羅漢果甜苷的抗衰老作用

肖 剛 陳 壯 黎為能 (右江民族醫學院臨床學院，廣西 百色 533000)

人口衰老與老年疾病發生有直接相關性，大多數老年人同時患有一種以上的疾病，由于老年病的遷延性和難愈性，使其對醫學資源連續消耗，龐大的醫療費用已經成為國家、社會和家庭的沉重負擔〔1〕。如何解決這些老年人包括一部分中老年人受衰老的困擾，是一個擺在我們面前的十分嚴峻的課題。羅漢果是廣西特產中藥，性涼、味甘、無毒，歸肺、大腸經，有潤肺止咳、涼血滑腸之功效，常用于治療肺火燥咳、咽痛失音、腸燥便秘等?，F代藥學研究發現其有止咳祛痰、保肝、降血糖、增強免疫、抗癌等多種藥理作用〔2〕。但羅漢果抗衰老的作用還未見有報道，本實驗研究羅漢果甜苷(Mog)的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1 試劑 超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20080708;丙二醛(MDA)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20080708。

1.2 藥物 Mog桂林興達制藥有限責任公司，批號:081022。

1.3 動物 清潔SPF級昆明種小白鼠，18～22 g，雌雄兼用，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，許可證號:SCXK桂2009-0002。小鼠分性別飼養于空調室內，室溫(22±2)℃，濕度(70±5)%，標準顆粒飼料喂養，自由飲水和攝食。

1.4 儀器 萬分之一克電子天平:德國賽多利斯生產;微量加樣器:德國;液體快速混合器:江西醫療器械廠;超聲細胞粉碎機:寧波新芝科器研究所;高速低溫離心機:德國Biofuge Stoucctos;CHEM-300型半自動生化分析儀，德國Bio-Asia公司生產，高壓蒸汽滅菌器，上海醫用核子儀器廠。

1.5 動物實驗方法

1.5.1 實驗分組、造模、給藥 昆明種小鼠隨機分成六組:正常組、模型組、維生素E組、Mog高、中、低三個劑量組，每組10只。正常組每天皮下注射等體積生理鹽水(1 ml/kg)，模型組、維生素E組、Mog高、中、低劑量組每天皮下注射 D-半乳糖(0.05 g/kg)。連續6 w后，模型組小鼠行動遲緩、毛發無光或脫落、反應遲鈍，呈現明顯衰老體征。造模同時對正常組、模型組灌胃等量生理鹽水;維生素 E組每天灌胃維生素E 0.05 g/kg;Mog高、中、低劑量每天灌胃Mog劑量依次為1.5、0.75、0.38 g/kg〔3〕。

1.5.2 樣本采集 血清樣本采集:實驗結束摘眼球取血。取血前禁食不禁水12 h，全血靜置2～3 h，見有血清析出后離心(4 000 r/min)分離血清，按試劑盒說明檢測血清SOD、MDA。腦組織采集:腦組織勻漿的制備 各組小鼠處死，取出腦組織，吸干，稱0.2 g左右的腦組織，冰浴下按腦組織(g):生理鹽水(ml)為1∶9比例稀釋，超聲細胞粉碎機勻漿(3 500 r/min、工作10 s間歇20 s)，所得勻漿液低溫離心(4 000 r/min)取腦組織勻漿上清按試劑盒說明測定SOD、MDA。

1.6 果蠅壽命實驗 實驗動物采用黑腹果蠅，美國野生型Oregon K品系。制備培養基，對照組用基礎培養基，Mog高、中、低劑量組培養基分別含Mog 20%、10%、5%。取24 h內羽化成蟲果蠅隨機分成對照組和Mog高、中、低三個劑量組，每組雌、雄果蠅數各100只，雌雄分裝。每4天更換培養基1次。每天定時統計死亡果蠅數，每組中半數果蠅死亡天數的算術平均數為該組的半數死亡期;每組全部果蠅死亡天數的算術平均數為該組的平均壽命;最后死亡的10只果蠅的生存天數的算術平均數為該組的最高壽命。

1.7 統計學方法 采用SPSS13.0軟件行t檢驗。

2 結果

2.1 Mog對衰老小鼠腦組織中SOD和MDA的影響 正常組SOD、MDA水平與模型組比較(P＜0.01)說明造模成功;Mog各劑量與模型組比較，腦組織 MDA水平均明顯低于模型組(P＜0.01)，Mog高、中劑量對腦組織SOD有明顯升高作用，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05)。見表1。

2.2 各組小鼠血清中SOD和MDA的變化 正常組SOD、MDA水平與模型比較差異顯著(P＜0.01)，說明造模成功;Mog高、中劑量組與模型組比較SOD水平明顯高于模型組(P＜0.01)，MDA 水平明顯低于模型組(P＜0.01)。見表2。

2.3 Mog對果蠅壽命的影響 統計結果顯示，Mog高、中、低劑量組能明顯延長果蠅平均壽命和最高壽命與對照組比較(P＜0.01)。見表3、表 4。

表1 D-半乳糖衰老模型小鼠腦組織SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

表1 D-半乳糖衰老模型小鼠腦組織SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 SOD(U/mg)MDA(nmol/mg)正常組 7.46±1.922) 4.32± 3.132)模型組 3.74±1.30 13.81±1.75維生素 E 組 6.99±2.142) 8.70±1.002)Mog 高劑量組 5.48± 1.751) 9.33 ± 0.822)Mog中劑量組 5.00±1.301) 10.57±1.502)Mog低劑量組 3.89±1.55 10.72±4.212)

表2 D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

表2 D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.01

組別 SOD(U/mg)MDA(nmol/mg)正常組 62.50±5.731) 3.62±1.721)模型組 51.07±3.23 7.84±1.70維生素 E 組 68.91±8.901) 5.58±1.21)Mog高劑量組 69.82±6.391) 5.98±1.251)Mog中劑量組 69.53±4.501) 6.20±1.651)Mog低劑量組 52.53±3.39 7.07±1.66

表3 Mog對雌性果蠅壽命的影響(s)

表3 Mog對雌性果蠅壽命的影響(s)

與對照組比較:1)P＜0.01，下表同

組別 n 劑量(%)平均壽命(d)最高壽命(d)對照組 85 - 35.6±4.5 54.5±7.5 Mog 高劑量組 88 20 45.2±5.61) 66.8±6.41)Mog 中劑量組 79 10 46.8±5.81) 65.4±6.81)Mog 低劑量組 86 5 45.5±6.21) 66.1±6.51)

表4 Mog對雄性果蠅壽命的影響(s)

表4 Mog對雄性果蠅壽命的影響(s)

組別 n 劑量(%)平均壽命(d)最高壽命(d)對照組 88 - 30.6±4.1 48.2±6.5 Mog 高劑量組 90 20 42.2±4.61) 60.5±5.81)Mog 中劑量組 85 10 40.5±6.01) 61.6±6.21)Mog 低劑量組 89 5 41.5±5.81) 60.7±5.51)

3 討論

D-半乳糖衰老模型是近10年來中藥研究中普遍采用的衰老模型，能表現出與16～24月齡衰老鼠相似的學習記憶能力下降，自由基產生增加，免疫功能退化等自然衰老過程中的變化;且其造模時間短，成模容易，重復性好〔4〕。D-半乳糖是目前廣泛采用的一種研究體內抗氧化衰老作用的方法。長期連續大劑量皮下注射D-半乳糖會導致小鼠細胞代謝紊亂，免疫應答能力下降，抗氧化酶的活性降低，誘發氧化應激，引起脂質過氧化作用的鏈式反應。氧化應激是機體在遭受各種有害刺激時，體內高活性分子如超氧陰離子自由基、羥自由基和過氧化氫等活性氧自由基(ROS)產生過多，打破了體內氧化與抗氧化體系之間的平衡關系，而導致組織損傷，引起衰老和多種疾病〔5〕。SOD作為體內重要的抗氧化酶，它能使超氧化陰離子自由基變為過氧化氫和氧離子，從而減少脂質過氧化反應，使機體組織和細胞免受損害〔6〕。MDA是體內自由基引發的脂質過氧化產物之一，其含量可間接用以判斷機體脂質過氧化損傷以及衰老的程度〔7〕;它在腦組織和血清中的含量間接地反映了自由基的反應時組織的破壞程度〔8〕。MDA既是評價衰老的重要指標之一，又可反映組織氧化的程度。腦組織SOD、MDA可以反映腦組織自由基產生和老化的程度，從而反映腦組織的功能狀態。SOD的合成是誘導性的，少量自由基可以誘導SOD的合成，而大量的自由基則可以消耗掉機體的SOD。隨年齡增長，自由基生成增多，SOD合成和活性逐漸下降，造成自由基損害的連鎖反應，提高衰老機體的SOD水平對于抗衰延壽有著重要價值〔9〕。

果蠅是一種真核多細胞生物，具有壽命短、繁殖力強高度純種、飼養簡便等優點，其代謝、生理狀況等同哺乳動物基本相似〔10〕，英國科學家還發現果蠅有類似人類的衰老基因，因此常被用于衰老實驗研究。

本實驗發現Mog可提高衰老小鼠腦組織和血清中的SOD的活性，降低了血清中和腦組織中MDA的含量。Mog可顯著延長果蠅平均壽命和最高壽命，提示其有延緩衰老的作用，其抗衰老機制與提高機體抗氧化酶活性，清除機體過量自由基，維持自由基代謝的平衡，減少自由基引起的生物膜脂質過氧化反應，保護機體的正常新陳代謝有關。

1 周坤福，管 雋.中醫藥對衰老主要相關基因影響的探討〔J〕.河南中醫，2006;26(12):80-2.

2 肖 剛，王 勤.羅漢果研究進展〔J〕.上海中醫藥雜志，2006;40(11):71-3.

3 陳 奇.中藥藥理研究方法學〔M〕.北京:人民衛生出版社，1993:937-9.

4 劉汴生.衰老過程的病理生理〔J〕.實用老年醫學，2002;16(2):59-60.

5 劉春紅，金鐘斗，韓寶瑞.平貝母多糖對D-半乳糖誘導衰老模型小鼠的抗氧化作用〔J〕.食品科學，2011;32(23):285-8.

6 龐俊偉，翟春濤.逍遙散對衰老模型小鼠血清中SOD、MDA含量影響的實驗研究〔J〕.山西中醫學院學報，2011;12(1):16-8.

7 吳立蓉，吳趨凡，黃兆勝.益壽丸對 D-半乳糖致衰老模型小鼠自由基代謝的影響〔J〕.現代中藥研究與實踐，2012;26(1):31-3.

8 葉和楊，周 俐，曾 靖，等.金邊瑞香對小鼠SOD活性及MDA含量的影響〔J〕.贛南醫學院學報，2003;23(3):246-8.

9 莫艷秀，于美娟，莫永亮.林蛙油對D-半乳糖致衰老模型小鼠的保護作用〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(9):1603-4.

10 厲曙光，白莉華，王力強，等.人參對果蠅壽命的影響及其抗氧化作用〔J〕.衛生研究，2008;38(1):104-6.