紫杉醇脂質體與注射液在大鼠體內的血藥濃度及相關藥動學參數對比

王 杰 余 瑜 (重慶醫科大學藥學院，重慶 400016)

紫杉醇(PTX)是一種從紅豆杉屬植物中提取的具有獨特抗癌作用的天然物質〔1〕，能夠與細胞微管蛋白結合，在癌細胞分裂時誘導和促進其聚合，抑制其解聚，阻斷細胞的有絲分裂，裝配和穩定微管，從而限制癌細胞的生長。PTX抗腫瘤適應證較廣，臨床上主要用于治療卵巢癌和乳腺癌〔2〕。目前臨床上使用最多為PTX注射液，但因為PTX水溶性極差，所以目前國內外上市的PTX注射液都是以聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇作為溶媒〔3〕。然而這兩者在體內降解時能夠刺激機體釋放組胺，從而易引起過敏反應〔4〕，另外由于缺乏靶向性〔5〕，PTX注射液對人體的毒副作用較大〔6〕，因而限制了它的應用。目前，以脂質體作為載體的PTX靜脈給藥系統成為了研究熱點。20世紀90年代初，國內外對PTX脂質體的研究就取得了不錯的研究成果〔7〕，該制劑能明顯降低藥物毒性，提高機體耐受性，而且與PTX注射液相比，具有相同抗腫瘤活性。本研究比較了PTX脂質體與PTX注射液在大鼠的血藥濃度及藥動學參數，考察兩者在大鼠體內過程的差異。

1 資料與方法

1.1 材料與儀器 儀器:UV-2201型紫外-可見分光光度計，LC-3AT泵和SPD-10A(HPLC系統)紫外檢測器，由日本島津公司生產;Sage data system色譜工作站，Rheodyne 7725型液相色譜進樣器(美國)。試劑與藥品:注射用PTX脂質體(力樸素)，南京綠葉思科藥業有限公司生產;PTX注射液(紫素)，北京協和藥廠生產;PTX對照品(中國食品藥品檢定研究院);地西泮對照品(中國食品藥品檢定研究院)。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。動物:SD大鼠12只，體重(200±50)g，雌雄各半，由南京大學動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 色 譜 條 件 流 動 相:乙 腈-甲 醇-0.2 mol/L NaH2PO4(28 ∶20 ∶52，pH4.2);色譜柱:μBondapak C18 柱(4.0 mm×250 mm，10 m);流速:1.0 ml/min;檢測波長:254 nm;內標物:地西泮;柱溫:25℃。

1.2.2 血漿樣品的預處理 精密吸取100 μl內標溶液(含地西泮20 mg/L)于8 ml具塞離心管中，氮氣流下揮干，加入血漿樣品1.0 ml后旋混30 s，再加入氯仿-甲醇(4 ∶1)4.0 ml，機械旋混振蕩，離心10 min，吸取上層清液于5 ml尖底試管中，于水浴(45℃)通氮氣流揮干溶劑。殘渣物加入100 μl甲醇溶解混勻，離心，取上清液20～50 μl進樣測定。

1.2.3 藥動學實驗 將12只SD健康大鼠隨機分成PTX脂質體注射液組和 PTX注射液組，每組6只，按大鼠體重(12 mg/kg)計算給藥量，經大鼠尾靜脈緩慢推注藥品，然后分別于 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、12.0、24.0、48.0、72.0 h股動脈取血，離心5 min分離血漿。按照1.2.2項處理測定后，作高效液相色譜法(HPLC)分析，將所得數值代入標準曲線求得血漿藥物濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件行t檢驗。

2 結果

2.1 HPLC法的驗證

2.1.1 專屬性實驗 取空白血漿預處理后，在上述色譜條件下，用HPLC測定，PTX與內標地西泮的分離度符合要求，內標峰與樣品峰血漿中內源性成分對測定無干擾。

2.1.2 標準曲線測定 以PTX注射液血藥濃度(X)為橫坐標，以PTX峰面積與內標峰面積之比(Y)為縱坐標，進行線性回歸，得標準曲線:Y=0.089 5X+0.327 4(r=0.999 1，n=5)。

2.1.3 最低定量限(LCIQ)測定 配制系列低濃度血漿樣品，高效液相色譜法測定，紫杉醇最低定量限為2 ng/ml。

2.1.4 回收率精密度試驗 制備1.25、5、20 μg/ml PTX高、中、低濃度，帶入當日標準曲線計算含量，計算回收率。三種濃度的回收率為96.6% ～104.8%，相對標準偏差(RSD)均＜8.0%。日內、日間精密度 RSD均＜6.0%(n=5)。

2.1.5 穩定性試驗 在-20℃的溫度下存放PTX對照品配制的血漿標準樣品，定期進行取樣處理和測定，考察血漿樣品的穩定性，結果血漿樣品在1個月內基本穩定。

2.2 大鼠藥動學實驗

2.2.1 血藥濃度-時間曲線分析 PTX脂質體在血漿中的濃度是PTX注射液的200倍，見圖1。

2.2.2 在血漿樣品中的平均濃度比較 PTX及其脂質體在血漿樣品中的平均濃度分別為(0.21±0.11)、(48.12±9.42)C·mg-1· L-1，差異具有統計學意義(t=12.457，P＜0.001)。

圖1 PTX注射液(A)和PTX脂質體(B)的藥-時曲線圖

2.2.3 相關藥動學參數的比較 利用3p87藥動學軟件處理血藥濃度-時間數據，得到藥物動力學參數見表1。結果表明，藥-時曲線下面積(AUC)PTX脂質體比PTX大，表觀分布容積PTX脂質比PTX小，清除率PTX脂質比PTX慢。

表1 脂質體PTX和PTX注射液藥動學參數比較(s)

表1 脂質體PTX和PTX注射液藥動學參數比較(s)

參數 PTX注射液組 PTX脂質體組 t值 P值AUC0～75 10.422±2.784 17.578±2.428 4.745 0.001 AUC0～∞ 10.913±2.912 17.723±2.445 4.387 0.001 T1/2(s/h)31.2±7.2 13.6±3.4 5.414 0.001 Vc(×10-3L)5.314±1.211 1.523±1.882 4.059 0.002 Cl(s)(×10-4L)1.3±2.5 7.4±1.1 5.471 0.001

3 討論

PTX是目前臨床應用最廣泛及最有效的抗腫瘤物質之一，主要應用于乳腺癌、非小細胞癌、卵巢癌、前列腺癌等多種腫瘤的治療〔8〕，但由于PTX不溶于水的性質，目前市場上的PTX注射液均采用聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇作為混合溶媒，然而其中的聚氧乙烯蓖麻油能刺激機體產生組胺，以引起嚴重過敏反應〔9，10〕。臨床上在運用PTX注射液時普遍采用組胺受體拮抗劑和大劑量激素作為常規預處理，但對高血壓、糖尿病及潰瘍病的腫瘤患者不適用。以脂質體作為載體的PTX注射液不僅能降低藥物的毒性，機體耐受性高，而且能保持與PTX注射液相同的抗腫瘤作用，因此PTX脂質體可能改變PTX傳統的給藥方式，提高腫瘤患者的治療效果〔11〕。

PTX注射液一般采用先提取再測定的方法，提取溶劑有無水乙醚、叔丁基甲醚;流動相多采用甲醇、乙腈及水按不同比例組成，內標物質有炔諾酮或地西泮。

本研究按HPLC法〔12〕，以叔丁基甲醚為提取溶劑，以甲醇水為流動相，地西泮為內標物質，方法簡單可靠。另外本實驗中增加給藥劑量，從而減少由于藥物代謝使血藥濃度減低造成的誤差，增加了結果的可比性。

本研究結果表明，與PTX注射液相比，PTX脂質體在大鼠體內消除速度明顯減慢，而AUC大大提高，提示PTX脂質體在一定程度上延長了PTX在體內循環的時間，能夠在較長時間內保持體內血藥濃度維持較高水平，從而達到抗腫瘤的長效作用;同時，PTX脂質體的Vc和Cl均顯著降低，提示PTX脂質體中的藥物能更好地集中于腫瘤靶組織，具有較少的毒副作用。

綜上，PTX脂質體不僅使藥物在體內的濃度延長，大大改善了PTX注射液的藥動學性質，而且還具有靶向的作用。

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