天平儀器廠）；MD200-2電光分析天平[奧豪斯國際貿易（上海）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

AH對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100599-201203，純度：99.9%）；受試制劑：AH緩釋混懸劑（沈陽藥科大學藥學院自制，批號：20120601，規格：75 mg∶10 ml）；參比制劑：AH緩釋膠囊（常州第四制藥廠，批號：H20124211，規格：每粒75 mg）；內標鹽酸丁咯地爾（原料藥，齊魯制藥有限公司，批號：20120326，純度：99.94%）；氫氧化鈉、乙醚、鹽酸均為分析純，乙腈和甲醇均為色譜純，水為純化水。

1.3 動物

健康Beagle犬6條，♀♂各半，體質量12～15 kg，由沈陽藥科大學動物實驗室提供，使用許可證號：SYXK（遼）2003-0012。

2 方法與結果

2.1 實驗設計

采用兩制劑雙周期試驗設計。取犬6只，禁食12 h后分別灌服參比制劑或受試制劑75 mg，自由飲水，給藥4 h后統一進食，間隔時間為1周。在犬前肢靜脈處安置留置針，于給藥前取空白血，給藥后1、2、3、4、5、6、8、10、12、14、24 h取樣品血5 ml，肝素抗凝，立即3000 r/min（離心半徑13.5 cm，下同）離心10 min，分離出血漿，于－20℃下保存，待分析。

2.2 血漿樣品的處理[3-6]

取犬血漿1 ml，置于10 ml具塞玻璃試管中，加入50 μl內標水溶液（鹽酸丁咯地爾10 μg/ml），旋渦混勻30 s，加入0.01 mol/L的氫氧化鈉溶液0.5 ml，渦旋混勻30 s，加入乙醚5 ml，封口后旋渦混勻3 min，4000 r/min離心8 min；分取醚層4 ml至另一支10 ml具塞玻璃試管中，再加入0.03 mol/L的鹽酸溶液200 μl，渦旋混勻3 min，4000 r/min離心8 min；棄去醚層；取酸層20 μl注入HPLC儀進行分析。

2.3 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 5.3）-三乙胺（100∶100∶100∶0.04），流速：1.0 ml/min；檢測波長：307 nm；進樣量：20 μl；溫度：35 ℃。分別取空白血漿、空白血漿+AH+內標、血漿樣品+內標，按“2.2”項下方法處理后進樣測定，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B空白血漿+AH+內標；C.血漿樣品+內標；1.AH；2.內標Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma+AH+internal standard；C.plasma sample+internal standard；1.AH；2.internal standard

2.4 標準曲線的制備

精密稱取AH對照品適量，配制成0.5、1、2、5、10、25 μg/ml的對照品溶液。精密量取空白血漿0.9 ml，置于10 ml具塞玻璃試管中，分別精密加入上述對照品溶液100 μl制成含AH 0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.5 μg/ml的血漿樣品，按“2.2”項下方法處理后進樣測定，記錄色譜。以AH與內標的峰面積比值（y）為縱坐標、AH的質量濃度（x）為橫坐標進行線性回歸，得標準曲線方程為y＝1.345x+0.006（r＝0.9995），AH檢測質量濃度的線性范圍為0.05～2.5 μg/ml。信噪比為3時，檢測限為0.12 ng；信噪比為10時，定量限為0.4 ng。

2.5 方法回收率與提取回收率考察

按“2.4”項下方法制備含AH 0.05、0.5、2.5 μg/ml的血漿樣品，按“2.2”項下方法處理后進樣測定，記錄峰面積，代入標準曲線方法計算質量濃度，與樣品質量濃度的比值計算方法回收率；另取質量濃度為 0.05、0.5、2.5 μg/ml的AH水溶液，進樣測定峰面積，記錄色譜圖和峰面積，以相應質量濃度血漿樣品峰面積與AH水溶液峰面積的比值計算提取回收率，重復5次。回收率試驗結果見表1。

表1 回收率與精密度試驗結果（n＝5）Tab 1Results of recovery and precision tests（n＝5）

2.6 日內精密度與日間精密度考察

精密量取空白血漿0.9 ml，置于10 ml具塞玻璃試管中，分別精密加入100 μl“2.4”項下對照品溶液制備成的含AH分別為0.05、0.5、2.5 μg/ml的血漿樣品，按“2.2”項下方法處理后進樣測定，記錄峰面積，代入標準曲線方程計算質量濃度。同日內每一質量濃度測定5次考察日內精密度；每日測1次，連續測定5 d考察日間精密度，結果見表1。

2.7 藥動學研究

2.7.1 藥動學參數。取“2.1”項下各犬的血漿，按“2.2”項下方法處理、進樣測定，記錄峰面積，按內標法代入標準曲線方程計算質量濃度，繪制兩種制劑在犬體內的藥-時曲線，見圖2。

圖2 兩種制劑在犬體內的藥-時曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of 2 kinds of preparations in Beagle dogs

由于參比制劑與受試制劑均為緩釋制劑，不能直接由3p87程序判斷隔室模型，根據研究資料確立AH的隔室模型為單室模型[7-9]。采用非隔室模型計算兩種制劑的藥動學參數，結果見表2。

表2 兩種制劑在犬體內的藥動學參數（±s，n＝6）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in Beagle dog（s±s，n＝6）

表2 兩種制劑在犬體內的藥動學參數（±s，n＝6）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in Beagle dog（s±s，n＝6）

藥動學參數t1/2，h tmax，h cmax，μg/ml AUC0-24 h，μg· h/ml AUC0-∞，μg· h/ml MRT，h參比制劑4.48±0.224.33±0.522.06±0.1820.55±1.3821.33±1.378.86±0.21受試制劑4.21±0.155.00±0.001.90±0.2721.70±3.1122.49±3.199.28±0.11

2.7.2 生物等效性與生物利用度判定。對表2中數據進行雙單側t檢驗，結果受試制劑的AUC0-24h有90%可信區間在參比制劑AUC0-24h的96.6%～113.8%內；受試制劑的cmax有90%可信區間在參比制劑cmax的88.9%～106.5%內，表明受試制劑與參比制劑有生物等效性。受試制劑針對參比制劑的相對生物利用度為105.2%。

2.7.3 體內外相關性。AH口服屬于單室模型，采用W-N法計算不同時間的吸收分數（Fa），以體外累積釋放百分率（F）為自變量、體內Fa為應變量，進行最小二乘法線性回歸，求得相關方程和相關系數（r），判定體外釋放與體內吸收的相關性。結果回歸方程為Fa＝1.7035F－0.1409（r＝0.9121），表明體內外相關性較好。

3 討論

AH于244 nm和307 nm波長處有最大吸收，雖然在244 nm波長處AH靈敏度較高，但血漿雜質對藥物有明顯干擾；而307 nm波長處雖然藥物靈敏度略有降低，但由于為遠端吸收，雜質峰高降低50倍且對藥物無干擾。故最終選擇307 nm為檢測波長。

受試制劑的消除相曲線不如參比制劑平滑，應該是由于相對于參比制劑，受試制劑在腸道反離子的作用下緩慢釋放藥物，故存在部分二次吸收現象。

[1]周雅萍.2種鹽酸氨溴索制劑的人體藥動學研究[J].中國藥房，2012，23（26）：2341.

[2]范國榮，林梅，安登魁.單劑量口服鹽酸氨溴索緩釋膠囊的人體生物等效性[J].中國醫院藥學雜志，2001，21（1）：9.

[3]黃友旗，溫預關.鹽酸氨溴索口腔崩解片在健康人體的藥物動力學[J].中國組織工程研究與臨床康復，2007，11（22）：4321.

[4]程天貴.鹽酸氨溴索含片的研制及質量控制[J].中南藥學，2009，7（3）：208.

[5]張麗芳，胡曉，甘小健，等.鹽酸氨溴索口腔崩解片的相對生物利用度與生物等效性研究[J].醫藥導報，2008，27（6）：618.

[6]劉祖雄，張紅，楊曉松.鹽酸氨溴索分散片的制備與質量控制[J].醫藥導報，2011，30（6）：789.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅪⅩA.

[8]梁文權.生物藥劑學與藥物動力學[M].2版.北京：人民衛生出版社，2003：357.

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