胃癌組織中H.pylori-L型感染及骨橋蛋白、基質金屬蛋白酶-2的表達

周 蕾 俞 嵐 魏 軍 于東紅

(蚌埠醫學院第一附屬醫院病理科 蚌埠醫學院病理學教研室，安徽 蚌埠 233030)

研究證實幽門螺桿菌(H.pylori)及其L型感染與胃癌的發生密切相關，骨橋蛋白(OPN)及基質金屬蛋白酶(MMPs)是近年來發現的與惡性腫瘤的浸潤、轉移密切相關的蛋白。本實驗主要探討Hp-L型感染對OPN、MMPs表達的影響以及它們在胃癌侵襲、轉移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 120例胃癌標本挑選自我科2006～2007年確診為胃癌的手術存檔蠟塊。所有蠟塊經重新切片復查，每例連續切片數張，4 μm厚進行革蘭染色及免疫組化染色。免疫組化主要試劑:MMP-2鼠抗人單克隆濃縮型抗體購自福州邁新生物有限公司。OPN鼠抗人單克隆濃縮型抗體(sc 21742)購自Santa Cruz生物科技公司(工作濃度為1∶100)。H.pylori-L多克隆抗體，由蚌埠醫學院微生物教研室幫助制作。

1.2 革蘭染色 檢測胃癌組織中H.pylori-L型感染情況，油鏡(10×100)觀察并計數，每例隨機觀察10～15個視野，取平均數;H.pylori-L型和 Hp平均數≥20為陽性，＜20或未查見H.pylori-L型和Hp為陰性，H.pylori-L型形態多樣，大小不等，有巨型體、圓球體、短棒狀等，革蘭陰性呈紅色，陽性呈紫色;Hp則呈螺旋形、“S”形或海鷗形(見圖1)。

1.3 免疫組化染色 檢測MMP-2和OPN表達，陽性染色見于腫瘤細胞的胞質內，呈棕黃色顆粒;切片中細胞陽性數≤10%為(-)，細胞陽性數＞10%為(+)。H.pylori-L型抗原免疫組化的陽性標準為:在癌巢或間質中見到棕黃色顆粒為H.pylori-L型抗原表達陽性。

1.4 判斷標準 革蘭染色H.pylori-L型檢出和免疫組化H.pylori-L型抗原表達同時陽性者定為H.pylori-L型感染陽性。

1.5 統計學方法 應用四格表資料χ2檢驗分析。

2 結果

2.1 胃癌組織H.pylori-L型感染陽性率、形態及在組織中的分布 革蘭染色切片發現H.pylori-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和間質中，亦可聚集于其中，同時可見H.pylori-L型黏附于胃癌細胞表面或位于癌細胞胞質內(見圖1)。胃癌組織中有88例革蘭染色檢出L型，檢出陽性率為73.33%(88/120)，免疫組化H.pylori-L型抗原表達陽性85例(見圖2)，其陽性率為70.83%(85/120)，革蘭染色L型檢出和H.pylori-L型抗原表達同時陽性的病例有82例(68.33%)(兩者同時陽性被定為H.pylori-L型感染陽性)。

圖1 胃癌癌巢內的Hp-L型，部分黏附于癌細胞表面(箭頭)(革蘭染色，×1 000)

2.2 胃癌組織H.pylori-L型感染、OPN和MMP-2表達與臨床病理指標之間的關系 從表1可見，胃癌中H.pylori-L型陽性、OPN和MMP-2陽性(見圖2)與腫瘤大小、癌細胞的血管侵犯、浸潤深度及淋巴結轉移相關，腫瘤直徑大于3 cm者多于小于3 cm者;侵及漿膜者多于未侵及漿膜者;累及血管者多于未累及者;發生淋巴結轉移者多于無轉移者，以上各組經統計學處理，均有統計學意義(P﹤0.05)。

2.3 H.pylori-L型感染與腫瘤組織中OPN、MMP-2表達之間的關系 H.pylori-L型感染陽性組中OPN陽性和MMP-2陽性的例數(58例和61例)高于H.pylori-L型感染陰性組(16例和15例)。兩組之間的差異有統計學意義(P＜0.005)。H.pylori-L型感染與OPN和MMP-2陽性表達率均有相關關系(r=0.27，r=0.34)。

表1 Hp-L型感染、OPN和MMP-2陽性表達與胃癌臨床病理指標之間的關系

3 討論

胃癌是我國十大惡性腫瘤之一，其發病率及死亡率均居前三位。大量的研究顯示幽門螺桿菌(Hp)感染是胃癌發病的重要原因〔1，2〕。而Hp-L型是Hp適應外界不良條件的一種自我保護形式，形態多樣性，對環境抵抗力強，對抗生素等具有較強的抵抗力〔3，4〕。

OPN是一分泌性細胞因子，自被發現以來，人們對它的認識不斷深入，目前研究〔5，6〕認為OPN參與人體多種腫瘤的轉化、侵襲、轉移過程，它在一定程度上能夠反映腫瘤的惡性程度。OPN可能是一個很好的腫瘤轉移標志物及監測腫瘤預后的指標。Denhardt等〔6〕認為，無論是細胞、動物實驗還是臨床實體腫瘤研究，均發現OPN與腫瘤轉移的關系十分密切。Angelucci等〔7〕發現當OPN的RGD序列被其受體整合素αvβ3識別或與CD44突變體結合后，可通過促進腫瘤細胞的黏附、細胞外基質的降解，抑制細胞凋亡等途徑參與腫瘤的浸潤和轉移。OPN的表達與惡性腫瘤的許多臨床特征密切相關。有研究報道，在肝癌〔8〕、乳腺癌卵巢癌〔9〕等腫瘤中，OPN的表達與預后關系密切，復發或轉移者中血或組織中的表達水平顯著升高。

MMPs家族中以MMP-2蛋白為代表，以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表面細胞外基質中的Ⅳ型、Ⅴ型膠原和明膠，然后腫瘤細胞沿著缺失的基膜向周圍浸潤，最終導致腫瘤的侵襲和轉移〔10〕。目前有研究證明許多惡性腫瘤浸潤和轉移與MMP2高表達有關〔11〕，例如在直腸癌和乳腺癌組織中均有MMP2過度表達〔12〕，并與腫瘤轉移密切相關。

本文結果說明，H.pylori-L型感染可促進胃癌的侵襲和轉移，H.pylori-L型感染可促進胃癌組織中OPN和MMP2的表達。OPN、MMP2的表達可促進胃癌的侵襲和轉移。

綜上，Hp-L型感染可導致胃癌侵襲和轉移能力增強，其機制之一可能是增加胃癌細胞侵襲和轉移相關蛋白OPN、MMP2的表達。

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2 姚永莉，張萬岱.幽門螺桿菌致病因子研究進展〔J〕.世界華人消化雜志，2002;10:455-8.

3 Brenciaglia NI，Fornara AN，ScaltritoNN，et al.Helicobacter pylori:cultivability and antibiotic susceptibility of coccoid forms〔J〕.Int Antimicrob Agents，2000;13(4):237-41.

4 Wen M，Zhang Y，Yamada N，et al.An evaluative system for the response of antibacterial therapy:based on the morphological change of Helicobacter pylori and mucosal inflammation〔J〕.Pathol Int，1999;49(4):332-7.

5 Koopermann J，Fedarko NS，Jain A，et al.Evaluation of osteopontin as biomarker for pancreatic adenocarcinoma〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2004;13(3):487-91.

6 Denhardt DT，Mistretta D，Chambers AF，et al.Transcriptional regulation of osteopontin and the metastatic phenotype:evidence for a Ras-activated enhancer in the human OPN promoter〔J〕.Clin Exp Metastasis，2003;20(1):77-84.

7 Angelucci A，Festuccia C，Gravina GL，et al.Osteopontin enhances the cell proliferation induced by the epidermal growth factor in human prostate cancer cells〔J〕.Prostate，2004;59(2):157-66.

8 Gotoh M，Sakamoto M，Kanetaka K，et al.Overexpression of osteopontin in hepatocellular carcinoma〔J〕.Pathol Int，2002;52:19-24.

9 Schorge JO，Drake RD，Lee H，et al.Osteopontin as an Adjunct to CA125 in detecting recurrent ovarian cancer〔J〕.Clin Cancer Res，2004;10:3474-8.

10 Somiari SB，Somiari RI，Heckman CM，et al.Circulating MMP2 and MMP9 in breast cancer-potential role in classification of patients into low risk，high risk，benign disease and breastcancercategories〔J〕.Cancer Int，2006;119(6):1403-11.

11 Zeng ZS，Guillem JG.Distinct pattern of matrix metalloproteinase 9 and tissue inhibitor of metalloproteinase 1 mRNA expression in human colorectal cancer and liver metastases〔J〕.Br J Cancer，1995;72:575-82.

12 ZucKer S，LysiK RM，Zarrabi MH，et al.Mr 92 ，000 typeⅣ collagenase is increased in plasma of patients with colon cancer and breast cancer〔J〕.Cancer Res，1993;53:140-6.